Beoordeling van de geheugenfunctie bij pilocarpine-geïnduceerde epileptische muizen

Cognitieve stoornissen is een van de meest voorkomende comorbiditeiten bij temporale kwab epilepsie. We zullen een protocol presenteren waarin wordt beschreven hoe u geheugenstoornissen beoordelen met behulp van een muismodel van chronische epilepsie. Nieuwe objectlocatie, nieuwe objectherkenning en patroonscheidingstest zijn eenvoudige en korte es die de dieren minimaal kunnen belasten.

Het maakt deze test optimaal voor het evalueren van de geheugenfunctie bij epileptische muizen, zonder extra triggers voor een spontane terugkerende aanvallen. Om te beginnen acclimatiseren de dieren aan het weinig licht in hun huis kooien, voor ten minste 30 minuten. Maak een open veldvak.

Op dag één van de gewenning, plaats en illuminometer in het centrum van de open gebiedsdoos. En pas de verlichting aan 60 Lux aan. Gebruik videotrackingsoftware voor dierlijk gedrag om de bewegingsactiviteit van elke muis te evalueren.

Zodra de videotrackingsoftware is geopend, kalibreer u de grootte van de open veldbox. Plaats vervolgens voorzichtig een experimentele muis in de open velddoos met uitzicht op de muur. Open Smart-programma, klik op Aangepast en Accepteren.

Klik op Afbeeldingsbron. Druk na het selecteren van de geïnstalleerde camera op de knop Instellen. Pas de cameraresolutie aan en druk op Accepteren.

Sleep na onze kalibratieklik de computermuis om de grootte van het vak aan te passen. En vul de binnenste doos grootte. Klik op Zonedefinitie om de grootte van elke doos op te slaan en aan te passen en klik vervolgens op Opslaan.

De rode doos is het bijgehouden bereik, dus het past in de binnenste doos grootte, terwijl de roze doos past bij de omtrek. Druk op detectie-instelling. Klik op Momentopname en druk op Starttest om te controleren of een bepaald gebied wordt bijgehouden, pres Stop Test en vervolgens Accepteren.

Klik op Tijdinstellingen. Stel na het selecteren van vooraf ingestelde tijd de latentietijd in op drie seconden acquisitietijd op 15 minuten en druk op Accepteren. Druk op Onderwerpen om de codenaam in te stellen.

Klik op Scheduler om de bestaande gegevens te verwijderen en sleep de codenaam die is gewijzigd in onderwerpen naar sessie één. Klik op Gegevensverwerving. Klik op de knop Opnemen en klik op Start.

Doe de muis in de doos en volg hem gedurende 15 minuten. Na 15 minuten opnemen keert de muis terug naar zijn thuiskooi. Herstel het felle licht.

Klik op Gegevensverwerving. En klik vervolgens op Active Analysis Drag code name Sham naar het venster ernaast. Klik op de knop Rapportdefinities.

Klik op de knop Nieuwe rapportdefinities en vervolgens op Overzichtsrapport en druk op Accepteren. Klik op Onderwerpnaam en afstand in zone en stuur deze naar de zijkant. Druk vervolgens op de knop Accepteren.

Klik op het rode vinkje en klik op Analyseren. Bekijk de resultaten. Herhaal op dag twee en dag drie de gewenningssessies.

Op dag vier voert u de kennismakingssessie uit. Plaats in het schemerige licht elke muis gedurende drie minuten in het lege open veld. Na deze korte gewenning keert het dier terug naar zijn thuiskooi.

Plaats twee identieke objecten, rubberen poppen, in de open veld arena, vijf centimeter afstand van de aangrenzende muren. Bevestig de objecten met dubbelzijdige tape. Introduceer de experimentele muis, in de open veld vak tegenover de muur het verst van de objecten.

Laat gratis verkenning gedurende 20 minuten en meet handmatig de tijd die wordt besteed aan het verkennen van beide objecten met behulp van twee stopwatches. Kwantificeer niet als verkennende tijd, enig gedrag, waarbij de dierlijke snuit niet naar het object wijst. Zodra de muis de minimale verkenningstijd van 30 seconden bereikt, voor de twee objecten, stop de F1-sessie en breng de muis naar zijn thuiskooi.

Als de muis de objecten binnen 20 minuten niet gedurende 30 seconden verkent, verwijdert u de muis uit het open veldvak en sluit u deze uit voor verdere sessies. Voer op dag vijf de testsessie voor nieuwe objectlocatie uit. Breng de muis naar het open veld gebied voor rehabituation gedurende drie minuten.

Breng het dan terug naar zijn kooi. Beweeg een object naar de diagonale positie en plaats de experimentele muis naar de muur van het open veldvak. Laat 10 minuten gratis verkenning en opnemen met een videotrackingsysteem.

Meet de tijd die wordt besteed aan het verkennen van elk object met behulp van twee stopwatches. Breng de muis vervolgens naar zijn thuiskooi, door de staart te grijpen. Laat de muis drie dagen lang rusten met vrije toegang tot voedsel en water.

Op dag negen voert een 15 minuten gewenning sessie, voor een muis. Op dag 10 voert de korte revalidatiesessie, gedurende drie minuten. Breng het dan tijdelijk terug naar zijn kooi.

Plaats twee identieke voorwerpen, 50 milliliter plastic buizen gevuld met 40 milliliter water, in het open veld, vijf centimeter afstand van de aangrenzende muren. Introduceer de experimentele muis in de open velddoos, die het verst van de objecten naar de muur kijkt. Als de muis zal worden blootgesteld aan de twee verschillende objecten in de NO Test, een 50 milliliter plastic buis gevuld met 40 milliliter water, en een glazen Coplin potten pot.

Tegenwicht het object tijdens de kennismakingssessie, door de presentatie van twee identieke objecten, glazen Coplin potten potten, voor de helft van de dieren in de groep. Laat vervolgens met twee verschillende objecten 20 minuten gratis verkenning mogelijk en meet handmatig de tijd die wordt besteed aan het verkennen van beide objecten met behulp van twee stopwatches. Zodra de muis de minimale vervaldatum van 30 seconden voor beide objecten heeft bereikt, stopt u de vertrouwdheidssessie.

Voer de volgende dag de nieuwe objectherkenningstestsessie uit. Breng de muis eerst drie minuten naar het open veld voor een revalidatiesituatie en breng hem terug naar zijn thuiskooi. Op vijf centimeter afstand van de aangrenzende muren, vervang de buis met een glazen Coplin potten pot, zodat de muizen worden blootgesteld aan een buis en een glazen Coplin potten pot.

Voor de helft van de dieren die werden blootgesteld aan glazen Coplin potten potten tijdens de eerste kennismakingssessie, vervang de glazen Coplin potten pot met een 50 milliliter plastic buis gevuld met 40 milliliter water. Zodat de muizen worden blootgesteld aan een buis en een glazen Coplin potten pot. Laat 10 minuten gratis verkenning toe tijdens het opnemen met behulp van een videotrackingsysteem.

Pak dan de staart van de experimentele muis en breng hem over naar zijn thuiskooi. Gedurende drie dagen en laat de muis rusten met vrije toegang tot voedsel en water. Open Voor de NL-analyse Het Startprogramma Aangepast en Accepteren.

Klik op Afbeeldingsbron. Druk na het selecteren van de geïnstalleerde camera op de knop Instellen. Alleen de cameraresolutie en druk op Accepteren.

Klik op De knop Video's openen om de opgeslagen video te openen. Bekijk de opgeslagen video gedurende 10 minuten vanaf het moment dat de muis binnenkomt en meet de tijd die wordt besteed aan het verkennen van elk object. Op dag 15 voerde de eerste kennismakingssessie voor de PS Test voor het eerst uit.

Dat is voor de muis naar het open veld gebied voor rehabituating, voor drie minuten. Plaats de vloerplaat met het brede raster en twee identieke objecten. Plastic T-flasks gevuld met 50 milliliter water, in de open velddoos.

Vervolgens introduceerde de experimentele muis in de open veld doos tegenover de muur het verst van de objecten. Laat gratis verkenning gedurende 20 minuten. En meet handmatig de tijd die u besteedt aan het verkennen van beide objecten met behulp van twee stopwatches.

Zodra de muis de minimale verkenningstijd van 30 seconden voor beide objecten heeft bereikt, stopt u de eerste kennismakingssessie en breng het dier naar zijn kooi thuis. Om tegenwicht te bieden aan de object- en patroonscheidingstest voor de helft van de dieren, plaatst u de vloerplaat bij het brede rooster en twee identieke objecten, glazen flessen voor het tegenwichtexperiment in de open veldbox. Introduceer vervolgens de experimentele muis in de open velddoos en laat gratis verkenning gedurende 20 minuten toe.

Zodra de muis de minimale verkenningstijd van 30 seconden voor de twee objecten heeft bereikt, stopt u de eerste kennismakingssessie en breng het dier naar zijn kooi thuis. Breng de muis de volgende dag drie minuten over naar het veldgebied voor een revalidatiesituatie. En dan terug te keren naar zijn huis kooi.

Voer vervolgens de tweede kennismakingssessie uit met twee glazen flessen op de smalle roostervloer. Voer voor de tegenwichtexperimenten de tweede kennismakingssessie uit met twee T-kolven gevuld met water op een smalle roostervloer. De volgende dag voert u de testsessie voor patroonscheiding uit.

Breng de muis drie minuten lang over naar het open veldgebied zonder object voor revalidatie. En dan terug te keren naar zijn huis kooi. Plaats vervolgens de T-fles gevuld met water en een glazen fles op de smalle roostervloer.

Maak de T-flasks gevuld met water, in nieuw object. Voor tegenwicht experimenten, plaats elk object op de smalle rastervloer om de glazen fles een nieuw object in dit geval. Dan voor de experimentele muis naar het open veld gebied voor 10 minuten te verkennen.

Sta 10 minuten gratis verkenning toe en neem op met behulp van een videotrackingsysteem. Pak de staart van de experimentele muis en breng deze naar zijn thuiskooi. Meet de tijd die wordt besteed aan het verkennen van elk object met behulp van twee stopwatches.

En bereken de discriminatieratio gelijk aan het verschil in tijd die wordt besteed tussen het nieuwe object en het bekende object gedeeld door de totale tijd die de twee objecten verkent. Zes weken na de introductie van pilocarpine veroorzaakte acute aanvallen. Muizen worden onderworpen aan de nieuwe objectlocatietest.

Nieuwe objectherkenningstest en patroonscheidingstest. In die volgorde gescheiden door drie dagen rustperiodes tussen de tests. Het werd bevestigd dat er geen significante voorkeur tussen de twee objecten samen gepresenteerd.

De epileptische muizen vertoonden een aanzienlijke vermindering, in de discriminatieratio in de drie tests in vergelijking met Sham-controles. Het aantonen van ruimtelijke geheugenstoornissen. De meting van de bewegingsactiviteit toonde een aanzienlijke toename van epileptische dieren.

Terwijl de motivatie om de objecten te verkennen vergelijkbaar was tussen Sham en epileptische dieren. Ten slotte hippocampal cel dood werd geëvalueerd na een pilocarpine geïnduceerde status epilepticus met behulp van kristal violette kleuring om de aanval geïnduceerde neuronale schade te bevestigen. De pilocarpine behandelde dieren aangetoond pyknotische cellen in de en de CA3 subveld van de hippocampus, in tegenstelling tot de Sham controles.

Tel in NO en PS test is van cruciaal belang om inherente bias mogelijk in dit apparaat specifieke objecten te verminderen. Daarnaast tonen de chronische epileptische open muizen verhoogde bezorgdheid, die veelvoudige gewenningsstappen voor genoeg toejuichingsnatie aan de experimentele montages vereist. tijdswijzigingen zoals het nummer of de locatie van de objecten in ons protocol kunnen de hoeveelheid geheugentests opleveren.

Die nuttig kunnen zijn om complexe mechanismen van epilepsie geassocieerd met cognitieve achteruitgang uit te werken. Na het bekijken van deze video, moet u een goed begrip van hoe verschillende aspecten van geheugen stoornis bij epilepsie te evalueren.