开发和维护的临床前患者来源的肿瘤异种移植模型为新的抗癌疗法的调查

这种皮下患者来源的肿瘤异种移植手术的总体目标是研究新疗法的疗效、预测性生物标志物发现和肿瘤中的耐药途径。这种方法可以帮助回答肿瘤学领域关于特定药物是否表现出对特定肿瘤类型的活性的关键问题。该技术的主要优点是患者来源的肿瘤异质图保持了起源肿瘤典型的分子、遗传和组织学家异质性，使模型更具临床相关性。

演示该程序的将是 Stacey Bagby，她是我们实验室的专业研究助理和认证兽医技术员。在含有柠檬酸钠的血细胞分离管中收集 1 至 2 毫升血液后，离心样品并将外周血单核细胞层转移到 1.5 毫升微量离心管中。用无菌 PBS 将试管填充至顶部。

然后，再次旋转细胞。然后用 1 毫升 PBS 快速洗涤，注意不要干扰 PMBC 沉淀。然后，使用移液器将血浆从血细胞收集管转移到 1.5 毫升无菌低温小瓶中，并将血浆和 PBMC 沉淀储存在零下 80 摄氏度。

将人肿瘤组织转移到动物设施中，装在含有完全培养基的无菌杯中，并将杯子放入层流罩中。收获后，尽快将组织转移到无菌塑料切割皿中，加入少量修复培养基。然后，使用高压灭菌的小剪刀和镊子，将组织切成大约 3 x 3 x 3 毫升的块，并将 10 至 12 块放入高压灭菌的 1.5 毫升微量离心管中，该管含有 300 微升冰上的凝胶状蛋白质混合物溶液用于植入。

对于快速冷冻储存，将适当数量的肿瘤块转移到新的 1.5 毫升微量离心管中，并将小瓶放入液氮稀释器中。然后，放入零下 80 摄氏度的冰箱中。对于正式的固定和石蜡包埋，将三个小肿瘤块放入 10 毫升 10% 福尔马林杯中 24 小时。

将组织加工成石蜡包埋块后，将任何剩余的组织块转移到低温管中。然后，向组织中加入 1 毫升补充有 10% DMSO 的完全培养基，并将试管储存在冰上，直到它们可以转移到异丙醇冷冻容器中。然后将该容器放入零下 80 摄氏度的冰箱中。

要注射肿瘤组织，请将储存在凝胶状蛋白质混合物溶液中的肿瘤块加载到高压灭菌的 12 号套管针中，注意每个肿瘤块都完全插入套管针中。接下来，确认 6 到 8 周龄的无胸腺裸鼠对脚趾捏无反应，并将小鼠转移到无菌层流罩中的干净区域。将 F0 肿瘤皮下输送到小鼠背颈区域和小鼠侧腹的每一侧，然后在肿瘤注射的侧腹部位之一的远端皮下施用镇痛剂。

然后，将鼠标放回带有监控功能的笼子中，直到它完全恢复。每周至少监测一次植入异种图的小鼠的生长和健康状况，在适当的跟踪系统中记录小鼠的肿瘤大小、肿瘤产生、肿瘤注射日期和健康状况。当肿瘤达到大约 1， 500 至 2， 000 立方毫米的大小时，使用高压灭菌的剪刀和镊子切除肿瘤并将 F1 肿瘤传代到下一代五只动物中，正如刚刚证明的那样，注意收集快速冷冻的福尔马林和活的肿瘤样品，如每个肿瘤所示。

当 F0 肿瘤组中的其余小鼠表现出大约 1， 500 至 2， 000 立方毫米大小的肿瘤时，收集这些肿瘤，就像刚刚证明的那样进行收集。当达到 F15 期肿瘤生成时，使用液氮储存中最早的活肿瘤块进行下一系列肿瘤注射。当所需的肿瘤非常大时，1， 500 至 2， 000 立方毫米，请按照上述程序收集肿瘤以将其扩大到所需数量的小鼠中。

小鼠服用药物，每周称重和测量两次。将小鼠随机分配到治疗组，每组 10 个肿瘤，组肿瘤体积平均为 100 至 300 立方毫米，彼此相差几个标准差。然后，将小鼠分为适当的组进行治疗。

小鼠捕获的 DNA 的双色荧光原位杂交表明，F0 肿瘤中的人基质细胞被 F1 肿瘤中的小鼠基质细胞取代。F0 代中的所有人源肝细胞生长因子在 F1 代中被小鼠肝细胞生长因子取代，而血管内皮生长因子配体在 F1 代中由人和小鼠蛋白组成。同一肿瘤的不同代的治疗不会改变治疗反应。

肿瘤的耐药性或敏感性似乎是肿瘤菌株，而不是肿瘤生成特异性。此外，癌症基因组图谱和结直肠患者来源的肿瘤异种图库之间这些常见突变基因的突变频率非常相似。表明在结直肠患者群体中观察到的常见突变在结直肠患者来源的异种移植模型中得到了很好的代表。

一旦掌握，如果执行得当，这项技术可以在一到两个小时内完成。在尝试此程序时，重要的是要有一个有凝聚力的临床团队来识别并获得癌症患者的同意，以及切除和弄脏肿瘤组织。在此程序之后，可以执行其他方法，例如将抗癌化合物作为单一或联合药物进行研究，以回答有关这些策略对特定肿瘤类型患者可行性的其他问题。

开发后，这项技术为肿瘤学领域的研究人员探索新的癌症疗法、肿瘤异质性、治疗耐药机制、癌症干细胞生物学和肿瘤基质相互作用铺平了道路。观看此视频后，您应该对如何开发和维护患者来源的肿瘤异种图模型以评估新型癌症疗法有很好的了解。