Name: 一种实用的新的方法来提取基因组DNA保存血浆蛋白从血液采集套件 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 43 s
Description: 学习从P100血浆蛋白保存管中同时提取基因组DNA和血浆的新方法。该方法通过密度梯度离心分离白膜层，简化操作流程并提高DNA质量，实现单次采血完成双重检测，适用于基因组学和蛋白质组学研究。

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1. 样本采集
<ol>
 <li>在获得受试者充分知情同意后，采集其血液样本。每位受试者使用 P100 管（BD Diagnostics，Franklin Lake，NY，USA）采集 4 至 5 ml 血液。为便于比较，同时使用 EDTA 管采集血液。</li>
 <li>BD P100 管内含 15.8 ml 喷雾干燥的 K2EDTA 以及冻干的广谱蛋白酶抑制剂专有混合物，用于防止血液凝固并稳定血浆蛋白。管内还含有机械分离层。采集全血后，将两种采血管在室温下放置 60 分钟至过夜，直至进行后续处理。</li>
 <li>将 BD P100 管在室温下以 2,500 g 离心 15 分钟。将机械分离层上方的血浆转移至微量离心管中。</li>
 <li>将含有分离层下方压缩血液的 P100 管于 -80 °C 保存，直至开始进行 DNA 提取。</li>
</ol>
2.1 从 P100 管血液中提取（P100_DNA）
<ol>
 <li>血浆提取后，将 P100 管保存在 -80 °C 条件下。在 3 至 4 个月内，从冰箱中取出含有压缩血液的 P100 管，在 37 °C 水浴中解冻 5 分钟（图 1A）。去除位于分离层上方的任何残留血浆。在 P100 管的分离层上方加入 2 ml 17% 蔗糖溶液（实验室内部测试的梯度溶液——未发表数据）（图 1B）。在室温下以 2,500 g 离心 20 分钟；此过程将机械分离层推至管顶，并形成包含白膜层在内的三层溶液（图 1C）。使用无菌的弯头金属回形针手动取出分离层（图 1D）。</li>
 <li>从每根管中取出机械分离层后（图 1D），移除并弃去上层的蔗糖溶液。将中间层（即白膜层，BC 层）转移至一支无菌的 15 ml 锥形管中。加入磷酸盐缓冲液（PBS）使白膜层体积达到 3 ml。使用 Qiagen Puregene 血液试剂盒中的试剂，按照制造商推荐的方法提取白膜层中的 DNA；但离心速度采用 2,500 g（而非 2,000 g）。</li>
 <li>为裂解并去除红细胞（RBC），向 3 ml 白膜层中加入 9 ml 红细胞裂解液。轻轻颠倒混匀各管数次，在室温下孵育 10 分钟，期间偶尔轻柔颠倒。在 2,500 g 条件下离心 5 分钟，弃去上清液。向每管中残留的沉淀加入 3 ml 细胞裂解液，涡旋振荡 15 秒。再加入 1 ml 蛋白沉淀液，涡旋振荡 15 秒。</li>
 <li>在 2,500 g 条件下离心 5 分钟，将上清液转移至另一支含有 3 ml 100% 异丙醇的新鲜 15 ml 锥形管中。将新管颠倒 10 次，然后在 2,500 g 条件下离心 3 分钟。弃去上清液，加入 1 ml 70% 乙醇。轻轻颠倒锥形管数次，以松动并清洗 DNA 沉淀。在 2,500 g 条件下离心 1 分钟。将沉淀在室温下干燥 3 分钟（将管倒置），然后加入 250 µl 重悬溶液，在 37 °C 下孵育 10 分钟以溶解 DNA，随后转移至预先标记的 1.7 ml 微量离心管中。将管保存在 -80 °C，直至使用。</li>
</ol>
2.2 从EDTA抗凝管血液中提取DNA（EDTA_DNA）
<ol>
 <li>用于常规免疫血液学检测的全血采集于喷雾涂有10.8 mg K2EDTA的塑料真空采血管中，并储存于-80 °C。由于这些试管不含机械分离装置，因此DNA提取过程不包括涉及机械分离的步骤（2.1.1和2.1.2）。</li>
 <li>在血液储存后3至4个月内，使用KingFisher Flex（Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA）进行DNA提取。该系统是一种基于磁性颗粒技术的自动化DNA提取系统，包括细胞裂解/DNA结合、多次洗涤步骤以及DNA洗脱。</li>
 <li>DNA提取所用试剂盒为KingFisher Flex 24 DNA Blood kit（Qiagen, Germany）。</li>
</ol>
3. DNA 定量与质量评估
通过PicoGreen法、光谱学和电泳相结合的方法，对基因组DNA的数量、质量和完整性进行了评估。
<ol>
 <li>基因组DNA的浓度通过Nanodrop和Picogreen定量法测定。</li>
 <li>纯度通过Nanodrop分光光度计测得的260/280比值确定。</li>
 <li>取500 ng样品上样至1%琼脂糖凝胶，以评估DNA的完整性（降解情况）。</li>
</ol>
4. 基因分型检测与质量控制
<ol>
 <li>随机选取五个 P100_DNA 及其对应的 EDTA_DNA 样本，使用定制的 Immunochip（Immuno DNA 分析微珠芯片）进行进一步分析。Immunochip 是一种 Infinium 基因分型芯片，包含 196,524 个多位点基因多态性位点，专为免疫遗传学研究设计5。</li>
 <li>对于每个样本，取 200 ng DNA 进行扩增、片段化、沉淀，并重悬于适当的杂交缓冲液中。</li>
 <li>变性后的样本在 48 °C 下与 Immunochip 杂交，时间不少于 16 小时。</li>
 <li>杂交完成后，对 Immunochip 进行单碱基延伸反应并染色处理。</li>
 <li>随后使用 Illumina Hiscan 微珠阵列扫描仪对 Immunochip 进行成像，并将标准化的微珠信号强度数据导入 Illumina GenomeStudio 软件，转换为基因型。基因型的判读采用 GenomeStudio 的自动判读算法。质量控制包括剔除基因分型成功率 &lt;95% 的单核苷酸多态性（SNP）位点。</li>
 <li>SNP 分型成功率用于评估 Immunochip 检测的效率，其计算方式为：芯片上所有检测位点（每张芯片编码 196,524 个 SNP）中，获得足够信号强度和质量以完成自动化基因型判读的位点所占百分比。高质量 DNA（A260/A280 比值 ≥1.8 且无降解）预期应达到与 Immunochip 检测中所含 HapMap 对照 DNA 相当或更高的分型成功率。质量控制要求在每套数据集中剔除分型成功率 &lt;95% 的 SNP 位点。</li>
</ol>

<ol><li>Yi, J., Kim, C., Gelfand, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+intrinsic+proteolytic+activities+moderates+preanalytical+variability+and+instability+of+human+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Proteome+Research%22%5BJournal%5D)">Inhibition of intrinsic proteolytic activities moderates preanalytical variability and instability of human plasma.</a> Journal of Proteome Research. 6, 1768-1781 (2007).</li>
<li>Garg, U. C., Hanson, N. Q., Tsai, M. Y., Eckfeldt, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+rapid+method+for+extraction+of+DNA+from+fresh+and+cryopreserved+clotted+human+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Simple and rapid method for extraction of DNA from fresh and cryopreserved clotted human blood.</a> Clinical Chemistry. 42, 647-648 (1996).</li>
<li>Salazar, L. A., Hirata, M. H., Cavalli, S. A., Machado, M. O., Hirata, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+procedure+for+DNA+isolation+from+fresh+and+cryopreserved+clotted+human+blood+useful+in+clinical+molecular+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Optimized procedure for DNA isolation from fresh and cryopreserved clotted human blood useful in clinical molecular testing.</a> Clinical Chemistry. 44, 1748-1750 (1998).</li>
<li>Xu, R., Ye, P., Luo, L., Wu, H., Dong, J., Deng, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+efficient+method+for+DNA+purification+from+samples+of+highly+clotted+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">A simple and efficient method for DNA purification from samples of highly clotted blood.</a> Molecular Biotechnology. 46, 258-264 (2010).</li>
<li>Cortes, A., Brown, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Promise+and+pitfalls+of+the+Immunochip%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Promise and pitfalls of the Immunochip.</a> Arthritis Research & Therapy. 13, 101(2011).</li>
<li>Basuni, A. A., Butterworth, L. A., Cooksley, G., Locarnini, S., Carman, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+efficient+extraction+method+from+blood+clots+for+studies+requiring+both+host+and+viral+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Viral+Hepatitis%22%5BJournal%5D)">An efficient extraction method from blood clots for studies requiring both host and viral DNA.</a> Journal of Viral Hepatitis. 7, 241-243 (2000).</li>
<li>Kanai, N., Fujii, T., Saito, K., Tokoyama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+simple+method+for+preparation+of+genomic+DNA+from+easily+obtainable+clotted+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Rapid and simple method for preparation of genomic DNA from easily obtainable clotted blood.</a> Journal of Clinical Pathology. 47, 1043-1044 (1994).</li>
<li>Adkins, K. K., Strom, D. A., Jacobson, T. E., Seemann, C. R., O'Brien, D. P., Heath, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utilizing+genomic+DNA+purified+from+clotted+blood+samples+for+single+nucleotide+polymorphism+genotyping%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Pathology+%26+Laboratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">Utilizing genomic DNA purified from clotted blood samples for single nucleotide polymorphism genotyping.</a> Archives of Pathology & Laboratory Medicine. 126, 266-270 (2002).</li>
<li>Siafakas, N., Burnett, L., Bennetts, B., Proos, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonenzymatic+extraction+of+DNA+from+blood+collected+into+serum+separator+tubes%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Nonenzymatic extraction of DNA from blood collected into serum separator tubes.</a> Clinical Chemistry. 41, 1045-1046 (1995).</li>
<li>Everson, R. B., Mass, M. J., Gallagher, J. E., Musser, C., Dalzell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraction+of+DNA+from+cryopreserved+clotted+human+blood%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Extraction of DNA from cryopreserved clotted human blood.</a> BioTechniques. 15, 18-20 (1993).</li>
<li>Se Fum Wong, S., Kuei, J. J., Prasad, N., Agonafer, E., Mendoza, G. A., Pemberton, T. J., Patel, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+DNA+isolation+from+clotted+blood+extricated+rapidly+from+serum+separator+tubes%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chem%22%5BJournal%5D)">A simple method for DNA isolation from clotted blood extricated rapidly from serum separator tubes.</a> Clin. Chem. 53, 522-524 (2007).</li>
<li>Garg, U. C., Hanson, N. Q., Tsai, M. Y., Eckfeldt, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+rapid+method+for+extraction+of+DNA+from+fresh+and+cryopreserved+clotted+human+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chem%22%5BJournal%5D)">Simple and rapid method for extraction of DNA from fresh and cryopreserved clotted human blood.</a> Clin. Chem. 42, 647-648 (1996).</li>
<li>Salazar, L. A., Hirata, M. H., Cavalli, S. A., Machado, M. O., Hirata, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+procedure+for+DNA+isolation+from+fresh+and+cryopreserved+clotted+human+blood+useful+in+clinical+molecular+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chem%22%5BJournal%5D)">Optimized procedure for DNA isolation from fresh and cryopreserved clotted human blood useful in clinical molecular testing.</a> Clin. Chem. 44, 1748-1750 (1998).</li>
<li>Matheson, L. A., Duong, T. T., Rosenberg, A. M., Yeung, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+sample+collection+and+storage+methods+for+multicenter+immunologic+research+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Assessment of sample collection and storage methods for multicenter immunologic research in children.</a> Journal of Immunological Methods. 339, 82-89 (2008).</li>
<li>Xu, R., Ye, P., Luo, L., Wu, H., Dong, J., Deng, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+efficient+method+for+DNA+purification+from+samples+of+highly+clotted+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A simple and efficient method for DNA purification from samples of highly clotted blood.</a> Mol. Biotechnol. 46, 258-264 (2010).</li>
<li>Polychronakos, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fine+points+in+mapping+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Fine points in mapping autoimmunity.</a> Nature. 43, 1173-1174 (2011).</li>
<li>Cooper, J. D., Simmonds, M. J., Walker, N. M., Burren, O., Brand, O. J., Guo, H., Wallace, C., Stevens, H., Coleman, G., Franklyn, J. A., Todd, J. A., Gough, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seven+newly+identified+loci+for+autoimmune+thyroid+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Seven newly identified loci for autoimmune thyroid disease.</a> Human Molecular Genetics. , (2012).</li>
</ol>

未声明任何利益冲突。

许多人类疾病具有遗传因素，探索人类疾病的遗传基础需要越来越多的高质量DNA。遗传学研究中最常用的DNA来源是抗凝全血。由于大多数临床实验室在表型结果调查中首先进行生化、血清学和病毒学检测，血液通常被采集到血浆管中。在血浆采集完成后，剩余的压缩血液通常会被丢弃。因此，当需要进行遗传学研究或检测DNA时，必须对同一患者再次采血。而这些被丢弃的压缩血液实际上是一种潜在的DNA来源，因为其中含有白细胞。因此，利用血浆管中的压缩血液可以更高效地使用已采集的血样，无需额外采血或召回患者进行二次抽血。
已有多种方法用于从凝固或凝块血液的白细胞中提取DNA6-10。这些方法的大多数挑战与血浆采集管的设计有关。早期的血浆采集管含有由凝胶制成的分离层（凝胶分离层），在离心后形成屏障，将血细胞（位于分离层下方）与血浆（位于分离层上方）分隔开。为防止血细胞被凝胶材料污染，必须首先小心地将分离层从采集管中移除11。随后需对血凝块进行破碎，以确保高效提取DNA。然而，破碎过程常导致血液样本显著损失，并降低DNA得率。为减少样本损失并优化操作流程，曾采用小孔径滤网通过...

<table><tbody><tr><td>BD P100 管</td><td>BD Diagnostics</td><td>366448</td><td></td></tr><tr><td>EDTA 管</td><td>BD Diagnostics</td><td>367863</td><td></td></tr><tr><td>蔗糖</td><td>Sigma</td><td>S9378</td><td></td></tr><tr><td>回形针</td><td>办公用品</td><td></td><td></td></tr><tr><td>15 ml 管</td><td>Corning</td><td>430052</td><td></td></tr><tr><td>红细胞 (RBC)</td><td>Qiagen</td><td>158389 (试剂盒)</td><td></td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液 (PBS)</td><td>Thermo Scientific</td><td>SH30256.01</td><td></td></tr><tr><td>BioSprint 96 DNA 血液试剂盒 (48)</td><td>Qiagen</td><td>940054</td><td></td></tr><tr><td>1.7 ml 微量离心管</td><td>Axygen</td><td>MCT-175-C</td><td></td></tr><tr><td>人类免疫 DNA 分析微珠芯片试剂盒</td><td>Illumina</td><td>WG-352-1001</td><td></td></tr><tr><td>微珠阵列读取仪</td><td>Illumina</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>GenomeStudio 软件</td><td>Illumina</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

一种用于从血液采集套件中提取基因组dna并同时保存血浆蛋白的实用且新颖的方法

A Practical and Novel Method to Extract Genomic DNA from Blood Collection Kits for Plasma Protein Preservation

血液的细胞成分或液体成分均可用于实验室检测。使用不同的采血管可决定所分析的血液成分类型（全血、血浆或血清）。研究人类疾病遗传基础的实验室通常以含EDTA的真空采血管采集的抗凝全血作为遗传学/基因组学分析的DNA来源。由于大多数临床实验室在表型结果研究中，首先进行生化、血清学和病毒学检测，因此也会使用含肝素的采血管（血浆管）采集抗凝血液。因此，当需要同时平行分析基因组和蛋白质组数据而获取DNA和血浆时，通常会分别采集EDTA管和肝素管的血液样本。如果能够使用单一采血管采集血液，并同时用于血浆和DNA的提取，则该方法将优于现有方法。在提取血浆后，利用剩余的浓缩血细胞作为基因组DNA的替代来源，可减少处理的血样量，降低每位患者所需的采血次数，最终节省时间和资源。
BD P100 血液采集系统用于血浆蛋白保存，是对以往血浆或血清采集管的改进方法1，旨在稳定血液中的蛋白质成分，从而更有利于从人血中发现蛋白质生物标志物并开展蛋白质组学实验。BD P100 采血管含有 15.8 ml 喷雾干燥的 K2EDTA 以及冻干的专有广谱蛋白酶抑制剂混合物，以防止血液凝固并稳定血浆蛋白。此外，该采血管还包含一种机械分离器，在离心后可在血浆与细胞沉淀之间形成物理屏障。目前已有少数方法用于从旧式血浆管中采集的凝血样本中提取 DNA2-4。这些方法面临的主要挑战与管内分离材料的类型（凝胶分离剂）有关，包括难以回收凝固的血液、破碎或分散血块操作不便，以及分离凝胶阻碍血块提取等问题。
我们介绍了首个从BD P100新型采血管中提取并纯化基因组DNA的方法。我们将P100管中获得的DNA样本质量与EDTA管中的样本进行了比较。该方法简单高效，主要包括以下四个步骤：1）使用带有机械分离器的血浆采集管BD P100（BD Diagnostics，美国马里兰州斯帕克斯）进行血液采集；2）利用蔗糖溶液与无菌回形针金属钩的组合去除机械分离器；3）分离含有白细胞的白膜层；4）采用常规商用DNA提取试剂盒或类似的标准方案，从白膜层中提取基因组DNA。

DNA 质量评估与浓度测定
P100_DNA 的得率显著低于 EDTA_DNA（表 1 和 表 2）。P100_DNA 和 EDTA_DNA 样本组的 DNA 纯度（以 260/280 比值表示）相似（表 1 和 表 2）。每组样本内的 DNA 质量相对均一，尽管在 EDTA_DNA 样本中可见一定程度的降解，表现为轻微拖尾（图 2）。表现出更明显降解迹象的 EDTA_DNA 样本其 DNA 浓度也有所降低。
基因分型
比较了EDTA_DNAs和P100_DNAs的基因分型检出率。两者均表现出相似的检出率，且均与内部HapMap对照DNA相当（表3）。
...

我们正在描述一种从用于血浆/血清学检测的全血样本中分离基因组DNA的新方法。在采集血浆后，通常会丢弃剩余的浓缩血液。我们的新方法相较于现有技术具有显著改进，可在单次采血后同时获得DNA和血浆，无需额外采集血液样本。

一种用于从血液采集套件中提取基因组DNA并同时保存血浆蛋白的实用且新颖的方法

实验室检测可针对血液的细胞成分或液体成分进行。使用不同的采血管可决定所获取的血液成分……

本视频将介绍一种实用且新颖的方法，用于从新型 BDP 100 血浆蛋白质保存系统（称为 P 100 管）中提取基因组 DNA。过去，从血清或血浆管中提取 DNA 是一种相当常见的操作，但将这种新型 P 100 管与本文所述提取方法相结合，提供了一种更简便的新途径，能够以更少的操作步骤获得质量更高的 DNA。P 100 管内壁涂有 EDTA 钾盐和蛋白酶抑制剂。这可以防止凝血并稳定血浆蛋白。采集血液时使用此类试管，目的是在离心后获取用于检测的血浆。P 100 管中的血液会根据密度不同分离成若干层：顶部为血浆，底部为红细胞，中间为白细胞。位于这两层之间的淡黄色层。这些试管通常主要用于获取血浆。利用该血浆可进行多项检测，如抗体水平和蛋白质浓度测定。通常会弃去血沉棕黄层，但如本视频所示，其中含有足量的DNA，可用于多项分析，包括测序、基因分型、生物标志物鉴定等。P100管由三个主要部分组成：管帽、管体和分离器。机械分离器会迁移至血沉棕黄层上方位置。为了获得血沉棕黄层，需要增加分离器到血沉棕黄层的距离。这可以通过添加17%蔗糖来实现。通常情况下，血沉棕黄层会随P 102一同被丢弃，但如本视频所示，在从-80℃冰箱中取出P 100管之前，完全可以从该层轻松获取足量的DNA，用于进行多项分析检测。将水浴预热至 37 摄氏度，将每支 P 100 管放入水浴中，孵育约 5 分钟以完全融化所有样本。待所有样本完全融化后，需移除分离层上方残留的任何血清。随后，在分离层上方加入 5 毫升 17% 蔗糖溶液。加入蔗糖后，将所有试管在 2,500 ×g 条件下离心 20 分钟。此时分离层已位于管子顶部，并与血沉棕黄层分离，可轻松移除。用化学擦拭纸喷洒70%乙醇，并通过彻底擦拭整个表面来对纸夹钩进行灭菌。用无菌的纸夹夹住P 100管，使其呈45度角。轻轻向上拉动分离器边缘，同时将其引导至生物危害袋中，开始将分离器从管中取出。分离器取出后，尽可能去除 17% 蔗糖层，但不要扰动白膜层或红细胞层，此时白膜层应位于试管最上层。将此层转移至一个新的已标记的 15 毫升锥形管中。每管所移除的白膜层体积可能不同，但应少于 3 毫升。为了使所有离心管的体积归一化，需加入足量的磷酸盐缓冲液（PBS），使每管体积达到 3 毫升。现在所有血沉棕黄层已悬浮于相同体积的溶液中，必须通过加入 9 毫升红细胞裂解液（RBC lysis solution）去除残留的红细胞。接下来，在室温孵育10分钟期间，反复倒置离心管数次，以分离裂解的红细胞与血沉棕黄层。在2,500 ×g条件下离心5分钟，形成用于提取DNA的沉淀。将上清液倒入液体生物危害废物容器中，每管中保留少量液体，以便重新悬浮沉淀。涡旋振荡离心管，使沉淀脱离管壁并充分重悬。加入3毫升细胞裂解液，剧烈涡旋至少10秒。细胞裂解后，蛋白质和DNA已游离悬浮于溶液中，

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科研

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生物学

一种实用的新的方法来提取基因组DNA保存血浆蛋白从血液采集套件

microRNA（miRNA）是具有组织特异性的微小非编码RNA，可调控基因表达，有望成为肺癌早期检测的理想候选标志物。在本视频展示的实验方案中，我们将从患者血液样本中分离microRNA，用于肺癌的早期筛查。...

miRNA 提取：一种从血浆样本中提取 miRNA 的方法

本视频介绍了使用有机提取法结合玻璃纤维柱富集技术，从结直肠癌患者血浆样本中提取循环microRNA的方法。miRNA在血清和血浆等生物体液中具有良好的稳定性，使其成为癌症诊断、预后评估以及治疗决策与监测的理想循环生物标志物。该方法将有助于发现能够预测患者临床结局的新型循环生物标志物。...

循环miRNA提取：通过有机提取和小RNA富集从血浆样本中分离miRNA的方法

本视频介绍了一种基于二氧化硅膜的方法，用于从人血浆样本中分离循环游离DNA（cfDNA）。cfDNA是癌症诊断和评估的一种有前景的生物标志物。...

循环游离DNA（cfDNA）的分离：一种基于二氧化硅膜的方法从癌症患者血浆中提取cfDNA

关键词：循环游离DNA，cfDNA，血浆，癌症，二氧化硅膜，提取

本视频演示了一种利用磁性玻璃颗粒（MGPs）从全人血中提取核酸的技术——MGPs是表面包被二氧化硅的小型磁珠。通过裂解缓冲液裂解血细胞后，释放出的核酸会结合到包被二氧化硅的MGPs表面，从而从样本中分离出核酸分子。...

一种利用磁性玻璃微粒介导的血液核酸提取技术

高通量、自动化从临床样本中提取 DNA 和 RNA 的方法——基于通用液体处理机器人上的 TruTip 技术

关键词：DNA 提取，RNA 提取，临床样本，高通量，自动化，TruTip 技术，液体处理机器人

本文介绍一种简单快速的基于纸张的DNA提取方法，用于从全血中提取HIV前病毒DNA，并通过定量PCR进行检测。该方法可拓展应用于其他遗传标志物的检测，或结合其他扩增技术使用。...

核酸过滤分离：一种简单快速的DNA提取方法

本文描述了采用实时PCR方法对血清或血浆DNA进行拷贝数变异分析的过程。该方法适用于预测去势抵抗性前列腺癌患者的药物耐药性，但也可为其他疾病提供有价值的信息。...

使用实时 PCR 检测血清和血浆中的拷贝数

本方案详细介绍了在临床试验现场可实际应用的高质量外周血单个核细胞（PBMC）和血浆生物样本的制备方法，可用于转化生物标志物分析。...

临床试验现场单次采血制备外周血单个核细胞团块及血浆用于生物标志物分析

本文中，我们介绍了一种非侵入性液体活检技术的详细方案，包括血液采集、血浆和白细胞层分离、游离DNA（cfDNA）与种系DNA提取、cfDNA或种系DNA的定量，以及cfDNA片段富集分析。...

癌症患者血浆样本中游离DNA的检测

液体活检已彻底改变了我们进行肿瘤学转化研究的方式，其中样本采集、质量和储存是其成功应用于临床的关键步骤。本文介绍了一种标准化且经过验证的下游游离DNA检测应用方案，可适用于大多数转化医学研究实验室。...

一种用于下游游离DNA检测的标准化液体活检预分析方案

本方案提供了外周血单个核细胞采集、保存和复苏的简易指南，适用于流式细胞术和RNA测序等后续分析与实验流程。同时演示了血浆和白膜层的收集方法。...

从全血中分离并低温保存高活力人外周血单个核细胞：初学者指南

学习从P100血浆蛋白保存管中同时提取基因组DNA和血浆的新方法。该方法通过密度梯度离心分离白膜层，简化操作流程并提高DNA质量，实现单次采血完成双重检测，适用于基因组学和蛋白质组学研究。

一种用于从血液采集套件中提取基因组DNA并同时保存血浆蛋白的实用且新颖的方法

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