Multiplexed Immunofluorescence Analysis and Quantification of Intratumoral PD-1+ Tim-3+ CD8+ T Cells

Cl&#233;mence Granier; Emeline Vinatier; Elia Colin; Marion Mandavit; Charles Dariane; Virginie Verkarre; Lucie Biard; Rami El Zein; Corinne Lesaffre; Isabelle Galy-Fauroux; H&#233;l&#232;ne Roussel; El&#233;onore De Guillebon; Charlotte Blanc; Antonin Saldmann; C&#233;cile Badoual; Alain Gey; &Eacute;ric Tartour

doi:10.3791/56606

肿瘤 PD-1 的多路免疫荧光分析及量化研究+ Tim-3+ CD8+ T 单元格

JoVE Journal
Cancer Research

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Multiplexed Immunofluorescence Analysis and Quantification of Intratumoral PD-1⁺ Tim-3⁺ CD8⁺ T Cells

肿瘤 PD-1 的多路免疫荧光分析及量化研究+ Tim-3+ CD8+ T 单元格

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09:32 min

February 8, 2018

DOI: 10.3791/56606-v

Clémence Granier¹, Emeline Vinatier^2,3,4, Elia Colin^2,3, Marion Mandavit^2,3, Charles Dariane^2,3,5, Virginie Verkarre⁶, Lucie Biard⁷, Rami El Zein², Corinne Lesaffre², Isabelle Galy-Fauroux², Hélène Roussel^2,3,6, Eléonore De Guillebon⁸, Charlotte Blanc^2,3, Antonin Saldmann⁴, Cécile Badoual^2,6, Alain Gey*⁴, Éric Tartour*^2,4

¹PARCC-INSERM U970,Université Paris Descartes, ²INSERM U970,Université Paris Descartes, ³Equipe Labellisée Ligue Contre le Cancer, ⁴Department of Immunology,Hopital Européen Georges Pompidou, ⁵Department of Medical Urology,Hopital Européen Georges Pompidou, ⁶Department of Pathology,Hopital Européen Georges Pompidou, ⁷Université Paris Diderot Paris 7, ⁸Department of medical oncology,Hopital Européen Georges Pompidou

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研究肿瘤微环境可以确定预后或预测的标志物的临床反应免疫治疗。本文介绍了一种基于原位荧光多光谱成像的创新方法, 对 CD8⁺T 细胞的各种亚群进行自动分析和计数。这种可重现和可靠的技术适用于大型队列分析。

这种多重免疫荧光分析的总体目标是根据细胞的表型自动计数细胞。该方法允许多荧光和自动细胞计数，以分析肿瘤微环境中肿瘤免疫细胞的表型和功能。这项技术有助于产生两种类型的复合预后，由直接来自肿瘤微环境的标志物预测。

通常，刚接触这种方法的人可能会很困难，因为表型分型过程很长，并且生成的原始数据需要进一步处理。当我们试图表征 Annhodge miranty 细胞的表型和免疫相互作用时，我们首先想到了这种方法。解冻后，用纸巾小心擦干组织切片周围的载玻片，然后用疏水屏障笔圈住组织。

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