Name: 用线 Myography 测定小鼠肠系膜动脉的等轴收缩力 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-20T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 42 s
Description: 学习使用线肌动描记法测定小鼠肠系膜动脉的等轴收缩力，以研究血管平滑肌收缩机制并筛选治疗高血压的新型血管舒张药物。该方法可保持血管活性数小时，适用于高通量药物筛选。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

感谢中国苏州大学的何卫启博士和中国西安陕西师范大学的乔艳宁博士提供的技术支持。本研究得到国家自然科学基金（项目编号 31272311、81373295 和 81473420）以及江苏省高校优势学科建设工程资助项目（项目编号 ysxk-2016）的资助。

动物操作已获得南京大学模式动物研究所机构动物护理和使用委员会（IACUC）的批准。
1. 溶液配制
<ol>
	<li>使用 137.0 mM NaCl、2.7 mM KCl、1.8 mM CaCl2、1 mM MgCl2∙6H2O、5.6 mM D-葡萄糖和 10 mM HEPES 配制 HEPES-Tyrode 溶液（H-T），pH 值为 7.3–7.4。</li>
	<li>使用 140.6 mM NaCl、2.7 mM KCl、1 mM MgCl2∙6H2O、5.6 mM D-葡萄糖和 10 mM HEPES 配制无钙 HEPES-Tyrode 溶液（Ca2+-free H-T），pH 值为 7.3–7.4。</li>
	<li>使用 15.7 mM NaCl、124.0 mM KCl、1.8 mM CaCl2、1 mM MgCl2∙6H2O、5.6 mM D-葡萄糖和 10 mM HEPES 配制含 124 mM KCl 的 HEPES-Tyrode 溶液（高 K+），pH 值为 7.3–7.4。</li>
</ol>
2. 实验准备
<ol>
	<li>使用 37 °C 水浴预热 H-T 和 High-K+ 溶液。</li>
	<li>打开肌动描记系统、数据采集硬件和计算机。</li>
	<li>小心地向每个肌动描记室中加入 5 mL 的 H-T 溶液。</li>
	<li>分别在两个培养皿中加入 20 mL 的 4 °C H-T 溶液和无 Ca2+ 的 H-T 溶液，并置于冰上保存。</li>
	<li>在一个 10 cm 的包被培养皿中加入 20 mL H-T 溶液，并在室温下维持。</li>
</ol>
3. 小鼠肠系膜动脉分离
<ol>
	<li>通过颈椎脱位法处死一只8至12周龄的C57BL/6J雌性或雄性小鼠。将小鼠固定，使其腹部朝上。</li>
	<li>用70%乙醇润湿腹部。然后用剪刀沿腹侧中线从腹股沟开始剪开皮肤，并从第一条切口起始处分别向下在两侧向腿部做切口。将两侧皮肤向后拉开；以类似方式切开腹膜。</li>
	<li>使用剪刀剪断食管、结肠及其他结缔组织，将胃肠道及其供血血管完全从体内分离出来。</li>
	<li>用镊子将分离的组织段转移至步骤2.4中准备好的含冷H-T溶液的培养皿中，并在H-T溶液中轻轻冲洗数次，以去除血液。</li>
	<li>将分离的组织段转移至步骤2.5中准备好的包被培养皿中，在室温下进行肠系膜动脉解剖。</li>
	<li>顺时针方向展平胃、空肠、回肠和盲肠，并分别将胃和盲肠固定在左侧和右侧。</li>
	<li>拉伸肠系膜血管床，并用大头针固定肠道，以暴露待解剖的肠系膜动脉。 
	注意：在此状态下，动脉位于静脉上方。</li>
	<li>打开体视显微镜的透射光源，在显微镜下进行动脉解剖。确保整个组织完全浸没在溶液中。</li>
	<li>用镊子夹住动脉周围的脂肪组织，使用解剖剪剪除所有结缔组织以分离动脉。注意避免损伤动脉。</li>
</ol>
4. 动脉安装
<ol>
	<li>将肠系膜动脉树转移并浸入冷的 Ca2+用镊子夹住多余的动脉，以无H-T溶液（在步骤2.4中配制）冲洗。</li>
	<li>在肠壁近端的肠系膜弓处截取一段1.4 mm的动脉，用两把镊子小心打开该动脉段的两侧。</li>
	<li>准备两段长度为2.5 cm的不锈钢丝，并将其放入同一培养皿中。</li>
	<li>用镊子轻轻夹住动脉的一端，在另一把镊子的辅助下，将两根导线依次小心插入动脉管腔内。确保导线保持平直，且不接触血管内皮。</li>
	<li>使用两把镊子同时夹住螺纹血管外部的两根钢丝，小心地将血管从培养皿转移至预先充满H-T溶液的肌动图仪腔室（步骤2.3）。</li>
	<li>将夹子的钳口拧开以留出安装空间。用两把镊子分别夹住两根插入导线中的一根的两端，并将血管置于钳口间隙中（图1A).</li>
	<li>将夹紧的导线两端缠绕在与千分尺相连的颚部螺丝上图1B).</li>
	<li>用右手镊子将导线拉直，然后顺时针旋转固定右侧螺丝。图1C确保容器始终位于钳口间隙内，但不要触碰钳口，以免造成损坏。</li>
	<li>使用千分尺闭合两个钳口图1D确保两个夹爪足够接近但不相互接触，且未固定的导线位于已固定导线的上方。</li>
	<li>使用右手镊子，小心地将连接到力传感器的下颌角处未拧紧的导线折叠，并顺时针缠绕在右侧螺钉上图1E）。然后拧紧螺丝。在导线左侧重复此步骤，并拧紧左侧螺丝（图1F).</li>
	<li>通过小心旋转千分尺，将钳口略微分开图1G）。避免拉伸血管。使用镊子将微米计侧的钢丝移动至与传感器侧钢丝处于同一水平面。小心旋转微米计，使两侧钳口之间的间隙恰好能容纳两根钢丝。</li>
	<li>重复步骤 4.2 – 4.11，将动脉安装到其他腔室中。将所有腔室连接至设备，盖上腔室盖，接通 100% 氧气供应并连接温度探头，开始加热至 37 °C。打开记录软件并按下 开始 按钮 图表视图 开始录制窗口。</li>
	<li>平衡约 20 分钟。</li>
</ol>
5. 归一化
注意：为了标准化实验条件并获得血管可靠的生理反应性，必须进行归一化处理。15根据血管的活性收缩力与内周长之间的关系， wire myograph 系统具有标准的归一化程序，用于评估所安装血管的内周长（IC）。5,8,9简而言之，为计算 IC（µm），读取显微测微计的数值，并将该值作为 X 值输入，同时输入换能器输出的力， 即， 静息壁张力（mN/mm）作为Y值。程序将返回一条（X，Y）拟合曲线，并计算对应于100 mmHg跨壁压的IC（IC100）。将血管设定至归一化的内周长（IC1当主动响应性达到最大时。
<ol>
	<li>将设备上所有通道的力设为零，并再平衡1-2分钟。</li>
	<li>从“DMT菜单”中选择归一化设置，并按如下方式设置参数： 
	目镜校准（mm/div）：0.36；目标压力（kPa）：13.3；IC1/IC100：0.9；在线平均时间（秒）：2；延迟时间（秒）：60。点击确定按钮关闭DMT归一化设置窗口。</li>
	<li>从DMT菜单中选择感兴趣的通道，以打开对应通道的DMT归一化窗口。按如下方式在窗口中输入常数值：组织端点a1：0.1；组织端点a2：4；钢丝直径（µm）：40。窗口将显示计算出的血管长度为1.40 mm。</li>
	<li>读取相应组织腔室的千分尺数值。将该值输入到千分尺读数框中，然后点击添加点按钮。此值即为X的初始值（X0）。经过60秒延迟时间后，窗口将显示与此千分尺读数相对应的力和有效压力（ERTP）。同时，千分尺读数框将变为可用状态。</li>
	<li>通过逆时针旋转千分尺来拉伸正在归一化的血管。将千分尺读数输入到千分尺读数框中，然后点击添加点按钮。再次等待60秒的延迟时间。</li>
	<li>重复步骤5.5，继续拉伸血管，并持续添加千分尺读数，直至窗口显示“千分尺X1”的数值，该值即为将血管拉伸至其IC1所需的计算千分尺设定值。</li>
	<li>将千分尺设定为X1 值。 
	注：归一化张力通常为1-2 mN。</li>
</ol>
6. 动脉收缩记录
注意：本节中使用的所有溶液，包括 H-T 溶液和 High-K+ 溶液，均在步骤 2.1 中配制。
<ol>
	<li>归一化后，将血管在浴槽中平衡 15–20 分钟。 
	注意：此步骤无需更换溶液。</li>
	<li>用高 K+ 溶液对血管进行两次刺激。
	<ol>
		<li>刺激时，用 5 mL 高 K+ 溶液替换 H-T 溶液，诱导血管收缩 10 分钟，随后用 5 mL H-T 溶液冲洗 3–4 次。 
		注意：典型的收缩反应最大张力应超过 3 mN，持续张力稳定在约 2.5 mN12。若第一次刺激产生的最大张力低于 2.5 mN，或持续张力随时间下降，或第二次刺激的张力显著低于第一次，则该血管应弃用，不再用于后续实验。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>加入 5 mL 高 K+ 溶液刺激血管以诱导收缩。5 分钟后，向浴槽中加入 0.5 µL 新莲心碱储备液（10 mM，溶于 DMSO）14，使终浓度达到 1 µM，以诱导血管舒张。</li>
	<li>当张力稳定后（通常需数分钟），再次向浴槽中加入 0.5 µL 新莲心碱储备液，使浓度升至 2 µM。随后每次加入 1 µL 储备液，使浓度依次升至 4、6、8 和 10 µM，以绘制剂量-反应曲线。 
	注意：不同药物的储备液浓度和工作浓度可能不同。</li>
</ol>

<ol><li>Bevan, J. A., Osher, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+direct+method+for+recording+tension+changes+in+the+wall+of+small+blood+vessels+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Agents+and+Actions%22%5BJournal%5D)">A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro.</a> Agents and Actions. 2 (5), 257-260 (1972).</li>
<li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260 (5552), 617-619 (1976).</li>
<li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+Properties+of+Small+Arterial+Resistance+Vessels+in+Spontaneously+Hypertensive+and+Normotensive+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Contractile Properties of Small Arterial Resistance Vessels in Spontaneously Hypertensive and Normotensive Rats.</a> Circulation Research. 41 (1), 19-26 (1977).</li>
<li>Mulvany, M. J., Nyborg, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+increased+calcium+sensitivity+of+mesenteric+resistance+vessels+in+young+and+adult+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">An increased calcium sensitivity of mesenteric resistance vessels in young and adult spontaneously hypertensive rats.</a> British Journal of Pharmacology. 71 (2), 585-596 (1980).</li>
<li>Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMulvany%2C+MJ+%22Procedures+for+investigation+of+small+vessels+using+small+vessel+myograph%22">Procedures for investigation of small vessels using small vessel myograph</a>. , Danish Myo Technology. Denmark. (2004).</li>
<li>Halpern, W., Mulvany, M. J., Warshaw, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+properties+of+smooth+muscle+cells+in+the+walls+of+arterial+resistance+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mechanical properties of smooth muscle cells in the walls of arterial resistance vessels.</a> The Journal of Physiology. 275, 88-101 (1978).</li>
<li>Michael, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+blood+pressure+arising+from+a+defect+in+vascular+function%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">High blood pressure arising from a defect in vascular function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (18), 6702-6707 (2008).</li>
<li>Bridges, L. E., Williams, C. L., Pointer, M. A., Awumey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenteric+artery+contraction+and+relaxation+studies+using+automated+wire+myography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography.</a> Journal of Visualized Experiments. (55), (2011).</li>
<li>del Campo, L., Ferrer, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3adel+Campo%2C+L+%22Wire+Myography+to+Study+Vascular+Tone+and+Vascular+Structure+of+Isolated+Mouse+Arteries%22">Wire Myography to Study Vascular Tone and Vascular Structure of Isolated Mouse Arteries</a>. , Springer. New York. (2015).</li>
<li>Fisher, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+smooth+muscle+phenotypic+diversity+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Genomics%22%5BJournal%5D)">Vascular smooth muscle phenotypic diversity and function.</a> Physiological Genomics. 42 (3), 169-187 (2010).</li>
<li>Crowley, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+roles+for+the+kidney+and+systemic+tissues+in+blood+pressure+regulation+by+the+renin-angiotensin+system%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Distinct roles for the kidney and systemic tissues in blood pressure regulation by the renin-angiotensin system.</a> The Journal of Clinical Investigation. 115 (4), 1092-1099 (2005).</li>
<li>Qiao, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myosin+phosphatase+target+subunit+1+%28MYPT1%29+regulates+the+contraction+and+relaxation+of+vascular+smooth+muscle+and+maintains+blood+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Myosin phosphatase target subunit 1 (MYPT1) regulates the contraction and relaxation of vascular smooth muscle and maintains blood pressure.</a> The Journal of Biological Chemistry. 289 (32), 22512-22523 (2014).</li>
<li>He, W. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+myosin+light+chain+kinase+in+regulation+of+basal+blood+pressure+and+maintenance+of+salt-induced+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Role of myosin light chain kinase in regulation of basal blood pressure and maintenance of salt-induced hypertension.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 301 (2), H584-H591 (2011).</li>
<li>Yang, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+identification+of+a+tribenzylisoquinoline+alkaloid+from+Nelumbo+nucifera+Gaertn%2C+a+novel+potential+smooth+muscle+relaxant%5BTitle%5D)+AND+%22Fitoterapia%22%5BJournal%5D)">Isolation and identification of a tribenzylisoquinoline alkaloid from Nelumbo nucifera Gaertn, a novel potential smooth muscle relaxant.</a> Fitoterapia. 124, 58-65 (2018).</li>
<li>Slezák, P., Waczulíková, I., Bališ, P., Púzserová, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+Normalization+Factor+for+Wire+Myography+of+Rat+Femoral+Artery%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Research%22%5BJournal%5D)">Accurate Normalization Factor for Wire Myography of Rat Femoral Artery.</a> Physiological Research. 59 (6), 1033-1036 (2010).</li>
<li>Kearney, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+burden+of+hypertension%3A+analysis+of+worldwide+data%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Global burden of hypertension: analysis of worldwide data.</a> The Lancet. 365 (9455), 217-223 (2005).</li>
<li>Good, N. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+Ion+Buffers+for+Biological+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Hydrogen Ion Buffers for Biological Research.</a> Biochemistry. 5 (2), 467-477 (1966).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

高血压是一种常见的公共卫生挑战，因其可导致严重并发症，包括心血管疾病和肾脏疾病16。阐明高血压的发病机制并探索更多抗高血压药物已成为该领域的紧迫任务。血压的产生和维持依赖于循环系统的外周阻力。根据泊肃叶定律（Poiseuille's Law），较小的动脉产生大部分循环阻力，是血压形成的主要来源3,10。因此，相较于大动脉，对小阻力动脉的研究更适用于血压相关研究。血管张力测定技术（wire myograph technology）是研究小阻力动脉生理功能及血管疾病发病机制的最佳方法之一。
小血管丝状肌动图系统已在其他文献中得到充分记载，本研究采用该系统测量大鼠肠系膜动脉的收缩反应8 以及小鼠动脉（如主动脉）9利用基因操作技术，小鼠已成为多种疾病模型和药物筛选模型中广泛使用的模式动物。因此，本文提供了一种改良的小鼠肠系膜动脉收缩...

本实验所用的小血管肌动描记系统用于测量内径在100至400 µm范围内的小阻力血管的等长收缩。将分离出的小血管（长约2 mm）穿入两根直径为40 µm的金属丝，随后依次固定在微米侧和换能器侧的夹具上。该肌动描记技术最早于1972年提出1，随后主要由Mulvany及其同事进一步发展2,3,4,5,6。目前该技术已趋于成熟，设备稳定，操作简便，并具有标准化的归一化流程7,8,9。我们对该方法进行了部分改进，用于小鼠肠系膜动脉的测量。
血管平滑肌几乎分布于所有血管的管壁中，其基本功能是通过收缩对各种刺激产生力学响应。血管平滑肌正常的收缩功能对于血压调节和营养供应至关重要10。血压调节异常可导致多种疾病，包括高血压、心力衰竭和缺血。 多项研究表明，血压异常通常与血管平滑肌收缩功能障碍密切相关7,11,12,13。肌张力测量法可用于研究由血管收缩剂、抑制剂和药物等多种刺激诱导的小鼠血管等长收缩功能。成功测定血管收缩反应将有助于阐明血压维持的机制、血管平滑肌相关疾病的发病机制，并探索新的治疗策略。
许多中草药已广泛用于血管性疾病的临床治疗，但其有效成分通常尚不明确。因此，分离和鉴定有效成分对于新药研发具有重要意义。多丝肌动图技术为筛选中草药中的活性成分提供了一种简便的方法。我们已报道了多项利用小血管肌动图系统研究小鼠肠系膜动脉收缩的研究，并鉴定了具有抗高血压活性的天然化合物12,13,14。本文中，我们详细描述了肌动图方法的操作流程，并评估了从莲子胚芽（Nelumbo nucifera Gaertn.）中分离得到的去甲莲心碱（neoliensinine）的舒张血管作用14。

<table><tbody><tr><td>多丝肌动描记系统</td><td>DMT</td><td>610-M</td><td></td></tr><tr><td>不锈钢丝</td><td>DMT</td><td>400447</td><td></td></tr><tr><td>Geuder 解剖剪</td><td>DMT</td><td>400431</td><td></td></tr><tr><td>Dumont 镊子</td><td>DMT</td><td>300413</td><td></td></tr><tr><td>PowerLab/8SP</td><td>ADInstruments</td><td>ML785</td><td></td></tr><tr><td>软件</td><td>ADInstruments</td><td>LabChart 5</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>S5886</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>P5405</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>SigmaAldrich</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&amp;middot;6H2O</td><td>SigmaAldrich</td><td>M2393</td><td></td></tr><tr><td>D-葡萄糖</td><td>SigmaAldrich</td><td>G6152</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sangon Biotech</td><td>A100511-0250</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>SigmaAldrich</td><td>S8045</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>SigmaAldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr></tbody></table>

利用血管环张力测定法测量小鼠肠系膜动脉的等长收缩力

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

血管环张力测定技术用于评估血管平滑肌在去极化、G蛋白偶联受体激动剂/抑制剂及药物作用下的收缩性. 它在多种关于血管平滑肌生理功能、高血压等血管疾病发病机制以及平滑肌松弛药物开发的研究中被广泛应用。小鼠是一种广泛使用的模式动物，具有大量疾病模型和基因修饰品系。本文详细介绍了用于测定小鼠肠系膜动脉等长收缩的方法。分离一段1.4 mm长的小鼠肠系膜阻力动脉，将两根钢丝穿入其管腔并固定于肌动图装置的腔室中。经过平衡和标准化步骤后，采用高K⁺溶液对血管段进行预刺激+ 在进行收缩实验前，用该溶液冲洗两次。作为该方法在药物开发中应用的一个示例，我们测定了从中药莲子胚芽中分离得到的一种新型天然物质——新莲心碱的舒张作用。莲（Nelumbo nucifera） Gaertn.) 对小鼠肠系膜动脉的作用。安装在肌动图腔室中的血管段用高K⁺溶液进行刺激。+ 溶液。当张力达到稳定持续阶段后，逐步累积加入新莲心碱。我们发现新莲心碱对平滑肌收缩具有剂量依赖性的舒张作用，提示其可能具有抗高血压的活性。此外，血管段在安装后至少可存活4小时，并维持由高钾诱导的收缩功能。+ 我们建议，对于需要多次更换溶液的耗时药物筛选过程，可采用血管环张力测定系统。

我们采用多丝肌动图系统测量了小鼠肠系膜动脉的等长收缩力，并评估了从莲子胚芽中纯化的去甲莲心碱的舒张作用莲（Nelumbo nucifera） Gaertn.)14小鼠肠系膜阻力动脉被分离，清除结缔组织后切成1.4 mm长的血管段。将血管段插入两根钢丝中，置于含Ca2+-无H-T溶液的培养皿中，然后将该组织段固定在肌张力测定室的两个夹具上（图2A）。安装片段后，将两根导线调整至相互平行，靠近但不接触。图2B）。在进行力测量之前，血管段先经过高钾溶液两次校正和增强处理+ 溶液以稳定血管。在标准化过程中，血管被多次拉伸，直至达到IC值100, 每个拉伸周期均包含一次强烈的收缩、快速的舒张以及持续60秒的力维持（图3）。高钾诱导的血管平滑肌收缩+ 溶液...

血管环张力测定技术用于研究血管平滑肌功能并筛选新药。本文报道了一种详细方案，用于测定小鼠肠系膜动脉的等长收缩力，并用于筛选血管平滑肌新的舒张剂。

血管环张力测定技术用于评估血管平滑肌在去极化、G蛋白偶联受体激动剂/抑制剂以及其他刺激因素作用下的收缩功能。

多年来，我们实验室一直采用血管环张力测定法（wire myograph method）来测量血管平滑肌的收缩力。我们利用该技术研究平滑肌收缩的机制，并应用此方法探索治疗高血压的新型药物。该技术的主要优势在于，血管段在安装后至少可存活四小时，并能多次维持由高钾诱导的收缩性。多通道系统为新药的高通量筛选提供了可能。将安乐死小鼠仰面固定，使其腹部朝上，并用70%乙醇润湿腹部。然后，用剪刀从腹股沟处沿腹侧正中线剪开皮肤，再从第一切口处开始沿每条腿向下做切口。将两侧皮肤向后拉开，随后做类似的切口以打开腹膜。接下来，用剪刀剪断食管、结肠及其他结缔组织，从而将带有供血血管的整个胃肠道完全从体内分离出来。用 HEPES-Tyrode 液（H-T 溶液）冲洗消化道内的血液后，将分离的肠段转移至包被的培养皿中，在室温下进行肠系膜动脉解剖。顺时针方向展平胃、空肠、回肠和盲肠，并将胃和盲肠分别固定在左侧和右侧。打开体视显微镜的透射光源，用大头针固定肠道以暴露待解剖的肠系膜动脉。然后用镊子夹住动脉周围的脂肪组织，用解剖剪仔细剪除所有结缔组织，以分离动脉。用镊子夹取多余的动脉，将肠系膜动脉树转移并浸入冰冷的无钙H-T溶液中。在肠系膜弓靠近肠壁一侧的动脉上截取一段1.4毫米长的血管段，并用两把镊子小心地撑开该动脉段的两端。准备两段长度为2.5厘米的不锈钢丝，并将其放入同一培养皿中。用镊子轻轻夹住动脉的一端，再用另一把镊子依次将两根钢丝小心插入动脉腔内。确保导线保持平直，且不接触内皮。使用两把镊子同时夹住穿过血管螺纹的两根导线的外侧，小心地将血管从培养皿转移至盛有H-T溶液的肌动描记装置腔室中。旋开腔室的夹头以留出安装空间，然后用两把镊子分别夹住已插入的两根导线中其中一根的两端，将血管置于夹头间隙中。将夹紧的金属丝两端缠绕在连接千分尺的钳口螺丝上。顺时针旋转固定左侧螺丝，然后用镊子将金属丝拉直。接下来，顺时针旋转固定右侧螺丝。确保容器始终位于钳口间隙内，但不要触碰钳口，以免造成损坏。使用千分尺闭合两个钳口。确保两个夹头足够接近但互不接触，且未固定的钢丝位于已固定钢丝的上方。用右手镊子小心地将与力传感器相连夹头角落处未拧紧的钢丝折弯，并顺时针方向缠绕在右侧螺钉上，然后拧紧该螺钉。重复展开并缠绕金属丝的左侧，并固定左侧螺钉。接着，通过小心旋转千分尺，使两个夹头略微分开，但不要拉伸血管，直至两个夹头之间的间隙恰好能够容纳两根金属丝。然后使用镊子将千分尺侧的金属丝移动至与传感器侧金属丝处于同一水平面。将血管安装到其他腔室后，连接所有腔室至设备并盖上腔室盖。接通100%氧气供应，插入温度探头，并开始加热至37°C。启动数据记录软件。按下“开始”按钮以开始记录。从DMT菜单中选择感兴趣的通道，以打开相应通道的DMT归一化窗口。在窗口中输入以下常数值：组织端点a1，0.1；组织端点a2，4；钢丝直径，40。此时窗口显示计算出的血管长度为 1.40 毫米。读取相应组织浴槽的显微测微尺数值，将该值输入显微测微尺读数框中，然后点击“添加点”按钮。该数值为X的初始值。经过60秒延迟后，窗口将显示与此千分尺读数相对应的力和有效压力。同时，千分尺读数框变为可操作状态。通过逆时针旋转千分尺，拉伸正在标准化的血管。将千分尺读数输入千分尺读数框，然后点击“添加点”按钮。再次等待60秒延迟时间。继续拉伸血管并添加千分尺读数，直至窗口显示千分尺X-1的值，该值即为将血管拉伸至其IC-1所需的计算千分尺设定值。将千分尺设置为 X-one 值。归一化后，将血管在腔室内平衡 15 至 20 分钟。平衡完成后，通过用 5 毫升高钾溶液替换 H-T 溶液，对血管施加高钾溶液刺激，以诱导其收缩 10 分钟。在新鲜的高钾溶液中再次孵育10分钟后，用五毫升H-T溶液洗涤三到四次。随后，再次加入五毫升高钾溶液刺激血管以诱导收缩。五分钟后，向浴槽中加入0.5微升新莲心碱储备液，使终浓度为1微摩尔新莲心碱，以使血管松弛。数分钟后，当张力稳定时，加入另外0.5微升去甲莲心碱储备液，使浓度增加至2微摩尔。每次加入1微升储备液，使浓度依次增加至4、6、8和10微摩尔，以生成剂量-反应曲线。在归一化过程中，血管被多次拉伸，直至达到IC-100的数值，每次拉伸循环均包括明显的收缩、快速舒张以及在60秒内的张力维持。高钾溶液诱导的血管平滑肌收缩通常表现为两个时相：强直相和持续相。本文描述了一种利用多丝肌张力测定系统测量小鼠肠系膜动脉等长收缩力的方法。该方法可用于评估血管平滑肌功能，并筛选平滑肌舒张剂。该方法与其他方法的主要区别在于制片步骤。此处采用的制片步骤操作简便，且不会损伤组织或装置。按照本方案，还可使用其他刺激剂（如EP和血管紧张素II）刺激平滑肌收缩，以筛选对这些激动剂敏感的新药物。

isometric-contractility-measurement-mouse-mesenteric-artery-using

Research

科研

JoVE Journal

Medicine

医学

用线 Myography 测定小鼠肠系膜动脉的等轴收缩力

本文介绍了一种用于离体肠系膜动脉张力测量的自动化肌动图方法。该方法采用Mulvany-Halpern自动双丝肌动仪510A，测定血管对苯肾上腺素和细胞外钙的反应。该技术可独立、一致地测定直径为60 - 300...

使用自动化的丝线肌动描记法研究肠系膜动脉的收缩与舒张

在压力肌动描记术中，将一段完整的小血管段固定在两个微小套管上，并加压至适宜的管腔压力。本文中，我们描述了测定小鼠第3rd C57和sGCα中肠系膜动脉的排序1-/-...

使用压力肌动图评估小鼠阻力动脉功能

压力肌动描记法用于评估小动脉在加压时产生持续性收缩的血管活性。本文提供了一项详细方案，用于评估从大鼠分离的小肠系膜动脉节段的血管活性，以及管腔内压力对血管直径的影响。...

利用压力肌动图评估肠系膜阻力动脉的肌源性反应和血管活性

小鼠左心室乳头肌可用于在体外研究心脏收缩功能。in...

小鼠离体乳头肌收缩力测量用于心肌变力性研究

本方案描述了利用导丝肌动图技术评估从小鼠分离的肠系膜动脉的透壁等长张力的方法，特别关注内皮细胞和血管周围脂肪组织释放因子的调节作用。...

利用离体肠系膜动脉评估血管张力反应性：重点关注血管周围脂肪组织的调节作用

本方案描述了使用多腔室肌动图系统在实验中应用张力测定肌动图技术的原理与技术操作 离体...

使用张力测定小体积腔室血管肌动描记法测量小鼠胸主动脉内皮依赖性血管舒张功能

我们在视频中演示了一种使用血管内单丝线栓在成年小鼠中建立大脑中动脉闭塞的方法。同时展示了如何通过2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）染色来评估脑梗死范围。...

小鼠大脑中动脉闭塞模型

大脑中动脉（MCA）结扎是一种用于在动物模型中研究局灶性脑缺血的技术。该方法通过开颅暴露大脑中动脉，并采用电凝法进行结扎。与其他现有方法相比，该技术可获得高度可重复的梗死体积，并提高术后存活率。...

小鼠永久性大脑中动脉结扎的应用

内皮糖萼/内皮表面层最适合通过活体显微镜进行研究。在肺等运动器官中，活体显微镜技术上具有挑战性。我们展示了如何结合明场与荧光显微镜技术，在自由运动的组织中估算内皮表面层厚度 体内...

in vivo 条件下小鼠肺血管内皮表面层的测量

小肠经常暴露于可能影响血流并对其营养吸收产生负面影响的毒素。利用多通道肌动图仪及肠系膜动脉和静脉分离组织，可对感兴趣化合物或毒素的血管活性进行筛选。...

从小牛肠系膜动脉和静脉分离血管段并用作生物测定法检测小肠血管活性

关键词：小牛，肠系膜动脉，肠系膜静脉，血管活性，生物测定，小肠

学习使用线肌动描记法测定小鼠肠系膜动脉的等轴收缩力，以研究血管平滑肌收缩机制并筛选治疗高血压的新型血管舒张药物。该方法可保持血管活性数小时，适用于高通量药物筛选。

利用血管环张力测定法测量小鼠肠系膜动脉的等长收缩力

探索更多视频