Name: 用于心胸外科的青春期前小鼠幼崽的麻醉和插管 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-06-02T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: 学习针对10日龄C57BL/6J小鼠幼崽的心胸外科麻醉与插管技术。该方案采用优化的氯胺酮/赛拉嗪/阿托品麻醉方案，显著降低死亡率，为发育期心脏疾病研究提供可靠的手术模型建立方法。

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本工作由澳大利亚国家健康与医学研究理事会项目资助 [ID 1074386]、心血管研究勒杜克跨大西洋卓越网络资助 [RMG] 以及 RT Hall 信托基金资助 [RMG &amp;#38; SEI] 提供支持。

所有所述动物实验均经加文医学研究所/圣文森特医院动物伦理委员会批准，符合《澳大利亚科研用途动物护理与使用实践守则》及ARRIVE指南要求，所有实验均由经验丰富的实验动物外科医生（JW）在儿科麻醉师（JJS）的指导下完成。
1. 仪器的准备
<ol>
	<li>手术当天，准备用于10日龄幼鼠插管的专用设备（图1A，B）。包括一个加热灯、插管平台、光纤光源、小型镊子，以及用一段直径0.02 mm、长60 mm的铜丝制成的喉镜（将铜丝末端弯成直径3 mm的圆环，角度为175°； 图1B，以及一个24号塑料静脉留置针，用作气管插管。</li>
	<li>确保套管由一段19 mm长的塑料管（外径0.7 mm）连接至一个21 mm塑料雌性鲁尔锁接头组成图1B). 通过插入一段铜丝来增加套管导管的刚性 通过 鲁尔锁接头。对于潮气量约为8 μL/g的小鼠，使用总容积为130 μL的套管13,14.</li>
</ol>
2. 10日龄小鼠的麻醉
<ol>
	<li>手术当天，从一窝出生10天的C57BL/6J幼鼠的笼子中移除隔板，并将笼子置于预热至37 °C的加热垫上。</li>
	<li>使用0.5 mL胰岛素注射器和29 G针头，按照表1中不同体重分组所列的比例，以每克体重10 μL的剂量，通过腹腔注射给予幼鼠氯胺酮/甲苯噻嗪/阿托品进行麻醉。</li>
	<li>注射后立即把幼鼠放入已预先充入100%氧气的聚甲基丙烯酸甲酯（有机玻璃）腔室中，腔室温度保持在37 °C。</li>
</ol>
3. 10日龄小鼠的插管
<ol>
	<li>经过 3-4 分钟的氧合后，将幼鼠转移至插管平台，基本操作与成年小鼠相同。将幼鼠保持仰卧位（图 1C）或以 45° 角悬挂15，并使用加热灯维持体温。
	<ol>
		<li>在插管前，通过足垫夹捏反射评估麻醉深度。为获得最佳插管条件，足垫夹捏反射应仍然存在，但与清醒动物相比明显减弱。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将麻醉后的幼鼠仰卧固定于插管平台（图 1C）后，用小镊子夹住舌头，并使用一段铜丝制成的喉镜（图 1B）暴露声门和声带。通过柔性光纤光源进行透照，以辅助观察声带（图 1D）。</li>
	<li>使用已加固的套管，倾斜套管使其鲁尔锁端略低于尖端（约 10°），一旦声带分开，立即插入套管并推进，直至鲁尔锁接头刚好位于口腔外。插管完成后立即移除铜丝。 
	注意：此年龄段小鼠插管时不应感到明显阻力，除非套管插入过深而触及气管隆嵴。
	<ol>
		<li>插管后通过动物是否能够自主呼吸来评估麻醉深度。通过短暂阻塞插管导管，观察是否随之停止胸廓运动，以确认自主呼吸幼鼠的气管插管成功。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>立即将插管后的幼鼠转移至预热垫（37 °C），并将气管内套管连接至呼吸机，以 1 L/min 的流速输送 100% 氧气，潮气量根据幼鼠体重分别设置为：3.15–4.59 g 幼鼠使用 30 μL/次，4.50–5.49 g 幼鼠使用 40 μL/次，5.50–8.10 g 幼鼠使用 50 μL/次，呼吸频率为 150 次/分钟。</li>
	<li>应迅速完成上述操作，全程在 &#60;15 秒内完成，以尽量减少重复呼吸。</li>
</ol>
4. 10日龄小鼠心肌梗死手术
<ol>
	<li>为手术诱导外科麻醉平面，将流入呼吸机的气体从100%氧气切换至含4.5%异氟烷的氧气（异氟烷浓度由蒸发器控制），持续4–5分钟。
	<ol>
		<li>切换至异氟烷后，通过观察胸壁运动频率是否与呼吸机频率一致，再次确认气管插管位置正确。自主呼吸消失，且尾部或足垫夹捏反射消失，表明已达到外科麻醉平面（通常在4–5分钟后）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>以2%异氟烷在氧气中维持麻醉。</li>
	<li>在手术显微镜（10倍和16倍物镜）下进行心肌梗死手术，步骤如文献16所述。
	<ol>
		<li>使用碘伏或氯己定消毒液与70%酒精交替多次环形擦拭皮肤进行消毒。使用精细剪刀在左侧胸壁第三与第四肋骨之间（第四肋间隙）做一横向皮肤切口。使用精细镊子钝性分离肋间组织以打开胸腔，并使用牵开器保持切口开放。</li>
		<li>在左心耳远端处，使用9-0单丝聚丙烯缝线结扎左冠状动脉以诱导心肌梗死。心肌梗死手术过程约持续10分钟，术后使用7-0 Prolene缝线缝合皮肤，并用碘伏消毒切口。用70%乙醇或生理盐水清洁幼崽体表血液。 
		注：在未成年幼崽中结扎左冠状动脉几乎无出血，与成年动物结扎情况相似。</li>
		<li>使用0.5 mL胰岛素注射器和29 G针头依次给予以下药物：阿替美唑（1–5 mg/kg，10 μL，腹腔注射），用于快速逆转镇静；镇痛药（布托啡诺，0.075 mg/kg，10 μL，皮下注射）；以及生理盐水（50 μL，腹腔注射）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>通过停止异氟烷供应使动物恢复，确保几分钟内自主呼吸恢复。
	<ol>
		<li>将幼崽放回预热并预先充氧的恢复舱内，持续监测直至翻正反射恢复，此时可拔除气管插管。</li>
		<li>用母鼠笼内垫料轻轻擦拭幼崽，保持其体温，检查呼吸是否规律，并确认幼崽具备自主活动能力。此举可减少母鼠术后食仔行为的发生。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>当所有幼崽完全从麻醉中恢复后，将母鼠放回笼中。 
	注：单只幼崽的准备、麻醉、插管、手术及恢复全过程耗时通常为40–60分钟。</li>
	<li>将母鼠与幼崽共同饲养于笼中，笼子一半置于37 °C加热垫上，另一半不加热，过夜饲养。</li>
</ol>
5. 手术后梗死面积的评估
<ol>
	<li>第3天rd 术后第1天，将幼鼠置于已预先平衡的亚克力玻璃舱内，以1 mL/min的流速吸入4.5%异氟烷（溶于氧气中）进行麻醉。</li>
	<li>当达到外科麻醉平面（通过足垫夹捏反射评估，约4-5分钟后），将幼鼠从麻醉舱中取出，用胶带固定尾巴，使其仰卧于加热垫上。</li>
	<li>将一根线置于门齿上方并用胶带固定，以保持头部伸展，随后将头部放入与呼吸机相连的鼻罩中，呼吸机以200 µL/次、150次/分钟的频率输送含4.5%异氟烷的氧气。以2%异氟烷维持手术麻醉深度。</li>
	<li>用70%乙醇对皮肤进行消毒。使用精细剪刀沿气管方向在右侧颈总动脉上方的皮肤做1 cm切口，暴露血管后用单腔聚乙烯管（外径0.61 mm，内径0.28 mm）插管，注入0.2 mL肝素化生理盐水（200 U），持续1分钟，以防止血液凝固。</li>
	<li>在1分钟内将异氟烷浓度提高至4.5%（以氧气为载体），随后在2秒内快速注入0.2 mL 3.3 M KCl，使心脏停搏于舒张期。</li>
	<li>解剖右侧颈静脉 通过 同一处切口进行灌注。用0.2 mL磷酸盐缓冲液（PBS）灌注心脏，随后用0.1 mL的0.2%阿尔新蓝（Alcian Blue）灌注以染色非梗死的远端心肌。检查灌注是否成功，成功标志为血液、PBS以及随后的阿尔新蓝被充分冲洗出来。 通过 颈静脉</li>
	<li>打开胸腔，通过解剖周围结缔组织和血管分离心脏。用 PBS 冲洗心脏，根据需要去除心房，并使用安装在手术显微镜上的相机（物镜倍数为 10x）拍摄心脏照片。</li>
</ol>

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<li>West, G. B., Woodruff, W. H., Brown, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allometric+scaling+of+metabolic+rate+from+molecules+and+mitochondria+to+cells+and+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Allometric scaling of metabolic rate from molecules and mitochondria to cells and mammals.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99, Suppl 1 2473-2478 (2002).</li>
<li>Moscovitz, J. E., Aleksunes, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+metabolism+and+transport+pathways+in+the+rodent+and+human+fetal+liver%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Science%22%5BJournal%5D)">Establishment of metabolism and transport pathways in the rodent and human fetal liver.</a> International Journal of Molecular Science. 14 (12), 23801-23827 (2013).</li>
<li>Blevins, C. E., Celeste, N. A., Marx, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+oxygen+supplementation+on+injectable+and+inhalant+anesthesia+in+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Effects of oxygen supplementation on injectable and inhalant anesthesia in C57BL/6 mice.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 60 (3), 289-297 (2021).</li>
</ol>

作者声明无利益冲突。

目前尚无针对10日龄小鼠进行心脏胸外科手术的麻醉与插管操作的完善记录方法。为此，我们根据体重调整了氯胺酮/赛拉嗪/阿托品的给药方案，结果表明，对于体重较低（3.15–4.49 g）、中等（4.50–5.49 g）和较高（5.50–8.10 g）的幼鼠，分别采用20/4/0.12 mg/kg、30/4/0.12 mg/kg和50/6/0.18 mg/kg的剂量可有效实现插管。插管后的存活率与体重呈正相关（低体重组、中体重组和高体重组的存活率分别为59%、70%和80%）。鉴于对10日龄幼鼠进行插管操作存在较大难度且伴随较高的死亡率，我们建议仅对体重至少为5.50 g的10日龄幼鼠实施心脏胸外科手术。该插管技术的一个局限性在于其依赖操作者的技能水平和经验，以及学习掌握的速度。然而，预计具备成年小鼠插管经验的操作者，在对10窝每窝7至8只幼鼠进行练习后，即可熟练掌握青春期前幼鼠的插管技术。另一局限性是插管及心肌梗死手术后幼鼠的整体存活率介于55%（最低体重组）至70%（最高体重组）之间。尽管如此，该存活率与报道中无需插管的1日龄幼鼠在冰上固定后接受心肌梗死手术的60%–70%存活率相近8。</p...

小鼠模型在临床前心胸外科研究中是不可或缺的工具，尤其是因为易于构建基因工程小鼠品系，并且易于通过外科操作建立病理疾病模型，从而可用于研究心脏损伤后心肌的再生能力1。值得注意的是，与成年小鼠心肌细胞已退出细胞周期不同，出生后0至2天的新生小鼠心脏在心尖切除或心肌梗死诱导后能够实现修复，且瘢痕形成极少2,3,4&#160;。相比之下，出生7天的小鼠心脏再生能力不完全，瘢痕形成的发生率更高2,3。由于左心室心尖部位的心肌细胞在出生后长达两周内仍保持增殖能力，因此对出生后0至14天小鼠心脏损伤后再生机制的研究，可能有助于识别促进成年受损心脏再生的治疗靶点5。
建立心脏损伤的小鼠模型需要在麻醉下进行外科操作。该过程需打开胸腔以暴露心脏，通常需要气管插管和机械通气。小鼠品系、体重和年龄会影响其对麻醉剂的敏感性6。成年小鼠可使用多种麻醉剂，其中常用于插管的方案为每公斤体重给予100/13/0.5 mg的氯胺酮/赛拉嗪/阿托品6,7。新生小鼠（0–7日龄）缺乏中枢性疼痛反射，可通过冰上麻醉实现有效固定，手术过程中无需气管插管6,8,9。而幼年前期小鼠（8–14日龄）无法通过低温实现有效麻醉9,10，进行心胸外科手术时必须实施气管插管。目前尚无针对14日龄以下幼年前期小鼠开展心胸外科手术的既往研究。根据我们的经验，在14日龄以下的幼年前期小鼠中，使用异氟烷麻醉后进行气管插管操作较为困难。文献报道，适用于7日龄以上小鼠的推荐注射用麻醉方案为每公斤体重50–150 mg氯胺酮和5–10 mg赛拉嗪10。幼年前期小鼠神经系统仍在发育中，其药物反应及药物代谢能力与成年动物存在显著差异6。这使其更容易出现体液、电解质和酸碱平衡紊乱，以及低血糖和低体温，原因不仅在于其高代谢率会迅速耗尽有限的能量储备，还在于其体温调节机制尚未发育成熟6,11,12。因此，目前关于既能便于插管又能最大程度提高幼年前期小鼠存活率的麻醉方案的信息仍十分有限。
本研究对体重在3-8 g之间的10日龄C57BL/6J小鼠幼崽，通过实验性滴定确定氯胺酮/赛拉嗪/阿托品的给药方案，旨在达到足以实施气管插管以进行后续心胸外科手术的麻醉深度，同时尽量降低动物死亡率。此外，我们优化了动物操作技术，以减少因插管、手术及术后母鼠食仔所导致的死亡率。

<table><tbody><tr><td>阿替美唑（Antisedan）</td><td>Provet (NSW) Pty Ltd</td><td>ATIP I</td><td></td></tr><tr><td>阿托品 600 mcg/mL</td><td>Clifford Hallam Healthcare Pty Ptd</td><td>1957699 PFIZER-0143386</td><td></td></tr><tr><td>聚维酮碘（Betadine）</td><td>Livingstone International</td><td>BU0520</td><td></td></tr><tr><td>丁丙诺啡（Temgesic）</td><td>Provet (NSW) Pty Ltd</td><td>TEMG I</td><td></td></tr><tr><td>光纤光源</td><td>Leica&amp;nbsp;</td><td>3011350</td><td>CLS 150X</td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>GraphPad Software, LLC</td><td>版本 9.1.2</td><td></td></tr><tr><td>插管平台&amp;nbsp;</td><td>—</td><td>—</td><td>任何坚固的盒子（例如塑料吸头盒），尺寸约为 12 (长) × 8.5 (宽) × 7.5 cm (高)</td></tr><tr><td>异氟烷</td><td>Provet (NSW) Pty Ltd</td><td>ISOF 07</td><td></td></tr><tr><td>氯胺酮 100 mg/mL</td><td>Provet (NSW) Pty Ltd</td><td>KETAI1</td><td></td></tr><tr><td>24 号塑料静脉套管 Polywin Safety&amp;nbsp;</td><td>BD Insyte&amp;nbsp;</td><td>CE0086</td><td>一段长度为 19 mm、外径 0.7 mm 的塑料管，连接一个 21 mm 塑料雌性鲁尔锁接头；套管总体积为 130 &amp;mu;L</td></tr><tr><td>单腔聚乙烯管</td><td>Critchley Electrical Products Pty Ltd Auburn NSW</td><td></td><td>外径 0.61 mm，内径 0.28 mm</td></tr><tr><td>小型镊子</td><td>F.S.T.</td><td>NO 11051-10</td><td></td></tr><tr><td>手术显微镜（可选配相机）</td><td>Leica&amp;nbsp;</td><td>M651（Leica IC80 HD 相机）</td><td>10× 和 16× 物镜</td></tr><tr><td>7-0 普理灵缝线</td><td>Ethicon</td><td>8708H</td><td></td></tr><tr><td>9-0 单丝聚丙烯缝线</td><td>Ethicon</td><td>2813</td><td></td></tr><tr><td>V-1 台式带主动废气清除功能的异氟烷麻醉系统</td><td>VetEquip</td><td>901820</td><td></td></tr><tr><td>带通风口的 2 升亚克力诱导室</td><td>VetQuip Pty Ltd</td><td>942102</td><td>25 cm (长) × 13 cm (宽) × 11 cm (高)</td></tr><tr><td>加热灯</td><td>Brilant Lighting</td><td>99223</td><td></td></tr><tr><td>赛拉嗪</td><td>Provet (NSW) Pty Ltd</td><td>XYLA Z 2</td><td></td></tr></tbody></table>

麻醉与插管未成年幼鼠以进行心胸外科手术

Anesthesia and Intubation of Preadolescent Mouse Pups for Cardiothoracic Surgery

小鼠外科模型在临床前研究中具有重要作用。通过0至14日龄小鼠的心胸外科手术模型，可深入了解心脏损伤后心肌再生的机制，因为这些小鼠的心肌细胞仍具有增殖能力，而与成年小鼠不同。出生7天内的幼鼠可通过低温实现有效固定，进行心胸外科手术时无需气管插管。然而，青春期前（8至14日龄）的幼鼠则需要气管插管，但该操作具有挑战性，且目前关于促进插管的麻醉方案信息较少。&#160;本文介绍了在10日龄C57BL/6J幼鼠中使用氯胺酮/赛拉嗪/阿托品的剂量方案，该方案可实现气管插管，同时最大限度降低动物死亡率。通过根据体重对氯胺酮/赛拉嗪/阿托品剂量进行经验性滴定，发现不同体重幼鼠对麻醉的反应呈非线性关系：体重在3.15–4.49 g（n = 22）、4.50–5.49 g（n = 20）和5.50–8.10 g（n = 20）的幼鼠分别使用20/4/0.12 mg/kg、30/4/0.12 mg/kg和50/6/0.18 mg/kg的剂量可成功完成插管。体重较低的幼鼠需要更多的插管尝试次数（p &#60; 0.001）。插管后存活率与体重呈正相关（低、中、高体重组分别为59%、70%和80%，R2 = 0.995）。在插管后进行心肌梗死手术时，使用100%氧气中4.5%异氟烷诱导外科麻醉深度，并以100%氧气中2%异氟烷维持。三组体重幼鼠术后存活率相似，分别为92%、86%和88%（p = 0.91）。结合优化的插管与手术操作技术，以及术后减少母鼠对幼鼠的食仔行为，整个操作流程（插管加手术）的总体存活率亦与体重相关（低、中、高体重组分别为55%、60%和70%，R2 = 0.978）。鉴于10日龄幼鼠插管操作困难且伴随较高死亡率，我们建议仅对体重至少为5.5 g的10日龄幼鼠进行心胸外科手术。

10日龄小鼠的麻醉。 10日龄幼鼠可在4-5分钟内通过4.5%异氟烷实现麻醉；然而，在气管插管准备过程中，它们会从麻醉状态中恢复。由于体型较小，使用标准鼻罩输送异氟烷进行麻醉时无法完成插管。我们此前曾对15日龄、21日龄幼鼠及成年小鼠的心胸外科手术采用过剂量分别为100/13/0.5 mg/kg的氯胺酮/赛拉嗪/阿托品麻醉方案4,7。在包括供氧在内的初步实验中发现，文献推荐的注射用麻醉剂量（氯胺酮50-150 mg/kg，赛拉嗪5-10 mg/kg）10在10日龄幼鼠中导致不可接受的高死亡率。鉴于10日龄幼鼠体重与同窝数量之间存在显著的负相关关系（R2 = 0.250，p &lt; 0.0001；图2），我们根据体重分组对麻醉方案进行了滴定调整。将氯胺酮/赛拉嗪/阿托品剂量分别降低至50/6/0.18 mg/kg，可使体重为5.5-8.10 g的自主呼吸幼鼠达...

小鼠心脏胸外科手术模型 &gt;7日龄小鼠需要进行插管，但对学龄前（8-14日龄）幼鼠实施插管具有挑战性，且目前关于插管麻醉方案的信息十分有限。本文提供了10日龄C57BL/6J幼鼠使用氯胺酮/赛拉嗪/阿托品的给药方案，可在实现气管插管的同时，最大限度降低动物死亡率。

小鼠外科模型在临床前研究中具有重要作用。通过心脏损伤后心肌再生的机制研究，可能……

本方案是首个有文献记载的针对未成年小鼠幼崽进行心血管外科手术时实施麻醉和气管插管的方法。我们开发了麻醉方案、专用设备以及特定的操作技术，可在最大限度降低动物死亡率的前提下，实现对出生10天的C57 Black Six J小鼠幼崽进行气管插管以开展心血管外科手术。我们预计，具备成年小鼠插管经验的操作人员，在对7至8只一窝的10窝幼崽进行练习后，即可掌握未成年小鼠的插管技术。本操作将由本实验室高级职员科学家Dr. Jianxin Wu进行示范。实验当天，按照论文所述设置针对10日龄幼鼠插管的专用设备。手术时使用由一段19毫米长的塑料管连接一个21毫米塑料雌性接头锁紧适配器构成的导管。通过接头锁紧适配器插入一段铜丝，以增加导管塑料管的硬度。将麻醉后的小鼠仰卧位固定在插管平台上。在对麻醉后的小鼠进行插管前，需通过足垫夹捏反射检查麻醉深度。足垫夹捏反射必须存在，但应明显弱于清醒动物的反应。用小镊子夹住幼鼠的舌头，使用由一段铜丝和柔性光纤光源制成的喉镜暴露声门和声带。倾斜硬化的导管，使套管锁端略低于尖端，一旦声带分开，立即插入导管并推进，直到套管锁接头刚好位于口腔外。随后立即取出铜丝。插管后通过动物自主呼吸的能力来评估麻醉深度。将已插管的幼崽转移至设定为37摄氏度的保温垫上。通过短暂阻塞插管导管以确认自主呼吸幼崽的气管插管成功，观察是否因此阻止胸廓运动。将气管插管连接至呼吸机，以每分钟1升的流速输送100%氧气。操作应少于15秒，以尽量减少重复呼吸。手术麻醉深度达到外科手术平面后，通过检查胸壁运动频率是否与呼吸机频率一致，确认气管插管位置正确。将幼鼠置于配备10倍和16倍物镜的手术显微镜下进行心肌梗死手术。用手术刀在左侧胸壁第三与第四肋骨之间的水平位置切开皮肤并消毒。借助精细镊子，钝性分离肋间组织以打开胸腔，并使用牵开器保持术野开放。通过使用9-0聚丙烯单丝缝线结扎左心耳远端的左冠状动脉，诱导心肌梗死。心肌梗死手术持续10分钟后，用7-0缝线缝合皮肤。用70%乙醇或生理盐水清除血液，并用碘伏消毒切口。让动物恢复，并确保在几分钟内自主呼吸恢复。然后将幼崽放回预充氧的保温箱中，并在恢复期间持续监测。当翻正反射恢复后，拔除幼崽的气管插管。用母鼠笼内的垫料轻轻擦拭幼鼠。保持幼鼠温暖，并检查其呼吸是否规律，以及是否能够自主活动。将母鼠放回笼中。然后在幼崽完全从麻醉中恢复后将其全部放回。将母鼠和幼崽一起在笼中饲养过夜，笼子一半置于设定为37摄氏度的加热垫上。术后第三天，用胶带固定麻醉后的幼崽尾巴，使其仰卧于加热垫上。将一根线置于门齿上方，用胶带将幼鼠固定在适当位置，并使其头部伸展进入鼻罩。用70%乙醇消毒皮肤。使用精细剪刀沿气管方向，在右侧颈总动脉上方的皮肤做一厘米长的切口，暴露血管后，使用连接26号针头的单腔聚乙烯管进行插管，按照文中所述诱发心脏停搏后，注入0.2毫升肝素化生理盐水，持续一分钟。通过同一切口分离右侧颈静脉，并将其横断。用 0.2 毫升 PBS 灌注心脏，随后用 0.1 毫升 0.2% 阿利新蓝灌注，以染色非梗死的远端心肌。通过观察颈静脉是否将血液、PBS 及阿利新蓝完全冲洗出来，判断灌注是否成功。操作完成后，打开胸腔，通过解剖周围结缔组织和血管，游离并切除心脏。用 PBS 冲洗心脏，然后去除心房，并使用安装在手术显微镜上的相机以 10 倍物镜拍摄心脏照片。在初步实验中，针对出生 10 天的幼鼠优化了麻醉方案。每千克体重给予 50 毫克氯胺酮、6 毫克甲苯噻嗪和 0.18 毫克阿托品的剂量，可达到足够的麻醉深度，使体重为 5.5 至 7.30 克、自主呼吸的幼鼠顺利完成气管插管。由于较轻的幼鼠无法耐受较高剂量的麻醉，将麻醉剂剂量减少至每千克30毫克氯胺酮、每千克4毫克赛拉嗪和每千克0.12毫克阿托品后，可对体重为4.50至5.49克的幼鼠进行插管。相比之下，进一步将氯胺酮剂量降低至每千克20毫克后，可对体重为3.15至4.49克的幼鼠进行插管。该表格还显示了继续接受手术的已插管幼鼠的数量及其所占百分比。体重较低的幼崽比体重较重的幼崽更难进行插管，需要更多次尝试，导致其存活率低于体重最高的组别。此外，体重最高组别中接受插管的幼崽数量更多地进入了心肌梗死手术阶段，而低体重和中等体重组别则较少。心肌梗死手术后两天的存活率在不同体重组之间保持一致，为86%至92%。麻醉深度对于插管和存活至关重要。如果麻醉过浅，插管将变得困难；如果过深，幼鼠在插管期间或之后会停止自主呼吸。我们的麻醉插管方案可实现对未成年小鼠进行心脏胸外科手术模型的建立，从而允许在此阶段开展例如肺、食管和心脏的相关研究。

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科研

JoVE Journal

Biology

生物学

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学习针对10日龄C57BL/6J小鼠幼崽的心胸外科麻醉与插管技术。该方案采用优化的氯胺酮/赛拉嗪/阿托品麻醉方案，显著降低死亡率，为发育期心脏疾病研究提供可靠的手术模型建立方法。

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