G Protein-selective GPCR Conformations Measured Using FRET Sensors in a Live Cell Suspension Fluorometer Assay

Ansley Semack; Rabia U. Malik; Sivaraj Sivaramakrishnan

doi:10.3791/54696

JoVE Journal
Biology

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G Protein-selective GPCR Conformations Measured Using FRET Sensors in a Live Cell Suspension Fluorometer Assay

在活细胞悬浮液荧光测定G蛋白选择性GPCR构象测量使用FRET传感器

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09:12 min

September 10, 2016

DOI: 10.3791/54696-v

Ansley Semack¹, Rabia U. Malik², Sivaraj Sivaramakrishnan¹

¹Genetics, Cell Biology, and Development,University of Minnesota, ²Department of Cell and Developmental Biology,University of Michigan

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检测 G 蛋白偶联受体选择性激活 G 蛋白的简单方法仍然是细胞信号传导中一个突出的挑战。在这里，通过将 GPCR 成对拴系到 G 蛋白肽来探测活细胞中受控浓度的构象变化，开发了 Fӧrster 共振能量转移（FRET）生物传感器。

这种活细胞 Forster 共振能量转移或基于 FRET 的测定的总体目标是评估不同激动剂条件下的 G 蛋白选择性 G 蛋白偶联受体或 GPCR 构象。这种方法可以帮助回答 GPCR 领域关于 GPCR 与不同效应子相互作用以及不同药物对受体确认的影响的关键问题。该技术的主要优点是传感器是模块化的，可以很容易地针对不同的 GPCR 和 G α 肽组合进行重新设计，包括完整的 GPCR 和 G α 亚单元。

尽管这种方法可以深入了解 G 蛋白的选择和对不同溶原的反应。它也可用于探索差异 G 蛋白激活的生理后果。在开始该程序之前，在 37 摄氏度的加湿气氛中，以 5% 的二氧化碳在完全培养基中培养目标细胞，直到培养物达到汇合。

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