小鼠肾小球滤过率的透皮测定

今天，我们将展示小鼠球状过滤或tGFR的透皮测量技术。我认为这种方法有许多特点值得一提。首先，目前tGFR是评估小鼠肾功能的最准确方法。

其次，tGFR在有意识、自由移动的小鼠中进行，因此避免了麻醉的并发症。第三，一旦掌握了这项技术，在一天内执行 30 到 40 tGFR 测量是合理的。最后，tGFR测量可以在体外小鼠中重复进行。

这意味着我们可以在急性和慢性疾病环境中对肾脏功能进行连续测量。这项技术的主要优点是，它允许研究人员测量有意识、自由移动的小鼠中球状过滤率或GGFR，具有高精度和灵敏度。在 tGFR 测量前一到两天，在确认对脚趾捏没有反应后，将麻醉小鼠放在热垫上的易用位置。

使用电动剃须刀，根据生长方向修剪，从鼠标背部的一侧去除大部分毛皮，从后腿顶部到颈部和肋骨。使用棉芽将薄薄的脱皮霜涂在裸露的皮肤上，以对抗生长方向，以确保将霜涂抹在尽可能靠近皮肤的地方，并在一到三分钟后用干净的棉签和温水去除霜。在手术当天，将六厘米三厘米的胶粘剂贴片修剪到 GFR 设备的大小，然后剥去贴片背面，将设备粘在贴片的粘合面，并放置位于透明窗口上方的发光二极管。

然后将一小块补丁贴在电池上。要连接监视器，在麻醉鼠标位于易发位置，用 70% 乙醇清洁预剃光的皮肤，并通过纵向撕裂来调整大约 12 厘米胶带的宽度。将胶带放在鼠标下面，在动物的一侧折叠两厘米，在胶带右侧的一条边上折叠，以便于测量后放置和拆卸。

接下来，将电池连接到设备，从电池上取下背衬，并将电池安全地放在设备上。设备已准备就绪，当蓝色 LED 开始闪烁时，数据采集开始。从设备上的贴片上取下背背，将设备放在剃光的皮肤上，使暴露 LED 的窗口位于用胶带固定设备右侧的肋骨上。

确保设备安全连接，而不限制鼠标的移动性或对皮肤施加太大的压力，这一点很重要。然后将磁带的左侧牢固地包裹在鼠标和设备周围。允许设备录制三分钟的稳定背景读数。

同时，用头垫加热尾部，用适当的实验体积使用 FITC-sinistrin 加载胰岛素注射器，用于注射四舍五入到最接近的 10 微升。在一个平稳但快速的博卢斯静脉注射菲可克-西尼斯特林。重要的是，用户对静脉注射感到自在，因为有必要在一个螺栓中成功管理 FITC-sinistrin，而不是多次尝试，这将导致间隙曲线中的多个峰值。

要测量 tGFR，请将鼠标放入自己的笼子中，并监控直至完全保持，并允许将 FITC-sinistrin 间隙记录 1.5 小时。在测量期结束时，将鼠标放在笼子顶部的钢丝架上，让鼠标抓住金属棒，快速平滑地从腹部下方拉出胶带。然后从设备和皮肤上取下任何胶带，注意电池不会断开与设备的连接，然后将鼠标返回到其保持架。

要评估数据，请小心断开电池，并使用 USB 电缆将设备连接到计算机。打开阅读软件，然后单击"连接、读取、重命名和保存"。然后关闭程序，根据制造商的说明处理和分析软件中的数据。

虽然 FITC-sinistrin 在健康小鼠的循环中迅速清除，而急性肾损伤小鼠的这种清除被显著延迟。在患有非常严重急性肾损伤的小鼠中，在整个 90 分钟的测量期内，可能很少或没有清除 FITC-sinistrin 荧光，表明完全没有肾球状过滤。透皮 GFR 测量是微创的，因此可用于监测单个动物在多个时间点肾功能的变化。

事实上，在这个具有代表性的实验中，连续测量表明肾功能在缺血再灌注损伤后零、一、二和四天发生变化。在这个小鼠慢性肾脏疾病模型中，FITC-sinistrin半寿命与GR的反向关系可与这些动物观察到的受损肾功能直接相关。事实上，FITC-sinistrin的半寿命与在未受伤的小鼠和不同严重程度的缺血再灌注损伤引起的急性肾损伤的GPER测量中对管状损伤的半定量组织学评估密切相关。

相比之下，血清肌氨酸和血液尿素氮与 FITC-sinistrin 清除量呈正相关但较弱，表明转皮 GFR 测量比血清肌氨酸或血液尿素氮更可靠的肾损伤测量。与传统的生物标志物（如肌氨酸和 BUN）相比，GFR的外皮测量是肾功能的更灵敏的测量方法。这为临床前研究中肾病新疗法的疗效提供了更准确的评估。

此方法中最关键的步骤是将设备正确连接到鼠标的背部，以及成功进行 FITC-sinistrin 的 IV 管理。这些步骤对于获得对小鼠的GR的准确评估至关重要。