Name: 实时空隙点测定 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-02-10T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: 了解实时空隙点测定方法，用于研究小鼠排尿行为的生理学与神经行为学机制。该技术通过视频监测记录昼夜不同阶段的排尿事件，提供时间、空间及体积数据，适用于健康与疾病状态下的膀胱功能研究。

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本工作由美国国立卫生研究院（NIH）资助项目R01DK119183（资助G.A.和M.D.C.）、P30DK079307项目资助的试点项目奖（资助M.G.D.）、美国泌尿学会职业发展奖、Winters基金会资助项目（资助N.M.），以及匹兹堡肾脏研究中心（P30DK079307）的细胞生理学与模式生物肾脏成像核心设施共同支持。

<ol><li>Dalghi, M. G., Montalbetti, N., Carattino, M. D., Apodaca, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+urothelium%3A+life+in+a+liquid+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">The urothelium: life in a liquid environment.</a> Physiological Reviews. 100 (4), 1621(2020).</li>
<li>de Groat, W. C., Griffiths, D., Yoshimura, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+control+of+the+lower+urinary+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Comprehensive+Physiology%22%5BJournal%5D)">Neural control of the lower urinary tract.</a> Comprehensive Physiology. 5 (1), 327(2015).</li>
<li>Dalghi, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+roles+for+PIEZO1+and+PIEZO2+in+urothelial+mechanotransduction+and+lower+urinary+tract+interoception%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Functional roles for PIEZO1 and PIEZO2 in urothelial mechanotransduction and lower urinary tract interoception.</a> JCI Insight. 6 (19), (2021).</li>
<li>Montalbetti, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bladder+infection+with+uropathogenic+Escherichia+coli+increases+the+excitability+of+afferent+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Bladder infection with uropathogenic Escherichia coli increases the excitability of afferent neurons.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 322 (1), 1(2022).</li>
<li>Montalbetti, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+urothelial+paracellular+transport+promotes+cystitis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Increased urothelial paracellular transport promotes cystitis.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 309 (12), 1070(2015).</li>
<li>Montalbetti, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urothelial+tight+junction+barrier+dysfunction+sensitizes+bladder+afferents%5BTitle%5D)+AND+%22eNeuro%22%5BJournal%5D)">Urothelial tight junction barrier dysfunction sensitizes bladder afferents.</a> eNeuro. 4 (3), (2017).</li>
<li>Montalbetti, N., Stocker, S. D., Apodaca, G., Bastacky, S. I., Carattino, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urinary+K%2B+promotes+irritative+voiding+symptoms+and+pain+in+the+face+of+urothelial+barrier+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Urinary K+ promotes irritative voiding symptoms and pain in the face of urothelial barrier dysfunction.</a> Scientific Reports. 9 (1), 5509(2019).</li>
<li>Kim, A. K., Hamadani, C., Zeidel, M. L., Hill, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urological+complications+of+obesity+and+diabetes+in+males+and+females+of+three+mouse+models%3A+temporal+manifestations%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Urological complications of obesity and diabetes in males and females of three mouse models: temporal manifestations.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 318 (1), 160(2020).</li>
<li>Bartolone, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micturition+defects+and+altered+bladder+function+in+the+klotho+mutant+mouse+model+of+aging%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Clinical+and+Experimental+Urology%22%5BJournal%5D)">Micturition defects and altered bladder function in the klotho mutant mouse model of aging.</a> American Journal of Clinical and Experimental Urology. 8 (3), (2020).</li>
<li>de Rijk, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging-associated+changes+in+oxidative+stress+negatively+impacts+the+urinary+bladder+urothelium%5BTitle%5D)+AND+%22International+Neurourology+Journal%22%5BJournal%5D)">Aging-associated changes in oxidative stress negatively impacts the urinary bladder urothelium.</a> International Neurourology Journal. 26 (2), 111(2022).</li>
<li>Coyne, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prevalence+of+lower+urinary+tract+symptoms+%28LUTS%29+and+overactive+bladder+%28OAB%29+by+racial%2Fethnic+group+and+age%3A+results+from+OAB-POLL%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourology+and+Urodynamics%22%5BJournal%5D)">The prevalence of lower urinary tract symptoms (LUTS) and overactive bladder (OAB) by racial/ethnic group and age: results from OAB-POLL.</a> Neurourology and Urodynamics. 32 (3), 230(2013).</li>
<li>Wittig, L., Carlson, K. V., Andrews, J. M., Crump, R. T., Baverstock, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetic+bladder+dysfunction%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Diabetic bladder dysfunction: a review.</a> Urology. 123, (2019).</li>
<li>Irwin, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Population-based+survey+of+urinary+incontinence%2C+overactive+bladder%2C+and+other+lower+urinary+tract+symptoms+in+five+countries%3A+results+of+the+EPIC+study%5BTitle%5D)+AND+%22European+Urology%22%5BJournal%5D)">Population-based survey of urinary incontinence, overactive bladder, and other lower urinary tract symptoms in five countries: results of the EPIC study.</a> European Urology. 50 (6), 1314(2006).</li>
<li>Bogart, L. M., Berry, S. H., Clemens, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Symptoms+of+interstitial+cystitis%2C+painful+bladder+syndrome+and+similar+diseases+in+women%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Urology%22%5BJournal%5D)">Symptoms of interstitial cystitis, painful bladder syndrome and similar diseases in women: a systematic review.</a> The Journal of Urology. 177 (2), 450(2007).</li>
<li>Foxman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urinary+tract+infection+syndromes%3A+occurrence%2C+recurrence%2C+bacteriology%2C+risk+factors%2C+and+disease+burden%5BTitle%5D)+AND+%22Infectious+Disease+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Urinary tract infection syndromes: occurrence, recurrence, bacteriology, risk factors, and disease burden.</a> Infectious Disease Clinics of North America. 28 (1), 1(2014).</li>
<li>Fall, M., Logadottir, Y., Peeker, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interstitial+cystitis+is+bladder+pain+syndrome+with+Hunner%27s+lesion%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Urology%22%5BJournal%5D)">Interstitial cystitis is bladder pain syndrome with Hunner's lesion.</a> International Journal of Urology. 21, 79(2014).</li>
<li>Birder, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urinary+bladder%2C+cystitis+and+nerve%2Furothelial+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Autonomic+Neuroscience%3A+Basic+%26+Clinical%22%5BJournal%5D)">Urinary bladder, cystitis and nerve/urothelial interactions.</a> Autonomic Neuroscience: Basic & Clinical. 182, 89(2014).</li>
<li>Rosen, J. M., Klumpp, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+pain+from+urinary+tract+infection%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Urology.+21+Suppl%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of pain from urinary tract infection.</a> International Journal of Urology. 21 Suppl. 1, 26(2014).</li>
<li>Birder, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+control+of+the+lower+urinary+tract%3A+peripheral+and+spinal+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourology+and+Urodynamics%22%5BJournal%5D)">Neural control of the lower urinary tract: peripheral and spinal mechanisms.</a> Neurourology and Urodynamics. 29 (1), 128(2010).</li>
<li>Desjardins, C., Maruniak, J. A., Bronson, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+rank+in+house+mice%3A+differentiation+revealed+by+ultraviolet+visualization+of+urinary+marking+patterns%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Social rank in house mice: differentiation revealed by ultraviolet visualization of urinary marking patterns.</a> Science. 182 (4115), 939(1973).</li>
<li>Sugino, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Voided+stain+on+paper+method+for+analysis+of+mouse+urination%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourology+and+Urodynamics%22%5BJournal%5D)">Voided stain on paper method for analysis of mouse urination.</a> Neurourology and Urodynamics. 27 (6), 548(2008).</li>
<li>Hill, W. G., Zeidel, M. L., Bjorling, D. E., Vezina, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Void+spot+assay%3A+recommendations+on+the+use+of+a+simple+micturition+assay+for+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Void spot assay: recommendations on the use of a simple micturition assay for mice.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 315 (5), (2018).</li>
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<li>Wegner, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Void+spot+assay+procedural+optimization+and+software+for+rapid+and+objective+quantification+of+rodent+voiding+function%2C+including+overlapping+urine+spots%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Void spot assay procedural optimization and software for rapid and objective quantification of rodent voiding function, including overlapping urine spots.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 315 (4), (2018).</li>
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<li>Dmochowski, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bladder+outlet+obstruction%3A+etiology+and+evaluation.+Reviews+in+Urology%5BTitle%5D)+AND+%227+%28Suppl+6%29%2C+S3%E2%80%93S13%22%5BJournal%5D)">Bladder outlet obstruction: etiology and evaluation. Reviews in Urology.</a> 7 (Suppl 6), S3–S13. , (2005).</li>
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<li>Verstegen, A. M., Tish, M. M., Szczepanik, L. P., Zeidel, M. L., Geerling, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micturition+video+thermography+in+awake%2C+behaving+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Micturition video thermography in awake, behaving mice.</a> Journal of Neuroscience Methods. 331, 108449(2020).</li>
<li>Keller, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Voluntary+urination+control+by+brainstem+neurons+that+relax+the+urethral+sphincter%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Voluntary urination control by brainstem neurons that relax the urethral sphincter.</a> Nature Neuroscience. 21 (9), (2018).</li>
<li>Hou, X. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+control+circuit+for+context-dependent+micturition%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Central control circuit for context-dependent micturition.</a> Cell. 167 (1), 73(2016).</li>
<li>Negoro, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+urinary+bladder+Connexin43+and+the+circadian+clock+in+coordination+of+diurnal+micturition+rhythm%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communication%22%5BJournal%5D)">Involvement of urinary bladder Connexin43 and the circadian clock in coordination of diurnal micturition rhythm.</a> Nature Communication. 3, (2012).</li>
<li>Montalbetti, N., Carattino, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acid-sensing+ion+channels+modulate+bladder+nociception%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Acid-sensing ion channels modulate bladder nociception.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 321 (5), (2021).</li>
<li>Chen, H., Zhang, L., Hill, W. G., Yu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+the+voiding+spot+assay+in+mice%3A+a+simple+method+with+complex+environmental+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Evaluating the voiding spot assay in mice: a simple method with complex environmental interactions.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 313 (6), (2017).</li>
<li>Dalghi, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+and+distribution+of+PIEZO1+in+the+mouse+urinary+tract%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Expression and distribution of PIEZO1 in the mouse urinary tract.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 317 (2), 303(2019).</li>
<li>Birder, L., Andersson, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+modelling+of+interstitial+cystitis%2Fbladder+pain+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22International+Neurourology+Journal%22%5BJournal%5D)">Animal modelling of interstitial cystitis/bladder pain syndrome.</a> International Neurourology Journal. 22, (2018).</li>
<li>Okinami, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+detrusor+gap+junction+communications+induce+storage+symptoms+in+bladder+inflammation%3A+a+mouse+cyclophosphamide-induced+model+of+cystitis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Altered detrusor gap junction communications induce storage symptoms in bladder inflammation: a mouse cyclophosphamide-induced model of cystitis.</a> PLoS One. 9 (8), (2014).</li>
<li>Tungtur, S. K., Nishimune, N., Radel, J., Nishimune, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Behavior+Tracker%3A+An+economical+method+for+tracking+behavior+in+home+cages%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Mouse Behavior Tracker: An economical method for tracking behavior in home cages.</a> Biotechniques. 63 (5), (2017).</li>
<li>Negoro, H., Kanematsu, A., Yoshimura, K., Ogawa, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronobiology+of+micturition%3A+putative+role+of+the+circadian+clock%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Urology%22%5BJournal%5D)">Chronobiology of micturition: putative role of the circadian clock.</a> The Journal of Urology. 190 (3), (2013).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

引入视频监测是一种经济高效的改进方法，相较于传统的排尿斑点分析法（VSA）具有多项优势。在通常作为终点检测方法的常规VSA中，难以区分重叠的排尿斑点。这一问题不容忽视，因为当实验持续数小时时，小鼠倾向于在笼子的同一区域（通常在角落）多次排尿。因此，实时排尿斑点分析法（RT-VSA）的首要优势在于，研究人员能够轻松识别部分或完全重叠的单个排尿斑点。这一点在图12所示的实验中得到了充分展示。在此案例中，视频记录证实小鼠在同一角落排尿三次，形成了重叠的排尿斑点。如果仅在实验结束时按照常规VSA的方式对滤纸进行分析，则只能识别出一个斑点。因此，尽管传统的终点VSA在识别排尿行为的显著差异方面具有一定价值，但可能无法区分更为细微的表型差异。随着遗传学领域的不断进步以及转基因动物的广泛应用，开发能够准确评估排尿行为的方法显得至关重要。
其次，实时视频尿斑分析（RT-VSA）可为研究者提供关于排尿事件的时间信息。因此，研究者能够确定真实的排尿频率，并建立不同排尿事件之间的关联。例如，当观察到多个小尿斑（SVS）紧邻一个较大的主尿斑（PV...

尿液的储存与排泄由中枢神经系统中的中枢回路协调控制，该回路通过盆腔神经和内脏大神经接收关于膀胱充盈状态的信息。尿路上皮是自肾盂至近端尿道的泌尿道内衬上皮，可形成一道紧密屏障，阻止尿液中的代谢废物和病原体侵入。它还是感觉网络的重要组成部分，能够感知膀胱的充盈状态，并将该信息传递至下方组织和传入神经1,2。尿路上皮屏障的破坏，或尿路上皮机械转导通路的改变，可能导致排尿功能障碍，并伴随尿频、尿急、夜尿增多和尿失禁等下尿路症状3,4,5,6,7。同样，衰老、糖尿病、下尿路感染、间质性膀胱炎以及其他影响膀胱或调控其功能的相关神经回路的疾病过程，均已被证实可导致膀胱功能障碍8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19。要更深入理解正常与异常的排尿行为，关键在于建立能够可靠区分不同排尿模式的方法。&#160;
传统上，小鼠的自主排尿行为研究主要采用 Desjardins 及其同事开发的排尿斑点检测法（void spot assay, VSA）20，该方法因其操作简便、成本低廉且无创而被广泛采用8,21,22,23,24。该检测通常作为终点实验进行：将小鼠置于铺有滤纸的笼中一段时间，随后在紫外光（UV）照射下观察滤纸，通过计数尿液斑点的数量并评估其大小来分析排尿情况（在此条件下尿液斑点会发出荧光）20。尽管具有诸多优势，传统的 VSA 仍存在一些主要局限性。由于小鼠常在相同区域排尿，研究人员必须将实验时间限制在相对较短的范围内（≤4 h）25。即使在较短时间进行 VSA，仍几乎无法分辨落在大斑点之上的小排尿斑点（SVSs），也难以将 SVSs 与尾巴或脚掌附着的尿液残留区分开来。此外，很难判断 SVSs 是频繁但独立的排尿事件所致（这种表型常在膀胱炎反应中观察到4,26），还是排尿后滴沥所致（该表型与膀胱出口梗阻相关27）。同时，出于在工作时间内完成实验的需求，以及在光照关闭后难以进入动物饲养设施的限制，这类实验通常被局限于24小时昼夜节律的光照期。因此，这些时间限制阻碍了对小鼠在其活跃的夜间阶段排尿行为的评估，降低了分析受昼夜节律调控的特定基因或治疗效果的能力。&#160;
为了克服其中一些局限性，研究人员已开发出一些替代方法，用于实时评估排尿行为26,28,29,30,31,32。其中一些方法需要使用昂贵的设备，例如代谢笼26,28,29，或使用热成像相机30；然而，这些方法也存在局限性。例如，在代谢笼中，尿液容易附着在网状地板的金属丝以及漏斗壁上，导致被收集和测量的尿量减少，因此难以准确获取微小排尿事件的数据。此外，代谢笼无法提供排尿事件空间分布的信息（即排尿发生在笼子角落还是中心区域）。由于热成像相机所使用的长波红外辐射无法穿透固体，因此通过视频热成像评估排尿活动必须在开放系统中进行，而这对活动性强的小鼠而言具有挑战性，因为它们能够跳跃数英寸的高度。另一种系统是自动化滤纸排尿染色法（aVSOP）33，该方法采用卷状滤纸，置于小鼠笼具的金属网地板下方，并以恒定速度卷动。该方法可避免传统VSA中出现的滤纸损坏和尿斑重叠问题，且允许研究者开展持续数天的实验。然而，该方法无法提供排尿事件的精确时间信息，也无法观察行为与尿斑出现之间的关联。为了获取这些信息，研究人员已将视频监测技术整合到排尿检测中，该方法可同时评估小鼠活动与排尿事件31,32。其中一种方法是在实验笼具下方放置蓝色发光二极管（LED）以及配备绿色荧光蛋白滤光片的摄像机，以可视化排尿事件，同时在笼具上方设置红外LED和摄像机以记录小鼠位置32。该装置已被用于在进行光纤光度法实验时监测排尿行为；然而，该系统明亮的光照环境要求研究人员给予小鼠利尿剂以刺激排尿。在另一项实验设计中，广角摄像机分别置于实验笼具的上方和下方，用于可视化小鼠运动活动和排尿事件。在此情况下，通过将置于笼具下方的紫外灯照射笼底衬垫的滤纸，使沉积其上的尿斑显现31。该装置被用于持续4分钟的短时检测，在白天光照阶段进行，以研究参与自主排尿行为的脑干神经元31。该系统是否适用于黑暗阶段或持续时间&#62;4分钟的情况尚未见报道。&#160;
本文介绍了一种改进的传统排尿行为分析方法（VSA），通过实现对小鼠排尿行为的长期视频监测，可在白天的光照期和黑暗期内长时间获取排尿事件的时间、空间及体积信息，并同时记录与小鼠行为相关的细节3,4,34。文中详细提供了排尿室的构建方法、实时排尿行为分析系统（RT-VSA）的实施步骤以及数据分析流程。RT-VSA 对于希望深入了解控制泌尿系统功能的生理机制、开发调控排尿的药理学方法，以及阐明影响下尿路疾病过程的分子基础的研究人员具有重要价值。&#160;

<table><tbody><tr><td>1.00&amp;rdquo; X 1.00&amp;rdquo; T型槽型材 - 四个开放式T型槽 &amp;ndash;&amp;nbsp; 裁剪至10英寸</td><td>80/20</td><td>1010</td><td>数量：20</td></tr><tr><td>1.00&amp;rdquo; X 1.00&amp;rdquo; T型槽型材 - 四个开放式T型槽 &amp;ndash;&amp;nbsp; 裁剪至12英寸</td><td>80/20</td><td>1010</td><td>数量：6</td></tr><tr><td>1.00&amp;rdquo; X 1.00&amp;rdquo; T型槽型材 - 四个开放式T型槽 &amp;ndash;&amp;nbsp; 裁剪至40英寸</td><td>80/20</td><td>1010</td><td>数量：4</td></tr><tr><td>1.00&amp;rdquo; X 1.00&amp;rdquo; T型槽型材 - 四个开放式T型槽 &amp;ndash; 裁剪至 14.75 英寸</td><td>80/20</td><td>1010</td><td>数量：12</td></tr><tr><td>1.00&amp;rdquo; X 1.00&amp;rdquo; T型槽型材 - 四个开放式T型槽 &amp;ndash; 裁剪至32英寸</td><td>80/20</td><td>1010</td><td>数量：5</td></tr><tr><td>1/4-20 双滑入式经济型 T 型螺母</td><td>80/20</td><td>3280</td><td>数量：16</td></tr><tr><td>1/4-20 三滑入式经济型 T 型螺母</td><td>80/20</td><td>3287</td><td>数量：18</td></tr><tr><td>10 &amp;amp; 25 系列 2 孔 - 18 mm 凹槽内角支架，带双支撑</td><td>80/20</td><td>14061</td><td>数量：6</td></tr><tr><td>10系列3孔—直型平板</td><td>80/20</td><td>4118</td><td>数量：8</td></tr><tr><td>10 系列 5 孔 - &quot;L&quot; 平板</td><td>80/20</td><td>4081</td><td>数量：8</td></tr><tr><td>10 系列 5 孔 - &quot;T&quot; 平板</td><td>80/20</td><td>4080</td><td>数量：8</td></tr><tr><td>10系列5孔-三通平垫片</td><td>80/20</td><td>4140</td><td>数量：2</td></tr><tr><td>10系列标准脱开式铰链 - 右手组装件</td><td>80/20</td><td>2064</td><td>数量：2</td></tr><tr><td>10 到 15 系列 2 孔 - 轻型过渡内角支架</td><td>80/20</td><td>4509</td><td>数量：6</td></tr><tr><td>24&amp;rdquo;长波紫外灯管</td><td>ADJ Products LLC</td><td>T8-F20BLB24</td><td>数量：2&lt;br/&gt; 20W 灯泡 &amp;ndash; 24&amp;rdquo; 波长：365 nm</td></tr><tr><td>亚克力镜面板</td><td>专业塑料</td><td></td><td>数量：1&lt;br/&gt; 82.5 cm x 26.5 cm</td></tr><tr><td>亚克力镜面板</td><td>专业塑料</td><td></td><td>数量：2&lt;br/&gt; 26.5 cm × 30.5 cm</td></tr><tr><td>亚克力镜面板</td><td>专业塑料</td><td></td><td>数量：2&lt;br/&gt; 82.5 cm x 30.5 cm</td></tr><tr><td>AR 聚碳酸酯（抗紫外线）</td><td>80/20</td><td>65-2641</td><td>数量：2&lt;br/&gt; 4.5 mm 厚，透明，38.5 cm × 26.5 cm</td></tr><tr><td>AR聚碳酸酯（抗紫外线）</td><td>80/20</td><td>65-2641</td><td>数量：4&lt;br/&gt; 4.5毫米厚，透明，38.5厘米 × 21.5厘米</td></tr><tr><td>AR 聚碳酸酯（UV 抗性）</td><td>80/20</td><td>65-2641</td><td>数量：4&lt;br/&gt; 4.5毫米厚，透明，26.5厘米 × 21.5厘米</td></tr><tr><td>AR聚碳酸酯（抗紫外线）</td><td>80/20</td><td>65-2641</td><td>数量：4&lt;br/&gt; 4.5毫米厚，透明，37.5厘米 × 23.9厘米</td></tr><tr><td>AR 聚碳酸酯（抗紫外线）</td><td>80/20</td><td>65-2641</td><td>数量：4&lt;br/&gt; 4.5毫米厚，透明，24.4 厘米 × 23.9 厘米</td></tr><tr><td>层析纸（薄纸）</td><td>&amp;nbsp;Thermo Fisher Scientific</td><td>57144</td><td></td></tr><tr><td>Cosmos 吸水纸（厚纸）</td><td>Blick Art Materials</td><td>10422-1005</td><td></td></tr><tr><td>Excel</td><td>Microsoft Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>GraphPad Software</td><td>版本 9.4.0</td><td>绘图与统计分析软件</td></tr><tr><td>ImageJ FIJI</td><td>美国国立卫生研究院</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>默克</td><td></td><td>透明薄膜</td></tr><tr><td>Quick Time Player 10.5 软件&amp;nbsp;</td><td>Apple</td><td></td><td>多媒体播放器</td></tr><tr><td>安全监控摄像头</td><td>Ben 软件</td><td></td><td>视频监控软件系统</td></tr><tr><td>标准端部紧固件，1/4-20</td><td>80/20</td><td>3381</td><td>数量：80</td></tr><tr><td>紫外透射亚克力</td><td>Spartech</td><td>Polycast Solacryl SUVT</td><td>数量：2&lt;br/&gt; 38.5 cm x 26.5 cm&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>水凝胶：HydroGel</td><td>ClearH2O&amp;nbsp;</td><td>&amp;nbsp;70-01-5022</td><td>(https://www.clearh2o.com/product/hydrogel/)</td></tr><tr><td>网络摄像头</td><td>Logitech</td><td>C930e</td><td>数量：4</td></tr></tbody></table>

实时空斑检测法

Real-Time Void Spot Assay

正常的排尿行为是膀胱、尿道以及尿道括约肌在神经系统适当调控下协同作用的结果。为了在小鼠模型中研究自主排尿行为，研究人员开发了排尿斑点检测法（void spot assay, VSA），该方法通过测量小鼠笼底滤纸上的尿液斑点数量和面积来评估排尿情况。尽管该方法在技术上简单且成本低廉，但作为终点检测手段使用时存在局限性，例如无法精确分辨排尿事件的时间顺序，以及难以量化重叠的尿液斑点。为克服这些局限，我们开发了一种视频监测的VSA，称为实时VSA（real-time VSA, RT-VSA），该方法可测定排尿频率、评估排尿量和排尿模式，并可在白天的明期和暗期各连续6小时的时间窗内进行测量。本报告所述方法可广泛应用于多种基于小鼠的研究，用于探索健康与疾病状态下自主排尿的生理学及神经行为学特征。

尿路上皮Piezo1/2基因敲除小鼠的排尿行为
在排尿周期的储尿阶段，人们推测尿路上皮能够感知膀胱内积聚尿液所产生的张力，并将这种机械刺激转化为细胞反应，例如浆膜侧释放ATP1,3。我们先前已证实，机械激活型PIEZO1和PIEZO2通道在小鼠尿路上皮中表达3,36。为了确定尿路上皮PIEZO通道是否对正常的排尿行为具有重要作用，我们对尿路上皮条件性Piezo1/2双敲除小鼠（Pz1/2-KO）以及年龄和性别匹配的对照组小鼠（Pz1/2-C；图9）进行了RT-VSA实验。我们在昼夜周期的黑暗期和光照期内分别对雌性和雄性小鼠进行了6小时的测试，并按照步骤6.1所述方法分析数据。当比较对照组小鼠在光照期与黑暗期的排尿活动时，我...

本文介绍了一种通过在传统排尿斑点实验中结合视频监测来研究小鼠排尿行为的新方法。该方法可提供排尿事件的时间、空间和体积信息，并详细记录小鼠在昼夜明暗周期中的行为特征。

正常的排尿行为是在中枢和外周神经系统适当调控下，膀胱、尿道以及尿道括约肌协同作用的结果。

本报告中所述方法可用于研究健康和疾病状态下自主排尿的生理学及神经行为学特征。该技术使我们能够监测小鼠在昼夜明暗周期中的排尿行为，并提供关于排尿事件的时间、空间和尿量信息。为准备实时排尿斑点检测（real-time void spot assay，RT-VSA）记录装置，请根据一天中的不同时段，在RT-VSA记录笼底部放置一张薄或厚的滤纸。在滤纸上方放置一个塑料圆顶小屋作为小鼠的睡眠空间；一个无菌的1.5 ml 微量离心管用于富集目的；一个60 mm × 15 mm的塑料培养皿，内含两到三块小鼠干燥饲料；以及以凝胶包形式提供的14至16克水。记录室准备就绪后，将小鼠轻柔地放置在滤纸表面。确保将小鼠从饲养笼转移到记录笼的过程中尽可能减少应激。将小鼠放入记录笼后，盖上笼盖，并用吸水性蓝色实验台垫覆盖笼盖顶部，以尽量减少环境光在亚克力笼盖表面产生的直接反射。打开下层腔室的紫外灯。使用视频监控录制软件，通过已配置为可同时从多个网络摄像头或网络连接摄像头录制的系统，分别从顶部和底部摄像头记录RT-VSA视频。在程序窗口中按下 Cmd R 开始录制。以每秒一帧的速度进行视频录制。启动录制后，立即离开房间并轻轻关闭房门。确保整个实验过程中房间保持安静。按下 Cmd T 停止录制。关闭紫外灯。停止录制后，软件会自动为每台相机生成一个 m4v 格式的视频文件，并将其保存在先前选定的目标文件夹中，文件名与相机名称一致。确认每个相机的文件夹中，实验数据已按日期整理为相应的文件夹。在每个日期或实验文件夹中，确认包含一个 m4v 文件以及与该视频每一帧对应的全部独立 jpeg 文件。在桌面上创建一个以实验名称和日期命名的文件夹，并将 m4v 文件复制到该文件夹中。将电影文件夹复制到U盘，以便在外部计算机上进行分析。打开底部相机在光照阶段或顶部相机在黑暗阶段采集的视频文件以进行分析。在评估视频质量后，使用快进命令或时间轴滑块跳转至正确的时间窗口，进而分析实验数据。在光照期的排尿活动记录时间为上午11:00至下午5:00，在黑暗期的记录时间为午夜至凌晨6:00。通过点击快进图标以快进模式播放视频，或手动滚动视频画面，寻找小鼠排尿的证据。注意观察滤纸上是否突然出现明亮的尿液斑点，或小鼠是否出现行为变化，例如移动至笼子角落以及排尿时短暂的静止状态。记录每次排尿发生的具体时间。按照惯例，排尿时间以首次检测到尿液的时刻为准。进行排尿测量时，首先使用滚动条前后移动时间，寻找尿液斑点扩散达到最大的时间点。在此时刻暂停视频，将电脑鼠标箭头置于待分析的斑点下方，以在截图中标记出感兴趣的区域。使用相关的编号命名截图文件，以表示其在视频中出现的顺序。当所有空白区域分析完成后，通过截取滤纸图像并勾画滤纸的边界，测量滤纸的总面积。计算每个尿液斑点所占的面积百分比。使用绘图软件中的校准曲线和插值函数，将每次排尿斑点的面积百分比数值转换为尿液体积。记录了雌性和雄性Piezo1、2基因敲除小鼠及对照小鼠在昼夜周期中黑暗期和光照期的排尿行为。在它们不活跃的光照期，与对照组相比，雌性或雄性基因敲除小鼠在所分析的任何参数上均未观察到显著差异。然而，在活跃的黑暗期，雌性和雄性基因敲除小鼠表现出排尿表型的改变，其特征是微小排尿斑点的数量和总体积显著增加。与对照组小鼠相比，雌性或雄性基因敲除小鼠在主要排尿斑点或PVS数量、每个PVS的平均体积以及PVS总体积方面均无显著差异。在基础条件下以及环磷酰胺处理后，检测了雌性小鼠的排尿行为。与基础状态相比，环磷酰胺处理后每次排尿的尿量减少，且排尿次数显著增加。确保实验可重复性的关键之一是在整个测试期间尽可能轻柔地操作动物，并将其应激程度保持在最低水平。由于该检测为非侵入性实验，后续还可进行其他操作，包括流式细胞术和肌电图检测，以分别评估膀胱和尿道外括约肌的功能。实施该技术将使研究人员能够明确特定通路在健康和疾病状态下对排尿行为的贡献。

Research

科研

JoVE Journal

Behavior

行为

实时空隙点测定

利用酶联免疫斑点试验可实现对特发性疾病中适应性免疫的微生物靶标进行鉴定。...

酶联免疫斑点试验（ELISPOT）：针对微生物抗原的Th-1型细胞免疫反应的定量分析

我们描述了一种用于定量、实时测量细胞核裂解液中DNA糖基化酶和AP内切核酸酶活性的方法。该检测方法可获得适用于动力学分析的DNA修复活性速率，并可适用于组织和肿瘤裂解液或纯化蛋白中DNA修复活性的定量分析。...

利用损伤特异性分子信标对细胞裂解液中碱基切除修复活性进行定量实时分析

本视频展示了配体检测的差分径向毛细管作用——一种用于系统性高通量筛选细胞内核苷酸第二信使结合蛋白的技术。该技术可实现第二信使直接与细胞裂解液中过表达的目标蛋白结合，从而无需进行蛋白质纯化。...

配体差异径向毛细管作用分析：一种高通量筛选细菌核苷酸第二信使结合蛋白的细胞内靶标蛋白技术

我们展示了一种“卡扣芯片”技术，通过简单地将两张载玻片卡合，即可实现无交叉反应的多重夹心免疫测定。该技术使用一种卡扣装置，可可靠地将试剂从一个微阵列转移至另一个微阵列。这种卡扣芯片可用于任何需要不同试剂共定位且避免交叉污染的生化反应。...

用于无交叉反应和无点样多重夹心免疫测定的Snap Chip

采用高分辨率基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF）结合单核苷酸延伸策略，建立了一种无需标记和放射性同位素的DNA聚合酶校对及DNA修复检测方法。该检测方法在检测长度短于9个核苷酸的校对和修复片段时，表现出高度特异性、操作简便、快速且易于实施的特点。...

使用单核苷酸延伸与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析进行校对与DNA修复检测

本文介绍了一种纯化组氨酸标签焦磷酸激酶酶的方法，并利用放射性标记底物及产物的薄层色谱分析来检测其酶活性。...

一种纯化与 体外 一种(p)ppGpp合成酶的活性检测 艰难梭菌

本文介绍了一种全自动放射性标记[11C]SNAP-7941的实验方案，以及对该PET示踪剂在P-糖蛋白表达与非表达细胞中实时动力学的分析方法。...

11C标记SNAP-7941的自动化合成与实时动力学评价的技术要点

我们介绍一种用于测量类器官肿瘤组织切片中实时药物反应的方案。此处概述的实验策略提供了一个平台，可在体外条件下对来自临床或小鼠肿瘤的组织切片进行中高通量药物筛选。...

在原代肿瘤组织切片中实时测量药物反应

本方案通过单细胞刺激拉曼散射成像检测D2O代谢，可在2.5小时内完成快速抗菌药物敏感性试验（AST）。该方法适用于尿液或全血环境中的细菌，对临床快速单细胞表型抗菌药物敏感性试验具有变革意义。...

基于单个细菌中氘掺入的受激拉曼散射成像的快速抗菌药物敏感性测试

开发了一种非标记、非放射性同位素的检测方法，利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF）直接分析含有无嘌呤/无嘧啶位点的产物，以测定尿嘧啶-DNA糖基化酶活性。该方法被证明在DNA糖基化酶活性检测中具有操作简便、特异性强、快速且易于使用的特点。...

基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱法检测尿嘧啶-DNA糖基化酶活性

我们介绍一种基于无细胞合成生物学原理和点印迹技术的新型免疫检测平台，可用于定制化检测人和动物血清中的抗体反应。...

无细胞点印迹法作为一种实用且可灵活调整的免疫检测平台，用于检测人和动物血清中的抗体反应

了解实时空隙点测定方法，用于研究小鼠排尿行为的生理学与神经行为学机制。该技术通过视频监测记录昼夜不同阶段的排尿事件，提供时间、空间及体积数据，适用于健康与疾病状态下的膀胱功能研究。

实时空斑检测法

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