Name: 该生物耦合和重新布置 89锆DFO标记的抗体 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-02-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: 学习使用锆-89和DFO螯合剂进行抗体放射性标记的方法，通过生物偶联和尺寸排阻色谱纯化制备放射免疫偶联物，并在小鼠肿瘤模型中进行PET成像以评估体内分布和靶向效果。

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作者感谢 Thomas Reiner 教授、Jacob Houghton 博士和 Serge Lyaschenko 博士的有益讨论。&#160;

所有所述的体内动物实验均按照纪念斯隆-凯特琳癌症中心机构动物照护与使用委员会（IACUC）批准的方案及伦理准则进行。
1. DFO-NCS 与 J591 的偶联
<ol>
	<li>在1.7 ml的微量离心管中，用1 ml的1×磷酸盐缓冲液（pH 7.4）或0.5 M HEPES缓冲液（pH 7.4）配制浓度为2–5 mg/ml的J591溶液。</li>
	<li>将DFO-NCS溶于无水DMSO中，使其浓度达到5–10 mM（3.8–7.6 mg/ml）。通过超声或涡旋充分混匀，以促进完全溶解。</li>
	<li>通过逐次加入少量（&#60; 10 µl）0.1 M Na2CO3溶液，将J591溶液的pH调节至8.8–9.0。</li>
	<li>当抗体溶液pH达到目标范围后，加入DFO-NCS溶液，使其摩尔量相对于双功能螯合剂过量3–4倍。
	<ol>
		<li>例如，向1 ml浓度为2 mg/ml的J591抗体溶液（13.3 nmol J591）中加入4–5 µl浓度为10 mM（7.6 mg/ml）的DFO-NCS溶液（40.4 nmol DFO-NCS）。最终水相反应体系中DMSO的体积分数不得超过2%（v/v）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将反应体系置于振荡加热金属块上，在37 °C、350 rpm条件下孵育30分钟。</li>
	<li>在37 °C孵育1小时后，使用预装的一次性尺寸排阻脱盐柱（截留分子量为50,000），以0.5 M HEPES缓冲液（pH 7.4）作为洗脱液，纯化所得的免疫偶联物。此步骤可获得2 ml的J591-DFO偶联产物溶液。</li>
	<li>使用紫外-可见分光光度计测定J591-DFO偶联物的浓度。</li>
	<li>若需要更高浓度的偶联物，可使用截留分子量为50,000的离心过滤装置对J591-DFO溶液进行浓缩。</li>
	<li>将完成的J591-DFO免疫偶联物溶液避光保存于-20 °C。
	 
	注：本步骤可作为实验流程的合理暂停点。</li>
</ol>
2. 使用89Zr对J591-DFO进行放射性标记
警告：本实验方案的此步骤涉及放射性物质的操作与处理。在执行这些步骤或进行任何其他放射性相关工作之前，研究人员应咨询所在机构的辐射安全部门。应采取一切可能的措施，以尽量减少电离辐射的暴露。&#160;
注意：为了规范放射性化学记录，在以下方案的步骤 2.2-2.13 前后，应使用活度计测量并记录样品中放射性活度。这将有助于准确计算放射化学产率和比活度。
<ol>
	<li>在 200 µl pH 7.5 的 0.5 M HEPES 缓冲液中，溶解 0.5–2.0 mg 的 J591-DFO，配制成溶液。</li>
	<li>用移液器吸取适量的 89Zr4+ 储备液（通常以 1.0 M 草酸溶液提供），使其放射性活度为 1.0–6.0 mCi（37–222 MBq），加入 2 ml 塑料螺口微量离心管中。用 1.0 M 草酸将该溶液调整至总体积为 300 µl。</li>
	<li>使用 1.0 M Na2CO3 将 89Zr4+ 溶液的 pH 调整至 6.8–7.5。先向 89Zr4+ 溶液中加入 250 µl 的 1.0 M Na2CO3，随后逐次加入少量（&#60; 10 µl）碱液，直至达到目标 pH。</li>
	<li>将所需量的 pH 已调整的 89Zr4+ 溶液加入第 2.1 步制备的 J591-DFO 溶液中。</li>
	<li>检测放射性标记反应混合物的 pH，确保其处于 6.8–7.5 的目标范围内。</li>
	<li>将放射性标记反应混合物在室温下于振荡加热模块中以 350 rpm 振荡孵育 60 分钟。</li>
	<li>孵育 60 分钟后，采用放射性薄层色谱（radio-TLC）测定反应的放射性标记产率。
	<ol>
		<li>取 1 µCi 的放射性标记反应混合物点样于硅胶浸渍的 TLC 条上。待样品干燥后，使用含 50 mM DTPA（pH 5.5）的流动相展开 TLC，再用放射性 TLC 扫描仪分析 TLC 条。89Zr4+ 与 J591-DFO 结合物将停留在原点（Rf &#60; 0.1），而游离的 89Zr4+ 阳离子会被 DTPA 螯合，并随溶剂前沿迁移（Rf &#62; 0.9）。</li>
		<li>通过积分放射色谱图，将 Rf 0.0–0.1 范围内峰面积除以总峰面积，再乘以 100，计算放射性标记产率。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>若放射性标记产率足够高（通常理论比活度 &#62;2 mCi/mg），则加入 5 µl 的 50 mM DTPA（pH 5.5）终止反应。</li>
	<li>使用预装的一次性尺寸排阻脱盐柱（截留分子量为 50,000），以 0.9% 无菌生理盐水含 5 mg/ml 原儿茶酸或 0.25 M 醋酸钠缓冲液（pH 5.5）含 5 mg/ml 原儿茶酸作为洗脱液，对所得免疫偶联物进行纯化。此步骤可获得 2 ml 的 89Zr-DFO-J591 放射性免疫偶联物溶液。</li>
	<li>纯化后，按照第 2.7 步所述方法，采用放射性 TLC 检测 89Zr-DFO-J591 的放射化学纯度。</li>
	<li>通过将初始加入抗体溶液的放射性活度与纯化后分离得到的 89Zr-DFO-J591 放射性免疫偶联物的放射性活度进行比较，计算整体放射性标记产率。</li>
	<li>通过将纯化后分离得到的 89Zr-DFO-J591 放射性免疫偶联物的放射性活度除以放射性标记反应中 DFO-J591 的初始质量，计算最终比活度。</li>
	<li>若需要更高浓度，可使用截留分子量为 50,000 的离心过滤装置浓缩 89Zr-DFO-J591 溶液。 
	注：最终纯化步骤中使用的原儿茶酸是一种放射性保护剂，用于减少因辐射分解导致的抗体降解46。虽然 89Zr-DFO-J591 放射性免疫偶联物可在 4 °C 下储存最多 48 小时，但不推荐长期储存。若需储存，应使用含 5 mg/ml 原儿茶酸的 0.25 M 醋酸钠缓冲液（pH 5.5）作为储存缓冲液，以降低次氯酸盐介导的辐射分解风险47。</li>
</ol>
3. 使用 89Zr-DFO-J591 进行 体内 PET 成像
警告：与第2节方案相同，本方案步骤涉及放射性物质的操作与处理。在执行这些步骤前，研究人员应咨询所在机构的辐射安全部门。应采取一切可能的措施，以尽量减少电离辐射的暴露。
<ol>
	<li>在雄性裸鼠中，皮下植入 5 × 106 个 LNCaP 前列腺癌细胞，并使其生长至体积为 100–150 mm3 的异种移植瘤（接种后 3–4 周）。44</li>
	<li>将 89Zr-DFO-J591 放射性免疫结合物用无菌 0.9% 生理盐水稀释至浓度为 1.0 mCi/ml。</li>
	<li>向荷瘤小鼠的侧尾静脉注射 200 µl 的 89Zr-DFO-J591 溶液（200 µCi；7.4 MBq）。48</li>
	<li>在预定的成像时间点（例如，注射后 12、24、48、72、96 或 120 小时），使用 2% 异氟烷与氧气混合气体对小鼠进行麻醉。</li>
	<li>将小鼠置于小动物 PET 扫描仪的扫描床上，并在扫描过程中使用 1% 异氟烷与氧气混合气体维持麻醉状态。在将动物放置于扫描床前，需通过夹趾法确认麻醉效果，并在小鼠眼部涂抹眼用&#160;软膏以防止麻醉期间角膜干燥。49</li>
	<li>通过静态扫描采集小鼠的 PET 数据，使用 350–700 keV 的能量窗和 6 nsec 的符合时间窗，至少获取 4000 万次符合事件。50</li>
	<li>图像采集完成后，不得让小鼠无人看管，且在恢复意识前不得将其放回与其他小鼠共用的笼中。</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

尽管89Zr-DFO标记的放射性免疫偶联物的构建、放射性标记和成像通常是一个相当直接的过程，但在操作的每一步中仍需注意一些关键事项。例如，在偶联步骤中最可能引起关注的问题是抗体在偶联反应过程中发生聚集。这一问题通常是由于加入DFO-NCS储备液后偶联反应体系混合不充分所致。22 当发生这种情况时，DFO-NCS的非均相分布可能导致抗体局部反应过度，从而引发聚集。通过将DFO-NCS储备液以小份分批加入（&#60; 5 µl），每次加入后充分混匀反应体系，并在温控摇床中持续振荡反应混合物，可相对容易地避免该问题。此外，在完成DFO-mAb偶联物的偶联与纯化后，准确测定每个单克隆抗体（mAb）上连接的DFO分子数量至关重要。每抗体分子上DFO螯合剂数量的全面表征可通过放射性同位素稀释实验实现，方法类似于Holland 等 和Anderson 等 所采用的实验方案，尽管MALDI-TOF质谱法也是一种可行的替代方法。14,23,30,51,52 在放射性标记步骤中，最常见的问题无疑是标记产率低于预期。若严格遵循上述实验方案仍出现意外低产率，则...

由于抗体具有显著的灵敏度、亲和力和选择性，长期以来被视为将放射性同位素递送至癌细胞的有前景载体。然而，由于缺乏适用于标记抗体的合适正电子发射放射性同位素，其在正电子发射断层扫描（PET）成像中的应用受到限制1-3。在放射免疫偶联物的设计中，最关键的考虑因素之一是使放射性同位素的物理半衰期与抗体的体内药代动力学相匹配。更具体而言，抗体通常具有相对较长的、以数天计的生物半衰期，因此必须使用具有相似物理半衰期的放射性同位素进行标记。在PET成像应用中，抗体传统上使用64Cu（t1/2 = 12.7 hr）、86Y（t1/2 = 14.7 hr）或124I（t1/2 = 4.18 d）进行放射性标记4,5。然而，这些放射性同位素各自存在显著局限性，限制了其在临床成像中的适用性。尽管使用86Y和64Cu标记的放射免疫偶联物在临床前研究中显示出潜力，但这两种同位素的物理半衰期均过短，难以在人体成像中有效发挥作用。124I的物理半衰期则几乎非常适合与抗体联合用于成像，但其价格昂贵，且衰变特性欠佳，导致临床图像分辨率相对较低。此外，124I标记的放射免疫偶联物在体内可能发生脱卤反应，这一过程可能降低肿瘤与背景的放射性活度比值6,7。
寻找一种正电子发射放射性同位素以取代 64铜， 86Y，以及 124I在放射性免疫缀合物中的应用推动了近期相关研究的激增 89Zr标记的抗体8-12 出现的原因 89Zr 的特性很明确：该放射性金属具有近乎理想的化学和物理性质，适用于诊断用 PET 放射免疫偶联物。13 89Zr 通过以下方式生成： 89Y(p,n)89使用商业可得且自然丰度为100%的锆在回旋加速器上进行的反应 89Y 靶点14,15 该放射性金属的正电子产额为23%，半衰期为78.4小时，发射的正电子能量相对较低，为395.5 keV。图1).13,16,17 需要注意的是 89Zr 还会以 99% 的效率发射能量高达 909 keV 的 γ 射线。尽管这种辐射 不 会以能量方式干扰发射出的511 keV光子，因此在运输、操作和剂量测定方面需要额外注意。尽管存在这一注意事项，这些衰变特性最终意味着 89Zr 的半衰期在抗体成像应用中比 86Y 和 64铜但也能产生比 124I，可发射能量较高的正电子（分别为687和975 keV），同时还释放多种能量在511 keV正电子湮灭产生的光子附近（100–150 keV范围内）的光子。13 此外， 89Zr 与放射性碘相比，操作更安全，生产成本更低，并且在肿瘤中的残留效果更佳。18,19 一个可能的局限性是 89Zr 的一个缺点是它没有治疗用的同位素。 例如, 86Y（PET）与 90Y（治疗）。这排除了构建化学性质完全相同的替代成像剂的可能性，而这类成像剂本可作为其对应治疗剂的剂量学探针。尽管如此，研究表明 89Zr标记的抗体作为成像替代物具有潜在应用价值 90Y-和 177Lu标记的免疫缀合物。20,21
从化学角度来看，作为一种第 IV 族金属， 89Zr 在水溶液中以 +4 价阳离子形式存在。Zr4+ 离子具有高电荷，相对较大（有效离子半径 = 0.84 Å），可归类为“硬”阳离子。因此，它倾向于与最多八个硬的、带负电的氧供体配体结合。迄今为止最常用的螯合剂是 89Zr标记的放射性免疫结合物使用的是去铁胺（DFO），一种源自铁载体的、具有三个羟肟酸基团的非环状螯合剂。该配体可稳定螯合Zr4+ 在生理相关的pH条件下，室温下可快速且高效地完成阳离子标记，所得Zr-DFO复合物在生理盐水、血清和全血中可稳定维持数天。22 计算研究表明，DFO 能与 Zr 形成六配位复合物4+ 其中金属中心与配体的三个中性氧供体和三个阴离子氧供体配位，同时还与两个外源水配体配位 (图2).23,24 的 体内 使用放射性免疫缀合物的行为研究 89Zr-DFO偶联支架通常效果良好。然而，在某些情况下，成像和急性生物分布研究显示，注射了该探针的小鼠骨骼中放射性活度升高 89Zr标记的抗体，数据表明其具有亲骨性 89Zr4+ 阳离子从螯合剂中释放 体内 随后在骨中矿化。25 近年来，关于新型物质开发的多项研究 89Zr4+ 螯合剂，特别是具有八个氧供体的配体，已见于文献报道。24,26,27 然而，目前DFO仍是应用最广泛的螯合剂 89Zr标记的放射免疫结合物具有显著优势。目前已采用多种不同的生物偶联策略将DFO连接到抗体上，包括生物正交点击化学、含巯基反应性DFO结构与抗体中半胱氨酸的反应，以及含活化酯的DFO结构与抗体中赖氨酸的反应。4,28-30 然而，最常用的方法是使用带有异硫氰酸酯基团的去铁胺衍生物 DFO-NCS图2).22 这种市售的双功能螯合剂能够与抗体的赖氨酸稳定、可靠地形成共价硫脲键图3).
近年来，文献中已报道了多种89Zr-DFO标记的放射性免疫偶联物。临床前研究尤为丰富，所用抗体包括较为熟知的西妥昔单抗、贝伐珠单抗和曲妥珠单抗，也包括一些较为少见的抗体，如靶向CD105的TRC105和靶向fPSA的5A10。30-36 最近，已有少量使用89Zr-DFO标记抗体的早期临床试验见诸报道。例如，荷兰的研究团队已发表采用89Zr-DFO-cmAb U36、89Zr-DFO-替伊妥单抗（ibritumomab tiuxetan）和89Zr-DFO-曲妥珠单抗的临床试验结果。21,32,37 此外，目前还有多项针对89Zr标记放射性免疫偶联物的其他临床试验正在进行中，包括纪念斯隆-凯特琳癌症中心（Memorial Sloan Kettering Cancer Center）开展的使用靶向PSMA的89Zr-DFO-J591进行前列腺癌成像，以及使用靶向HER2的89Zr-DFO-曲妥珠单抗进行乳腺癌成像的研究。23,30 另外，尽管放射性标记抗体仍是目前最常见的89Zr标记放射性药物，但该放射性金属也越来越多地被用于其他载体，包括肽类、蛋白质和纳米材料。38-43
该方法的模块化设计 89Zr-DFO标记方法具有巨大优势。靶向生物标志物的抗体种类不断扩展，人们对开展此类研究的兴趣也在持续增长 体内 使用这些构建体的PET成像技术正在迅速发展。因此，我们认为建立更加标准化的操作规范和实验方案将有助于推动该领域的发展。一种优秀的书面实验方案用于DFO-NCS偶联及 89Zr放射性标记技术已有Vosjan发表。 等22 我们认为，本工作所提供的可视化演示将有助于刚接触这些技术的研究人员。在本方案中，将以靶向前列腺特异性膜抗原的抗体 J591 作为模型系统，演示以下两个过程：（1）双功能螯合剂 DFO-异硫氰酸酯与抗体的生物偶联；（2）放射性标记物的放射合成与纯化 89Zr-DFO-mAb 放射性免疫缀合物，以及（3） 体内 PET成像与一种 89Zr-DFO-mAb 放射性免疫缀合物在小鼠癌症模型中的应用23,44,45

<table><tbody><tr><td>&lt;em&gt;p&lt;/em&gt;-SCN-Bn-DFO</td><td>Macrocyclics</td><td>B-705</td><td>在 -80 &amp;deg;C 下保存</td></tr><tr><td>[&lt;sup&gt;89&lt;/sup&gt;Zr]Zr-草酸盐</td><td>多个供应商，包括 Perkin-Elmer</td><td></td><td>注意：放射性物质</td></tr><tr><td>PD-10 脱盐柱</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0851-01&amp;nbsp;</td><td>室温保存</td></tr><tr><td>Amicon Ultra-4 离心滤过装置</td><td>EMD Millipore</td><td>UFC805024</td><td>室温保存</td></tr><tr><td>硅胶浸渍放射性薄层色谱纸</td><td>Agilent Technologies</td><td>SGI0001</td><td>裁剪成 0.5 cm 宽的条带</td></tr></tbody></table>

89zr-dfo 标记抗体的生物偶联与放射性合成

The Bioconjugation and Radiosynthesis of 89Zr-DFO-labeled Antibodies

抗体具有卓越的亲和力、特异性和选择性，使其成为肿瘤靶向正电子发射断层显像（PET）放射性药物的理想载体。由于抗体在体内具有数天的生物学半衰期，因此必须使用物理衰变半衰期相对较长的正电子发射核素进行标记。传统上，用于抗体标记以进行PET成像的正电子发射同位素包括124I（t1/2 = 4.18 d）、86Y（t1/2 = 14.7 hr）和64Cu（t1/2 = 12.7 hr）。然而近年来，正电子发射放射性金属89Zr在基于抗体的PET显像剂中的应用显著增加。89Zr是用于免疫偶联物PET显像的一种近乎理想的放射性同位素，其物理半衰期（t1/2 = 78.4 hr）与抗体的体内药代动力学相匹配，并且释放能量相对较低的正电子，可生成高分辨率图像。此外，可利用来源于铁载体的螯合剂去铁胺（DFO）简便地对抗体进行89Zr标记。在本实验方案中，将以靶向前列腺特异性膜抗原的抗体J591作为模型系统，演示（1）将双功能螯合剂DFO-异硫氰酸酯与抗体进行生物偶联；（2）89Zr-DFO-mAb放射免疫偶联物的放射合成与纯化；以及（3）在小鼠癌症模型中使用89Zr-DFO-mAb放射免疫偶联物进行体内PET显像。

本方案的第一步是将DFO-NCS与抗体偶联，该步骤通常具有较高的稳健性和可靠性。一般而言，可获得纯化的、经螯合剂修饰的免疫偶联物 &gt; 90% 产率，且在初始偶联反应中使用 3 摩尔当量的 DFO-NCS，可获得螯合剂标记程度约为 1.0–1.5 DFO/单克隆抗体。 89Zr放射性标记及纯化步骤同样简便。按照上述方案中所述浓度，标记产率可达到 &gt; 80%，因此特异性活性为 &gt; 2.0 mCi/mg 在室温下反应60分钟后是典型值。粗品放射性标记混合物的放射性薄层色谱图可能会显示一些DTPA结合物 89Zr4+ 在溶剂前沿洗脱的图4A）。然而，在用DTPA淬灭反应并纯化后 89通过尺寸排阻色谱法纯化分离Zr-DFO-mAb偶联物，测定其放射化学纯度 89Zr-DFO-mAb 偶联物应 &gt; 95% (图4B）。如果分离后放射性化学纯度 89Zr-DFO-mAb 偶联物纯度低于 95% 时，应在进行任何后续操作前重复纯化步...

由于 89Zr 具有长达数天的放射性半衰期和理想的衰变特性，这种正电子发射放射性金属非常适用于基于抗体的放射性药物在 PET 成像中的应用。本方案将描述 89Zr 标记抗体的生物偶联、放射性合成及其临床前应用。

89Zr-DFO 标记抗体的生物偶联与放射性合成

抗体的高亲和力、特异性和选择性使其成为肿瘤靶向PET成像中极具吸引力的载体

本实验的总体目标是合成一种锆-89 DFO标记的放射性免疫偶联物，并评估其在体内的性能。该过程首先将螯合剂去铁胺（DFO）连接至抗体上，第二步是使用锆-89对已结合DFO的抗体进行放射性标记。接下来，使用尺寸排阻色谱法纯化放射性免疫偶联物。最后一步是在小鼠癌症模型中进行小动物正电子发射断层扫描（PET）成像。最终，通过PET成像获取锆-89标记的放射性免疫偶联物在体内的分布图像。通常，初次接触该方法的研究人员可能会遇到一些困难，因为调节氧化锆-89草酸盐溶液的 pH 值可能略显复杂。我将与我们实验室的技术员 Dalia Abdi 一起演示该操作流程。首先，在 1.7 毫升微量离心管中，用 1 毫升 0.5 摩尔 HEPES 缓冲液配制浓度为 2 至 5 毫克/毫升的 J 5 91 溶液；将 D-F-O-N-C-S 溶于干燥的 DMSO 中，使其终浓度为 5 至 10 毫摩尔；随后对溶液进行超声处理并充分涡旋，以促进其完全溶解。接下来，通过逐次加入少量 0.1 摩尔碳酸钠溶液，将 J 5 9 1 溶液的 pH 调整至 8.8 至 9。当抗体溶液达到正确 pH 值后，加入 D-F-O-N-C-S 溶液，其体积应相当于双功能螯合剂三至四倍的摩尔过量。然后将反应液置于振荡加热块中，在 37 摄氏度下孵育 30 分钟。在37摄氏度、350转/分钟条件下反应1小时后，使用预装的一次性尺寸排阻脱盐柱（分子量截断值为50,000，缓冲液为0.5摩尔Hess缓冲液）纯化剩余的免疫偶联物。纯化后收集EENT组分。使用紫外-可见分光光度计测定J 5 91 DFO构建体的浓度。将完成的J 5 91 DFO免疫偶联物溶液置于-20摄氏度避光保存。此时，将 0.5 至 2 毫克的 J 5 91 DFO 溶于 200 微升 0.5 摩尔 HEPES 缓冲液中，并加入一定体积的锆-89 原液（放射性活度对应 1 至 6 毫居里），置于 2 毫升塑料螺口微量离心管中。用 1 摩尔草酸将该溶液总体积调节至 300 微升。接着，使用 250 微升 1 摩尔碳酸钠溶液将锆-89 溶液的 pH 值调节至 6.8 至 7.5。随后加入少量碱液以达到所需的pH值。将所需量的pH调节后的锆-89溶液加入J 5 91 DFO溶液中。然后检测放射性标记反应混合物的pH值，确保其处于6.8至7.5的所需范围内。随后，将放射性标记反应在室温下于振荡加热模块中以每分钟350转的速度孵育60分钟。孵育60分钟后，取1微升放射性标记反应混合物点样于硅胶浸渍的薄层色谱条上，通过放射性薄层色谱法测定反应的标记产率。使用含50毫摩尔DTPA的展开剂展开薄层色谱后，采用放射性薄层色谱扫描仪分析薄层色谱条。通过积分放射性色谱图计算反应的放射标记产率，将保留因子从0到0.1范围内的曲线下面积除以总曲线下面积，再乘以100。若放射标

the-bioconjugation-and-radiosynthesis-of-89zr-dfo-labeled-antibodies

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化学

该生物耦合和重新布置<sup&gt; 89</sup&gt;锆DFO标记的抗体

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用于常规临床应用的[68Ga]Ga-FAPI-46 自动化放射合成

学习使用锆-89和DFO螯合剂进行抗体放射性标记的方法，通过生物偶联和尺寸排阻色谱纯化制备放射免疫偶联物，并在小鼠肿瘤模型中进行PET成像以评估体内分布和靶向效果。

⁸⁹Zr-DFO 标记抗体的生物偶联与放射性合成

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