BLT人性化的鼠标使用一个基于干细胞的基因治疗肿瘤模型的建立

以下实验的总体目标是生成携带工程化人类免疫系统的小鼠。这是通过首先为小鼠准备手术，然后在第二步中用一块胸腺填充套管针来实现的。将 Matrigel 与 CD 34 阴性和 CD 34 阳性转导的细胞混合，然后将混合物加入套管针中。

接下来，将基质胶构建体移植到肾包膜下。最终，可以通过活体 PET 成像和物理肿瘤测量来监测基因工程 CD 8 T 细胞对目标肿瘤的排斥反应。与现有的 meth 方法（如完全神经元模型）相比，该技术的主要优点是该方法允许研究人类胸腺内的转基因人类干细胞发育，并随后对衍生谱系进行体内功效测试，证明该程序将由我们实验室的三名技术人员 Gregory Bristol、Bernard Levin 负责， 和 Sean Kim。

在此示意图中，这些研究中用于产生携带 mart 的嵌合小鼠的改良 BLT 模型概述了一种特定的 T 细胞。第 th 植入物由从自体胎肝中分离的转导和非转导的 CD 34 细胞重建。然后将一部分转导的细胞冷冻并在 4 至 6 周后注射到照射的小鼠中。

在本视频中，一旦动物因麻醉而变得迟钝，就演示了 th 活体构建的植入。首先，从臀部到肩膀，从背部中心和腹部之间剃掉每只鼠标的左侧。记录每只动物的体重后，打它们的耳朵进行编号，然后皮下注射 0.3 毫升卡洛芬到每只动物的肩膀上。

然后将鼠标放在右侧，面向左侧。现在用 PBS 用圆锉尖端冲洗 16 号癌症植入物针头的套管针。使用一对尖鼻镊子，将一块胸腺加入 PBS 培养皿中，然后将套管针与杆水平保持。

就在尖端内部吸出组织。将套管针滑到肾包膜下并注射组织是该手术最具挑战性的方面之一。接下来，有一个帮手。

使用 eend orph 外置活塞式移液器将 5 微升冷基质胶混合到一管细胞中，轻轻搅拌。保持套管针水平。在辅助者移液 matri 凝胶时，慢慢拉回杆。

混入每只小鼠的套管针中。首先，用 Betadine 擦拭动物裸露的皮肤，然后用异丙醇湿巾擦掉。两次确定皮肤下最暗的点，指示脾脏的位置。

肾脏位于脾脏背侧约 5 毫米处，使用钝镊子拾取肾脏上的皮肤。在平行于脾脏的皮肤上切开约 15 毫米长的伤口。在下面的腹膜肌肉层做一个类似的切口。

在男性中，肾脏应该是直接可见的。只需挤压腹部即可将其弹出。用左手按压腹部以保持肾脏暴露在外，女性首先使用止血钳吸取卵巢，然后拖出肾脏以帮助将器官保留在体外。

在肾包膜的后端挖一个小孔，然后将套管针滑入这个孔中并沿着肾脏滑行，直到套管针的孔口完全被肾包膜覆盖。然后用右手的小指注射组织。现在使用关闭的止血钳轻轻地将肾脏推回原位。

用双蝴蝶结在腹膜上扎一针，像钱包一样把皮肤挤起来，然后把它放在两个伤口夹里。最后，将一滴 PBS 滴在每只眼睛上，然后将鼠标侧放在一些床上用品上的笼子里。以相同的方式植入所有小鼠后，确认动物在离开之前已经恢复了趴

第一个图显示了 THI 活体植入物在人源化小鼠中的代表性图像。在该图中，显示了胸腺组织的正常发育和人 CD 4 和 CD 8 阳性 T 的生理组织分布。重组后，动物携带人类免疫系统，CD 4 和 CD 8 阳性 T 细胞分布正常。

这里显示了携带黑色素瘤肿瘤的小鼠的代表性图像。灰色区域表示 CT 扫描图像。彩色区域表示 PET 扫描检测到的肿瘤代谢活动。

在本实验中，仅 CT 扫描表明白色圆圈指示的区域内存在较大的肿瘤肿块。然而，正如体内 PET 成像所示，该区域主要由坏死组织和疤痕组织组成，这强调了 PET 成像作为评估肿瘤消退和清除的更灵敏和准确方法的实用性。在此程序之后，可以进行其他检测，例如 T 细胞、表型分析和离体激活，以回答与 T 细胞功能相关的问题。