使用患者源性肿瘤类器官的高通量 体外 检测

患者来源的肿瘤类器官准确地概括了肿瘤组织的结构和功能，具有更好的疾病再现性。因此，可以使用该模型准确评估患者对抗癌药物的反应。肿瘤类器官不适合体外高通量测定系统或细胞分析，因为在培养物中形成大簇。

使用该技术，开发了简单，更准确的HTS用于评估分子靶向药物。由于类器官培养与2D培养有很大不同，因此一开始可能会对培养感到困惑，但仔细观察类器官的形态变化非常重要。从液氮储存中取出冷冻的恶魔后，在37摄氏度的水浴中轻轻搅拌患者来源的肿瘤类器官一分钟。

从水浴中取出恶毒液，用70%乙醇擦拭。然后将小瓶放入生物安全柜中。将肿瘤类器官转移到含有类器官培养基的15毫升管中。

使用3毫升转移移液器，通过上下移液五次，轻轻混合肿瘤类器官和培养基。通过离心将肿瘤类器官沉淀下来。弃去上清液并将肿瘤类器官沉淀重悬于五毫升新鲜培养基中。

将肿瘤类器官悬浮液转移到T25烧瓶中，并在37摄氏度和5%二氧化碳下孵育。在第一次通过一周后，将肿瘤类器官悬浮液从两个T25烧瓶转移到两个离心管中，并通过离心将肿瘤类器官沉淀下来。估计肿瘤类器官沉淀体积，并将沉淀重悬在每管2.5毫升新鲜培养基中。

将肿瘤类器官悬浮液聚集在一个管中。将混合的悬浮液转移到含有10毫升新鲜培养基的T75烧瓶中，并在37摄氏度和5%二氧化碳下孵育。更换培养基24小时后，使用配备含有70微米目过滤器的过滤器支架的细胞片段和分散仪将肿瘤类器官切碎。

稀释15毫升肿瘤类器官悬浮液10次。使用细胞悬浮液分配器在384孔超低附着球体微孔板中接种40微升稀释的肿瘤类器官悬浮液。24小时后，使用液体处理程序在孔中加入0.04微升的测试剂溶液，从10个连续稀释液中，最终浓度范围为20微摩尔至1.0纳摩尔，并将板孵育六天。

在孵育结束时，在测试孔中加入细胞内ATP测量试剂。使用搅拌机混合板的内容物，并在约25摄氏度下孵育板10分钟。使用读板器测量作为发光的细胞内ATP含量。

在第三次传代24小时后，将384孔超低附着球体微孔板与每孔40微升培养基作为目标板放在细胞拾取和成像系统上。用六毫升培养基建立拣选室，并以1， 500倍G离心两分钟以除去气泡。在拣选室中加入四微升肿瘤类器官悬浮液，并在系统上设置拣选室。

分散后，让细胞簇在腔室底部沉降一分钟，然后启动腔室扫描。在系统上将拾取尺寸设置为 140 至 160 微米，以便自动选择细胞簇。接下来，检查扫描图像上所选细胞簇的质量，并使用拾取提示将每孔10个细胞簇转移到目标板中。

在目前的研究中，评估了抗癌剂对患者衍生的肿瘤类器官的影响。所有抗癌药物的高灵敏度通过曲线值小于282的面积下小于2微摩尔的半最大抑制浓度值表示。对于抗体依赖性细胞毒性评估，测量存在两种不同抗体时肿瘤类器官的细胞溶解百分比。

细胞溶解百分比随时间增加。在六小时没有抗体的情况下，效应器与靶细胞的比例为一比一，细胞溶解达到45%，而在二比一时，细胞溶解达到70%使用曲妥珠单抗的自然杀伤细胞介导的细胞溶解在效应与靶细胞的比例为一比一时约为60%，在六小时时为2比一时为80%。相反，西妥昔单抗对自然杀伤细胞介导的细胞溶解具有剂量依赖性影响。

在西妥昔单抗最高浓度下，在一比一的效应与靶细胞比例下观察到90%的细胞溶解，在二比一的比例下观察到100%的细胞溶解，表明西妥昔单抗的有效性很高。使用患者来源的肿瘤类器官的高通量测定系统优于评估潜在的抗癌药物，并为药物评估和个性化医疗的进步提供了机会。