口腔生物膜取样在健康儿童中的微生物分析

该程序的总体目标是提出一种用于健康儿童微生物组分析的口腔生物膜采样标准化方法。这是通过首先准备和消毒器械和材料来实现的。接下来，孩子准备进行生物膜采样。

然后从三个部位进行生物膜采样，即龈下沟、前庭皱襞粘膜和唾液。最后，系统地储存样本。最终，将进行口腔微生物组分析以回答临床和科学问题。

您好，我是 Elizabeth，我是一名正畸医生。我的研究重点是正畸治疗带来的口腔微生物组变化。口腔生物膜的采样可能很棘手。

龈下沟的空间有限，尤其是在儿童中。将我们的微生物组数据与全球研究进行比较，我们发现缺乏标准化的采样方案。通过此视频，我们迈出了填补这一空白的第一步。

牙髓治疗中使用的校准和无菌纸尖在第一个环标记处切割，以标准化其长度。切割后，必须对纸尖进行紫外线照射，以避免 DNA 和 RNA 污染。用于储存的试管也将经过高压灭菌和紫外线照射。

在生物膜采样之前，需要彻底清洁牙齿，从涂抹可可脂开始。然后牙齿上会沾上牙菌斑。染色后，用水漱口。

用电动牙刷和水正确刷牙。不涂牙膏，因为这会改变口腔生物膜。脸颊和舌头牵开器用于保持口腔张开和干燥。

牵开器的放置需要熟练而稳定的双手，以尽量减少对儿童的不适，并使手术时间尽可能短。使用无菌牙科镊子，并且在整个手术过程中采样部位不受影响。用无菌棉签清洁和擦干牙齿，以避免在纸点采样时吸收龈上液。

可以使用不同的方法对口腔中的生物膜进行采样。由于儿童龈下沟的空间有限，纸质点采样是首选方法。切向插入纸张点，最长为 4 毫米，持续 20 秒。

必须特别注意不要伤害交界上皮。然后在第三个标记处将纸尖切割成 4 毫米的标准长度。也可以同时将 Paper Point 插入同一站点，或者可以从多个站点混合样品。

取出干田装置进行粘膜和唾液取样。纸点可以以相同的方式应用于前庭皱襞中的粘膜生物膜采样。唾液生物膜可以通过吐出未刺激的唾液来收集。

根据研究设计，纸质点将存储为单个、合并或并行样本。颜色编码的存储系统将简化进一步的样品管理。最后，将样品储存在零下 80 摄氏度下用于微生物组分析。

已经开发了几种商业试剂盒，用于快速准确地鉴定牙周病原菌。纸点被送到专门的实验室。然后在 3 小时内进行 DNA 提取、制备和分析。

DNA 也可用于微生物组研究。例如，下一代测序会产生完整的微生物组数据集。可以分析某些细菌种类的总体相对丰度，也可以分析由于条件变化而导致的微生物群变化。

该条形图和热图显示了龈下微生物群在门和目水平上的相对丰度。微生物组成随时间的差异、个体之间或个体内的比较或不同的采样方法以直方图表示。该图显示了两种采样方法（模式 A 和模式 B）在不同分类水平上的比较结果。

使用下一代测序创建的值的统计分析可以显示在表格中。可以在不同的分类水平上分析此表所示的不同时间点。计算 P 值以证明显著性发现。

最后，OTU 水平的口腔微生物组可以通过主坐标分析可视化。该图显示了 5 个主体的个体内和个体间差异。某些组的聚类可以显示微生物组组成的变化。

此 3D 动画显示了案例对照研究的结果。红点是情况。蓝点是控件。

在 T3 进行正畸干预后病例的清晰聚类，即大红点，可视化了微生物组的变化。显示对照组的蓝点分布均匀。该方法可以深入了解健康儿童龈下沟的临床生物膜采样。

我们选择了最适合这个脆弱隔间的纸点。在本视频中，我们仅将该方法应用于永久病症。它也可以应用于混合或成熟条件。

对于某些患者，您还可以根据相同的方案对牙周病部位进行采样。嗨，我叫 Barbara，是一名分子微生物学家。当我在实验室分析生物膜时，我需要依赖无偏差的临床样本库。

口腔微生物研究跨学科领域的每个步骤都必须完全标准化。还有一个更重要的事实。你只能在团队中取得成功。

所以永远善待你的同事。