SA-β-加拉基沙酶筛查检测,用于识别治疗药物

我们在这里首次描述了一种方法，它允许高通量药物筛查的敏感性化合物，已被证明有利于老化相关的疾病。事实上，一些临床试验的药物测试在这个本质目前正在进行中。该技术的主要优点是，利用在衰老细胞中对SA-beta-Galactosidase的成熟检测，区分两种衰老药物，即神经学和脑体体。

该技术是新型衰老化合物的重要筛选工具。事实上，一些在屏幕的帮助下被鉴定的化合物出现在各种高调的出版物中，目前正在临床试验中。此技术用途极其广泛，可适用于多个高吞吐量屏幕。

事实上，它是可能的多路复用屏幕，并筛选化合物，通过激活或抑制几种途径之一抑制衰老。将每个胚胎分解成一毫米碎片，并上下管数次。接下来，在每个胚胎的组织中加入10毫升的生长介质。

在10厘米的培养皿中加热它们，在37摄氏度的氧气和5%的二氧化碳中孵育两到三天。用0.25%的尝试性EDTA混合物孵育每个胚胎的其余部分10分钟。要尝试细胞，首先，小心地去除生长介质，用10毫升1X PBS洗涤细胞两次。

然后，向细胞中加入两毫升025 trypsin EDTA溶液，并在37摄氏度下孵育两到三分钟。接下来，在显微镜下检查细胞，确保细胞与表面分离。添加相同数量的生长介质以终止三辛消化，并将细胞转移到锥形管中。

然后，将细胞在200倍G下离心三分钟。丢弃上一液，并添加新的生长介质以重新悬浮细胞。接下来，计算细胞，并在投影的细胞密度下将它们播种到新板中。

对于非衰老子培养，首先，以一比四的比例分裂汇合细胞。然后在37摄氏度的氧气和5%的二氧化碳中孵育细胞，以延伸为另一个通道。接下来，为了诱导细胞衰老，种子分裂汇合细胞从一通道以一比四的比例，并在37摄氏度的20%氧气和5%的二氧化碳环境中孵育三天。

为了监测细胞衰老，使用先进的库尔特细胞计数器系统，测量每个尝试单一分步过程中细胞直径和细胞体积的逐渐增加。为了开始β-Gal的筛选检测，在96个孔板中，每孔中播种5000个衰老细胞或3000个非衰老细胞。然后，在每井中加入100微升的生长介质，在37摄氏度和20%的氧气和5%的二氧化碳下孵育细胞6小时。

接下来，在 MEF 细胞中加入药物稀释，在 20%氧气和 5% 二氧化碳中孵育 37 摄氏度的细胞，24 至 48 小时。孵育后，取出药物溶液，用100微升1X PBS清洗细胞。为了诱导裂索马碱化，用90微升的巴非霉素A1溶液进行预处理，在新鲜细胞培养基中以100纳米摩尔的最终浓度稀释。

然后，在37摄氏度的20%氧气和5%的二氧化碳环境中孵育细胞一小时。对于SA-beta-Gal活性的荧光分析，在生长介质中，以100微摩尔的最终浓度进行新的工作溶液。然后，在最终浓度为10微摩尔的培养基中加入10微升的工作溶液，并在37摄氏度的20%氧气和5%的二氧化碳中孵育细胞，两小时。

用 100 微升 1X PBS 清洗电池。接下来，添加两微升，每毫升100微克，Hoechst 33342染料的最终浓度为每毫升2微克。在37摄氏度、20%的氧气和5%的二氧化碳下孵育细胞20分钟。

孵育后，取出介质，加入100微升的新鲜生长介质，然后进行成像。在这项研究中，一个高含量的荧光图像采集和分析平台允许识别性水解药物，如17-DMAG，减少了在含有衰老细胞的小鼠胚胎成纤维细胞培养物中的总体SA-beta-Gal活动， 在第五段含有衰老细胞.软件生成的对衰老细胞和非衰老细胞混合物的定量分析，可以清楚地显示衰老细胞特异性效应，并消除巴菲洛霉素A.的后台β-半乳糖酶活性。

本文包括处理氧化应激下的原发细胞，这可能导致需要监测的变异。这个程序是检测精神病药物的第一步。需要额外的细胞生存能力和细胞衰老散文来确认筛选结果。

使用本文检测出几种新的丝不解药，包括第一种三聚酮组合达萨蒂尼奎塞汀、热休克蛋白90抑制剂、Bcl-2系列抑制剂和多酚菲西汀。