大鼠模型中改良尾静脉和阴茎静脉穿刺采血法

重复采血方法的问题亟需解决，因为大多数大鼠研究都需要进行多次采血。需要注意的是，某种采样方法在特定情况下可能非常高效，但在另一项研究中可能变得不适用。本方案旨在为研究人员提供简单且可靠的血液采样替代方法。

这两种方法均可由单名操作者完成，且无需 extensive 的前期培训，从而可实现标准化操作。当动物处于麻醉状态时，异氟烷的作用可能导致血管痉挛，使尾静脉穿刺不适用于采血。本方案为此情况提供了另一种选择——阴茎静脉穿刺，该方法具有更高的成功率，并可在更短时间内获得显著更多的血量。

首先，将大鼠固定在塑料固定锥中，并将锥体的大端紧贴尾根部固定。确保动物在整个操作过程中舒适且呼吸不受限制。将尾巴浸入温水中约一分钟，以扩张静脉，然后用纸巾将尾巴擦干。

在固定装置中，将动物腹部朝下放置，尾巴置于加热垫上。为选择合适的尾静脉进行采样，可将整个动物向右侧或左侧旋转。采血时应选择尾部远端三分之一区域，因为该区域的血管更为表浅。

用70%乙醇擦拭巾在穿刺部位擦拭尾部，并将其放置在加热垫边缘，使尾部末端三分之一处形成一定角度。这有助于使静脉显露于表面，并为采样创造更多空间。进行采血时，将注射器活塞来回抽动数次，以使抽吸过程更顺畅，然后拉动活塞，在注射器内形成负压。

用非惯用手的食指和中指将尾巴平压在加热垫上。中指置于近端，食指置于远端，穿刺部位位于两指之间。将胰岛素注射器沿食指滑动，针尖斜面向上，直至刺入静脉。

使针头与尾部之间形成35度角。一旦针头进入静脉，血液将流入注射器。以稳定的速度缓慢回抽注射器的活塞，以采集所需体积的血液。

将注射器从尾部移开，使血液在尾部穿刺处形成一滴血珠。若为非无菌操作，可吸取此滴血液以额外收集几微升血液。对穿刺部位施加压力以止血，并用新的酒精棉片擦拭该区域。

将大鼠从锥形管中取出后，将其放回笼中。在麻醉条件下，比较尾静脉穿刺法的成功率与阴茎静脉穿刺法的成功率。有趣的是，在麻醉状态下，尾静脉穿刺变得极不可靠，成功率仅为25%。清醒大鼠的尾静脉穿刺与麻醉状态下阴茎静脉穿刺的成功率结果几乎相似。

尾静脉穿刺采血在无麻醉情况下于六分钟内完成，而阴茎静脉穿刺采血在麻醉下进行；由于多次穿刺失败，麻醉下的尾静脉穿刺耗时超过八分钟。将注射器活塞来回推动数次以使抽吸顺畅，然后拉动活塞在注射器内产生负压。将麻醉大鼠阴茎包皮从阴茎末端向后推开，用食指和拇指夹住龟头并轻轻牵拉。

背侧阴茎静脉呈现为一条表浅的蓝色索状结构。将针头斜面向上，以35度角将胰岛素注射器插入静脉。一旦针头进入静脉，血液将流入注射器中。

以缓慢且稳定的速度回抽注射器的活塞，以采集所需体积的血液。移开注射器后，穿刺部位将形成一滴血。若为非无菌操作，可吸取此血滴，以额外收集几微升血液。

对穿刺部位施加轻柔压力以止血，并用新的酒精棉片擦拭该区域。将阴茎恢复至自然位置。关闭异氟烷后，监测大鼠直至其完全恢复，然后将其放回笼中。

在麻醉条件下通过背侧阴茎静脉穿刺法采集的血量，与有无麻醉条件下通过尾静脉穿刺法采集的血量进行了比较。结果显示，麻醉下阴茎静脉穿刺法与无麻醉下尾静脉穿刺法所获得的血量相当。