Name: 小鼠手术模型中扩展 78% 肝切除术 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-24T13:20:00.000+00:00
Duration: 5 min 25 s
Description: 学习小鼠扩展78%肝切除术手术模型，用于研究小肝综合征和评估A20基因治疗等肝脏再生修复策略。该模型术后存活率约50%，为优化肝移植和肝癌手术方案提供重要研究平台。

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本工作由美国国立卫生研究院（NIH）R01基金DK063275和HL086741资助，受资助者为CF。PB和TA获得了美国国家心脏、肺和血液研究所（NHLBI）T32培训基金HL007734的NRSA奖学金。

本实验方案中描述的方法已获得贝斯以色列女执事医疗中心（BIDMC）机构动物照护与使用委员会（IACUC）的批准。所有实验均依照并遵守IACUC及BIDMC动物研究设施的指导原则进行。
1. 小鼠术前准备
<ol>
	<li>使用剪刀将小鼠腹部从胸骨中部至耻骨上区域的毛发剪除。</li>
	<li>使用1-4%异氟烷与100%氧气混合气体诱导全身麻醉。麻醉后，将小鼠仰卧置于手术区域，身下垫加热垫。在切开前，用力夹捏脚趾以确认足底反射消失（若存在反射，动物会出现反应）。根据需要调整麻醉深度，以达到充分的全身麻醉状态。 
	注意：根据需要滴定异氟烷浓度，以维持适当的全身麻醉水平。</li>
	<li>皮下注射1.2 mg/kg缓释型（ER）布托啡诺，用于术后镇痛。将小鼠仰卧放置，前肢&#160;和后肢伸展，并用胶带固定四肢；随后准备无菌手术区域。 
	注意：固定前肢&#160;时应确保其处于放松状态，以免影响呼吸。</li>
	<li>用温热的无菌生理盐水和聚维酮碘棉签交替擦拭腹部，每种棉签各使用三次。以无菌方式覆盖手术巾。</li>
</ol>
2. 肝切除术
<ol>
	<li>从剑突至耻骨上区沿正中线作垂直切口，切开皮肤&#160;手术刀。接下来，使用锐利的剪刀切开腹白线以进入腹膜腔，并将切口延伸至与皮肤切口等长。 
	注意：首先在剑突下区域切开腹白线更为安全，因为此处肝脏位于腹壁深部，可避免损伤下方的肠管。</li>
	<li>使用适当的拉钩向侧方牵拉腹壁；然后用止血钳夹住剑突，并将胸骨向上牵拉，以暴露肝脏。</li>
	<li>向下牵拉肝脏以暴露镰状韧带，然后使用锐利剪刀沿肝脏长度方向切断该韧带。向上牵拉肝脏朝向胸腔，以暴露肝胃韧带及肝内叶韧带，使用锐利显微剪刀切断这些结构。 
	注意：由于肝脏由格利森囊包裹，非常脆弱，容易发生挫伤和撕裂，因此应使用湿润的棉签轻柔地进行回缩操作。</li>
	<li>将中叶向上方牵拉，同时保持左叶处于其原始解剖位置。用5-0丝线环绕左叶（LL）的上内侧部分。将左叶向上翻转至胸腔方向，以暴露该叶的下表面，将缝线两端在叶基部汇聚，并于基部打结。在结扎左叶前，确保缝线未阻塞下腔静脉（IVC）或门静脉的血流。 
	注意：结扎时最好将左叶（LL）向上翻向胸腔，以便在结扎过程中充分暴露肝门三联结构。这有助于在不损伤邻近结构的情况下，靠近基底部切除肝叶。</li>
	<li>使用锐利的剪刀在缝线结扎点远端切除左叶，确保缝线与切除肺叶边缘之间保留一小段组织袖（约2 mm）。确认止血完全。</li>
	<li>将中叶向上翻转至胸腔方向，在中叶（ML）基底部绕置一根5-0丝线缝线，然后将中叶复位至其原有的解剖位置。将缝线两端在中叶上部基底处靠拢，并确保在叶基底部打结固定。切除已结扎的中叶，保留缝线结周围少量残余组织。确认止血彻底。</li>
	<li>从右向左游离肝脏，以暴露右上叶和右下叶，并小心将这些叶向内侧和下方翻转。用5-0缝线环绕右上叶上内侧部分，确保缝线包绕右上叶基底部，然后将右上叶向胸腔方向翻转。将缝线穿过右上叶下方，在其基底部附近打结，随后切除右上叶，保留缝线结周围一小圈残余组织。 
	注意：在右上叶（RUL）基部结扎过近可能影响右下叶（RLL）的血液供应，导致RLL缺血，并使小鼠在术后24小时内死亡。相反，若结扎位置距离RUL基部过远，则会减少肝脏切除量，从而提高术后存活率，超出预期效果。</li>
	<li>将剩余肝脏复位至其正常的解剖位置，并确保止血。如有必要，使用纱布对切除肝缘处的轻微出血区域施加压力。</li>
	<li>使用5-0聚乳酸羟基乙酸缝线连续缝合关闭腹壁中线（筋膜和肌层）。用钉书钉或5-0单丝缝线关闭皮肤切口。</li>
	<li>停止麻醉，并监测小鼠直至其恢复意识并能正常行走。</li>
</ol>
3. 术后护理
<ol>
	<li>术后观察小鼠，确保其恢复情况良好（即小鼠清醒、警觉，并能在笼内自主活动）并有效控制疼痛。手术后每2小时检查小鼠一次，持续至术后6小时，之后每日检查一次。 
	注意：术后小鼠在笼内活动减慢属正常现象。小鼠应在与其他小鼠隔离的笼内恢复，只有在其完全恢复后方可重新与其他小鼠合笼。</li>
	<li>若小鼠因不显性失液或手术过程中失血过多导致低血容量，应给予加温的生理盐水注射（0.1–1.0 mL，皮下或腹腔注射）。</li>
</ol>

Mouse Extended Hepatectomy Model for Liver Regeneration Studies

<ol><li>Martins, P. N., Theruvath, T. P., Neuhaus, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+partial+hepatectomies%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Int%22%5BJournal%5D)">Rodent models of partial hepatectomies.</a> Liver Int. 28 (1), 3-11 (2008).</li>
<li>Higgins, G., Anderson, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+pathology+of+the+liver+I.+Restoration+of+the+liver+of+the+white+rat+following+partial+surgical+removal%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Pathol%22%5BJournal%5D)">Experimental pathology of the liver I. Restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal.</a> Arch Pathol. 12, 186-202 (1931).</li>
<li>Koniaris, L. G., McKillop, I. H., Schwartz, S. I., Zimmers, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Surg%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration.</a> J Am Coll Surg. 197 (4), 634-659 (2003).</li>
<li>Fausto, N., Campbell, J. S., Riehle, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration.</a> Hepatology. 43 (2), S45-S53 (2006).</li>
<li>Inderbitzin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging+provides+accurate+and+precise+volume+determination+of+the+regenerating+mouse+liver%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastrointest+Surg%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging provides accurate and precise volume determination of the regenerating mouse liver.</a> J Gastrointest Surg. 8 (7), 806-811 (2004).</li>
<li>Clavien, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+critical+for+liver+surgery+and+partial+liver+transplantation%3A+size+or+quality%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">What is critical for liver surgery and partial liver transplantation: size or quality.</a> Hepatology. 52 (2), 715-729 (2010).</li>
<li>Dahm, F., Georgiev, P., Clavien, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small-for-size+syndrome+after+partial+liver+transplantation%3A+definition%2C+mechanisms+of+disease+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Small-for-size syndrome after partial liver transplantation: definition, mechanisms of disease and clinical implications.</a> Am J Transplant. 5 (11), 2605-2610 (2005).</li>
<li>Hori, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+reproducible+hepatectomy+in+the+mouse+using+the+clip+technique%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Simple and reproducible hepatectomy in the mouse using the clip technique.</a> World J Gastroenterol. 18 (22), 2767-2774 (2012).</li>
<li>Kamali, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extended+liver+resection+in+mice%3A+state+of+the+art+and+pitfalls-a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Med+Res%22%5BJournal%5D)">Extended liver resection in mice: state of the art and pitfalls-a systematic review.</a> Eur J Med Res. 26 (1), 6(2021).</li>
<li>Mitchell, C., Willenbring, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reproducible+and+well-tolerated+method+for+2%2F3+partial+hepatectomy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A reproducible and well-tolerated method for 2/3 partial hepatectomy in mice.</a> Nat Protoc. 3 (7), 1167-1170 (2008).</li>
<li>Borowiak, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Met+provides+essential+signals+for+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Met provides essential signals for liver regeneration.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (29), 10608-10613 (2004).</li>
<li>Boyce, S., Harrison, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+detailed+methodology+of+partial+hepatectomy+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim+%28NY%29%22%5BJournal%5D)">A detailed methodology of partial hepatectomy in the mouse.</a> Lab Anim (NY). 37 (11), 529-532 (2008).</li>
<li>Greene, A. K., Puder, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+hepatectomy+in+the+mouse%3A+technique+and+perioperative+management%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Surg%22%5BJournal%5D)">Partial hepatectomy in the mouse: technique and perioperative management.</a> J Invest Surg. 16 (2), 99-102 (2003).</li>
<li>Mitchell, C., Willenbring, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Erratum%3A+A+reproducible+and+well-tolerated+method+for+2%2F3+partial+hepatectomy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Erratum: A reproducible and well-tolerated method for 2/3 partial hepatectomy in mice.</a> Nat Protoc. 9 (6), 1532(2014).</li>
<li>Studer, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Significant+lethality+following+liver+resection+in+A20+heterozygous+knockout+mice+uncovers+a+key+role+for+A20+in+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Significant lethality following liver resection in A20 heterozygous knockout mice uncovers a key role for A20 in liver regeneration.</a> Cell Death Differ. 22 (12), 2068-2077 (2015).</li>
<li>Longo, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A20+protects+mice+from+lethal+radical+hepatectomy+by+promoting+hepatocyte+proliferation+via+a+p21waf1-dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">A20 protects mice from lethal radical hepatectomy by promoting hepatocyte proliferation via a p21waf1-dependent mechanism.</a> Hepatology. 42 (1), 156-164 (2005).</li>
<li>Michalopoulos, G. K., DeFrances, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration.</a> Science. 276 (5309), 60-66 (1997).</li>
<li>Diehl, A. M., Rai, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration.+3.+Regulation+of+signal+transduction+during+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration. 3. Regulation of signal transduction during liver regeneration.</a> FASEB J. 10 (2), 215-227 (1996).</li>
<li>Diehl, L., Morse, M. A comparison of selected organ weights and clinical pathology parameters in male and female CD-1 and CByB6F1 hybrid mice 12-14 weeks in age. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.criver.com/sites/default/files/resources/doc_a/AComparisonofSelectedOrganWeightsandClinicalPathologyParametersinMaleandFemaleCD-1andCByB6F1HybridMice12-14WeeksinAge.pdf">https://www.criver.com/sites/default/files/resources/doc_a/AComparisonofSelectedOrganWeightsandClinicalPathologyParametersinMaleandFemaleCD-1andCByB6F1HybridMice12-14WeeksinAge.pdf</a> (2023).</li>
<li>CD-1® IGS mouse. Charles River Laboratories. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.criver.com/products-services/find-model/cd-1r-igs-mouse?region=3611">https://www.criver.com/products-services/find-model/cd-1r-igs-mouse?region=3611</a> (2023).</li>
<li>C57BL/6J mouse organ weight. The Jackson Laboratory. , Available from: 
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<li>Inderbitzin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+capacity+of+individual+liver+lobes+in+the+microsurgical+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Regenerative capacity of individual liver lobes in the microsurgical mouse model.</a> Microsurgery. 26 (6), 465-469 (2006).</li>
<li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L-carnitine+promotes+liver+regeneration+after+hepatectomy+by+enhancing+lipid+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">L-carnitine promotes liver regeneration after hepatectomy by enhancing lipid metabolism.</a> J Transl Med. 21 (1), 487(2023).</li>
<li>Linecker, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Omega-3+fatty+acids+protect+fatty+and+lean+mouse+livers+after+major+hepatectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Omega-3 fatty acids protect fatty and lean mouse livers after major hepatectomy.</a> Ann Surg. 266 (2), 324-332 (2017).</li>
<li>Haber, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+levels+of+glucose-6-phosphatase+gene+and+protein+expression+reflect+an+adaptive+response+in+proliferating+liver+and+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">High levels of glucose-6-phosphatase gene and protein expression reflect an adaptive response in proliferating liver and diabetes.</a> J Clin Invest. 95 (2), 832-841 (1995).</li>
<li>Rickenbacher, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arguments+against+toxic+effects+of+chemotherapy+on+liver+injury+and+regeneration+in+an+experimental+model+of+partial+hepatectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Int%22%5BJournal%5D)">Arguments against toxic effects of chemotherapy on liver injury and regeneration in an experimental model of partial hepatectomy.</a> Liver Int. 31 (3), 313-321 (2011).</li>
<li>Aravinthan, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+preexisting+and+post-transplant+diabetes+mellitus+on+outcomes+following+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">The impact of preexisting and post-transplant diabetes mellitus on outcomes following liver transplantation.</a> Transplantation. 103 (12), 2523-2530 (2019).</li>
<li>Gonzalez, H. D., Liu, Z. W., Cashman, S., Fusai, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+for+size+syndrome+following+living+donor+and+split+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastrointest+Surg%22%5BJournal%5D)">Small for size syndrome following living donor and split liver transplantation.</a> World J Gastrointest Surg. 2 (12), 389-394 (2010).</li>
<li>Mahmud, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+prediction+models+for+post-operative+mortality+in+patients+with+cirrhosis%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Risk prediction models for post-operative mortality in patients with cirrhosis.</a> Hepatology. 73 (1), 204-218 (2021).</li>
<li>Kooby, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+steatosis+on+perioperative+outcome+following+hepatic+resection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastrointest+Surg%22%5BJournal%5D)">Impact of steatosis on perioperative outcome following hepatic resection.</a> J Gastrointest Surg. 7 (8), 1034-1044 (2003).</li>
<li>Ma, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mesenchymal-epithelial+transition+factor-agonistic+antibody+accelerates+cirrhotic+liver+regeneration+and+improves+mouse+survival+following+partial+hepatectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transpl%22%5BJournal%5D)">A mesenchymal-epithelial transition factor-agonistic antibody accelerates cirrhotic liver regeneration and improves mouse survival following partial hepatectomy.</a> Liver Transpl. 28 (5), 782-793 (2022).</li>
<li>Hori, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+sure+methodology+for+massive+hepatectomy+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Simple and sure methodology for massive hepatectomy in the mouse.</a> Ann Gastroenterol. 24 (4), 307-318 (2011).</li>
<li>Ramsey, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A20+protects+mice+from+lethal+liver+ischemia%2Freperfusion+injury+by+increasing+peroxisome+proliferator-activated+receptor-alpha+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transpl%22%5BJournal%5D)">A20 protects mice from lethal liver ischemia/reperfusion injury by increasing peroxisome proliferator-activated receptor-alpha expression.</a> Liver Transpl. 15 (11), 1613-1621 (2009).</li>
<li>Arvelo, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A20+protects+mice+from+D-galactosamine%2Flipopolysaccharide+acute+toxic+lethal+hepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">A20 protects mice from D-galactosamine/lipopolysaccharide acute toxic lethal hepatitis.</a> Hepatology. 35 (3), 535-543 (2002).</li>
</ol>

不存在任何需要披露的利益冲突。

为了成功实施导致小鼠50%死亡率的扩大78%肝切除术，精确切除每个肝叶至关重要。这种操作熟练度和精确性只有通过反复练习才能达到。不同操作者的学习曲线存在差异，但通常需要3至6个月的训练。若肝切除量低于总肝质量（TLM）的78%，则会导致更高的存活率；而切除量超过TLM的78%则会引发更高的死亡率。每个肝叶的切除均具有挑战性，尽管程度有所不同。
左叶是最容易可靠切除的部分。左叶基底部较窄，当将其向上翻起时，操作者可轻松辨认肝脏基底，并在相同位置缝合结扎，每次切除的肝叶体积几乎完全一致。中叶的基底部相较于左叶和右上叶最宽，因此要求操作者仔细估算缝线应放置的位置，并在切除肝叶前精确对合中叶基底部的缝线两端。若中叶结扎位置过近，缝线可能影响肝脏静脉回流，或阻碍下腔静脉向心脏的血液回流；若中叶结扎位置过远，则切除的肝组织量不足，且由于中叶基底较宽，切缘出血的风险会增加。右上叶可能是最难可靠切除的部分。由于右上叶在腹膜腔内位置偏后，难以将缝线完全环绕其基底部，可能导致该叶切除不完全。相反，若在右上叶基底部结扎过近，可能危及右下叶的血液供应，导致右下叶缺血，增加术后死亡风险。
<p cl...

小鼠和大鼠的手术性肝切除模型最早于1931年被描述，是研究肝脏再生分子机制最常用的实验模型。这些模型在转化科学研究中也具有重要价值，可用于测试和开发改善大范围肝切除术后或使用非理想肝脏移植物进行肝移植后预后的新策略1,2,3,4。小鼠的部分肝切除术（PH）通常切除约2/3（66%）的总肝质量（TLM），在健康动物中实施时效果极佳5。该手术持续时间短，由于小鼠肝脏解剖结构变异较小，操作易于重复，且术后存活率通常接近100%1。
部分2/3肝切除术包括切除左叶（LL）和中叶（ML），可使残余肝叶在无肝叶炎症或肝血流进出受限的情况下相对不受阻碍地再生。相反，肝切除术后门静脉血流增加，继而导致肝窦内皮细胞上的剪切应力升高，从而持续上调内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表达，并促进一氧化氮（NO）的释放；这些变化有助于肝细胞进入增殖准备状态，推动肝脏再生3。在非酒精性脂肪性肝病等疾病模型或特定遗传背景下，2/3肝切除术后常研究的指标包括急性肝衰竭风险、肝脏再生能力的定性与定量评估，以及其他对压力或创伤性损伤的生物学反应1,3。
然而，目前仍缺乏能够很好地模拟功能性或解剖性小体积综合征（small-for-size syndrome）的鼠类模型，这种综合征常见于因癌症行扩大肝切除术后，或在移植边缘性（如脂肪变性或缺血时间较长）或部分性（如劈裂肝或活体供肝）肝移植物后出现。为满足这一需求，有必要建立更为广泛的肝切除模型，即切除范围超过维持最低限度（且具功能）肝质量的模型，以模拟小体积肝综合征及其相关的高死亡率6,7。
小鼠肝脏解剖结构变异极小。小鼠肝脏由五个叶组成，各叶占肝脏总质量的比例如下：左叶（LL；34.4 ± 1.9%）、中叶（ML；26.2 ± 1.9%）、右上叶（亦称右上侧叶，RUL；16.6 ± 1.4%）、右下叶（亦称右下侧叶，RLL；14.7 ± 1.4%）和尾状叶（CL；8.1 ± 1.0%）1,5每个肝叶均由一个门管三联体供血，包括肝动脉的一个分支、门静脉的一个分支以及一条胆管5历史上，有多种技术被用于通过切除左外侧叶（LL）和内侧叶（ML）来完成三分之二肝切除术（2/3 PH），其中包括：1）经典技术，即采用单个结扎 整块 在每个切除肝叶的基底部；2）止血夹技术，使用钛夹夹闭切除肝叶的基底部；3）以血管为导向的保实质技术，于钳夹近端使用穿刺缝线；4）以血管为导向的显微外科技术，在肝叶切除前结扎门静脉和肝动脉分支1尽管每种技术都有其相对的优缺点，但没有一种能产生更高的致死率1,8,9.
在本研究中，我们介绍了一种在小鼠中实现扩展性78%肝切除的新方法。在该模型中，采用结扎技术分别切除五个肝叶中的三个，包括左外侧叶（LL）、中叶（ML）和右上叶（RUL）。图1）。该操作可切除约78%（77.2 ± 5.2%）的总体肝质量。我们选择分别切除左外叶（LL）和中叶（ML），而非一次性切除 &#34;整块&#34; 与经典PH技术一样，可最大限度减少相关并发症 整块 这两个肝叶的切除，例如上腔静脉狭窄，以及当单根结扎线过于靠近腔静脉时，残留肝叶发生坏死的风险增加1,10,11,12,13,14这一步骤对于进入手术最终阶段以切除右上叶（RUL）至关重要。在8至12周龄的野生型C57BL/6小鼠中进行这种大范围肝切除术，由于肝脏再生失败导致暴发性肝功能衰竭，术后1周内死亡率可达50%15,16该小鼠模型在进行78%扩大肝切除术后表现出较高的致死率，能够恰当地模拟小体积综合征的病理生理过程，并可用于开发和测试改善预后的新型策略。

<table><tbody><tr><td>2 x 2 纱布</td><td>Covidien</td><td>2146</td><td>手术：解剖</td></tr><tr><td>5-0 尼龙单丝缝合线</td><td>绿洲</td><td>50-118-0631</td><td>手术：皮肤缝合</td></tr><tr><td>5-O 丝线缝合线</td><td>Fine Science Tools</td><td>18020-50</td><td>手术：肝叶结扎</td></tr><tr><td>5-0薇乔缝线</td><td>Ethicon</td><td>NC9335902</td><td>手术：腹壁关闭</td></tr><tr><td>阿德森持针钳</td><td>Braintree Scientific</td><td>FC028</td><td>手术：解剖分离</td></tr><tr><td>酒精棉片（2）</td><td>BD</td><td>326895</td><td>消毒剂</td></tr><tr><td>长效释放制剂布比诺啡&amp;nbsp;</td><td>Zoopharm</td><td>N/A</td><td>镇痛</td></tr><tr><td>无线修边机</td><td>布雷因特里科学公司</td><td>CLP-9868-14</td><td>剃除毛发</td></tr><tr><td>弯头镊子</td><td>Braintree Scientific</td><td>FC0038</td><td>手术：解剖</td></tr><tr><td>止血钳</td><td>布雷因特里科学公司</td><td>FC79-1</td><td>手术：解剖</td></tr><tr><td>异氟烷吸入麻醉剂&amp;nbsp;</td><td>Patterson Veterinary</td><td>RXISO-250</td><td>全身麻醉</td></tr><tr><td>磁性固定器（双槽）（2 个）</td><td>Braintree Scientific</td><td>ACD-001</td><td>外科手术：用于持握小型拉钩</td></tr><tr><td>磁性固定器（4槽）&amp;nbsp;</td><td>Braintree Scientific</td><td>ACD-002</td><td>外科手术：用于持握小型牵开器</td></tr><tr><td>显微剪刀</td><td>Braintree Scientific</td><td>SC-MI 151</td><td>手术：解剖</td></tr><tr><td>操作托盘</td><td>Braintree Scientific</td><td>ACD-0014</td><td>手术：建立手术区域&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>10% 聚维酮碘棉签（2 支）</td><td>Medline</td><td>MDS093901ZZ</td><td>消毒剂</td></tr><tr><td>手术刀（15号刀片）</td><td>Aspen Surgical Products</td><td>371615</td><td>手术：解剖</td></tr><tr><td>锐利剪刀（弯型）</td><td>Braintree Scientific</td><td>SC-T-406</td><td>手术：解剖</td></tr><tr><td>锋利剪刀（直刃）</td><td>Braintree Scientific</td><td>SC-T-405</td><td>手术：解剖</td></tr><tr><td>小型棉签</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-400-118</td><td>手术：解剖</td></tr><tr><td>组织镊（直头 ×2）</td><td>布雷因特里科学公司</td><td>FC1001</td><td>手术：解剖</td></tr><tr><td>加热垫（18&quot; x 26&quot;)</td><td>Stryker</td><td>TP 700</td><td>加热</td></tr><tr><td>加热垫泵</td><td>Stryker</td><td>TP 700</td><td>加热</td></tr><tr><td>钢丝手柄牵开器（2）&amp;nbsp;</td><td>Braintree Scientific</td><td>ACD-005</td><td>手术：便于暴露腹腔</td></tr><tr><td>Xenotec 异氟烷小动物麻醉系统</td><td>Braintree Scientific</td><td>EZ-108SA</td><td>全身麻醉：包含异氟烷挥发罐 &amp;& 控制台，诱导室，调节器/软管，面罩（M）</td></tr></tbody></table>

小鼠手术模型中的扩大78%肝切除术

Extended 78&#37; Hepatectomy in a Mouse Surgical Model

小鼠部分2/3肝切除术被用于研究肝脏的再生能力，并探索多种疾病模型中肝切除的结局。在经典的小鼠部分2/3肝切除术中，五个肝叶中的两个——即左叶和中叶，约占肝脏总质量的66%——以整块（en bloc）方式切除，术后预期存活率为100%。更为激进的部分肝切除术在技术上更具挑战性，因此在小鼠中很少被采用。我们团队开发了一种扩展性肝切除术的小鼠模型，该技术分别切除五个肝叶中的三个，即左叶、中叶和右上前叶，以去除约78%的肝脏总质量。在这种原本健康的小鼠中实施的扩展切除术，所残留的肝脏往往无法持续维持充分且及时的再生。再生失败最终导致术后1周内出现50%的死亡率，死因为暴发性肝功能衰竭。这种小鼠78%扩展性肝切除术提供了一个独特的外科模型，可用于研究小体积综合征，以及评估在肝移植或为治疗癌症而实施扩展性肝切除背景下，促进肝脏再生和改善预后的治疗策略。

成功的扩大78%肝切除术预计可在8至12周龄的健康成年小鼠中引起50%的1周内死亡率16。若操作得当，术中出血量应极少。持续存在的残余出血可通过手动压迫控制。术后24小时内发生的围手术期死亡通常由技术错误导致。技术失败包括意外损伤大血管，引起术中难以控制的出血；术后明显出血，常源于肝切除边缘残余出血；周围结构损伤，例如意外结扎邻近的门管三联结构、门静脉或下腔静脉（IVC）；由于右上叶（RUL）结扎位置过于靠近叶基部，导致右下叶（RLL）继发性缺血；以及全身麻醉相关并发症。肝功能衰竭的表现包括进行性嗜睡、毛发成簇、厌食和低血糖，这些症状通常在术后24小时内变得明显。
扩大范围78%肝切除术后预期的两种结果为存活或死亡。在第一种情况下，小鼠术后恢复良好，72小时内恢复正常活动，并存活超过7天。术后9-10天进行剖腹探查，可见肝脏质量已完全恢复至术前水平4,16,17...

小鼠部分肝切除（2/3，即66%）模型在文献中已有充分描述，但用于模拟肝移植后小体积综合征的更大范围肝切除模型则较少被采用。本文介绍一种在小鼠中实施的扩展性78%肝切除手术方法，该操作在健康小鼠中可导致约50%的术后死亡率。

小鼠部分2/3肝切除术用于研究肝脏的再生能力，并探索多种情况下肝切除术的结局……

我们的研究旨在评估可促进肝脏再生与修复的治疗策略，以改善使用边缘性肝移植物进行肝移植以及因癌症接受扩大肝切除术的患者的预后，这些情况均具有较高的原发性无功能和急性肝衰竭风险。研究团队利用基因组学、蛋白质组学和代谢组学平台研究肝脏再生机制，并识别新的治疗靶点以改善临床结局。我们实验室的重点是开发先进的基因治疗平台，用于递送具有肝保护作用和促进肝脏再生的基因A20。我们发现A20（也称为TNFAIP3）在肝细胞中具有强大的肝保护功能，这种功能源于其抗炎、抗凋亡和促增殖作用的协同效应。靶向肝脏的A20基因治疗在小鼠毒性肝炎模型中可防止致死性损伤，使78%的致死性大范围肝切除小鼠存活率提高90%，并延长了肝脏缺血耐受时间。近期在大型动物中开展的有希望的临床前研究，为该疗法向临床转化奠定了基础。本方案提供了一种独特的手术模型，旨在研究小体积综合征，并评估改善癌症大范围肝切除预后的治疗策略，以及提高边缘性和扩展标准肝脏移植物成功率的方法。当正确实施78%肝切除术时，该操作导致术后约50%的存活率，而健康小鼠接受经典三分之二部分肝切除术后的存活率接近100%。首先，将麻醉后的小鼠置于仰卧位。作正中垂直腹正中切口后，使用锐性剪刀沿腹白线切开至皮肤切口长度，进入腹膜腔。然后用止血钳夹住剑突，将胸骨向上牵拉，并使用适当的牵开器向侧方打开腹壁。轻柔下拉暴露的肝脏，用锐性剪刀沿肝脏长度方向切断镰状韧带。将肝脏向上朝向胸腔方向牵拉后，使用锐利的显微剪刀横断肝胃韧带及肝内叶韧带。接着，将中叶向上牵拉，同时保持左叶处于其原有的解剖位置。用5-0丝线环绕左叶上内侧部分。随后，将左叶向上翻转至胸腔方向，以暴露其下表面，并在基底部打结固定缝线末端。使用锐利的剪刀，在缝合结远端切除左叶，保持缝线与切除叶边缘之间约两毫米的组织袖状残留。抬起中叶朝向胸部后，用5-0丝线围绕其基部结扎，并将中叶复位至原位。将缝线两端在肺叶基底部固定并打结，随后切除结扎后的中叶，保留缝线周围少量组织袖状结构。确认止血后，从右向左游离肝脏，并小心将暴露的右上叶和右下叶向内侧及下方牵拉。使用5-0缝线环绕右上叶的上内侧部分，然后将肺叶向胸腔方向翻转。然后在右上叶下方环绕并结扎缝线，切除该叶，保留一小段残余组织袖状结构。将剩余的肝脏复位至其自然解剖位置。为维持止血，使用纱布对肝脏切除边缘的出血区域施加压力。最后，使用5-0聚乳酸羟基乙酸缝线缝合腹壁正中切口，然后使用5-0单股缝线缝合皮肤切口。通常情况下，小鼠在术后两到三天内死亡，但在健康小鼠中，接受78%肝切除术后一周内的术后存活率可达50%。

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Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

小鼠手术模型中扩展 78% 肝切除术

胆汁流的中断会导致严重的炎症性胆汁淤积性肝损伤，并伴随特征性的时间依赖性形态学改变序列。本文介绍了一种在小鼠中进行总胆管结扎的手术方案，可在21至28天后诱导出显著的纤维化反应。...

小鼠胆管结扎术：通过阻塞性胆汁淤积诱导炎症性肝损伤及纤维化

肝转移瘤切除术后肿瘤复发率较高，这一问题仍未解决。本研究所展示的小鼠模型可能有助于探讨此类复发的原因。该模型首次将肝切除模型与肝内肿瘤细胞注射相结合。...

肝切除术对肝内肿瘤生长的影响

我们描述了一种在NOD.SCID（NOD.CB17-Prkdcscid/J）小鼠中进行部分肝切除术（PHx）并通过脾脏移植细胞的实验方案。该方案中，首先进行切口以暴露并切除肝脏左叶，随后另作切口，用于将细胞移植至脾脏内。...

NOD.SCID 小鼠部分肝切除术后肝细胞脾内移植

本文介绍了一种对新生（出生第0天）小鼠进行左肝叶部分切除的新方法。该新方案适用于研究新生期急性肝损伤及损伤应答反应。...

部分肝叶切除术：一种用于研究肝脏形态学再生的手术模型

本文描述了一种具有临床相关性的肝癌小鼠模型的建立，该模型可重现肝细胞癌（HCC）典型的免疫学特征。...

一种由致癌性肝细胞诱导的原位小鼠肝细胞癌模型，发生于肝脏炎症与纤维化背景下

本研究建立的急性肝衰竭动物模型为潜在疗法的研究提供了一种可行的替代方案。该模型结合了物理性和药物诱导性肝损伤的双重效应，为研究新型疗法的潜力提供了合适的时间窗口。...

结合70%部分肝切除与对乙酰氨基酚建立大鼠急性肝衰竭模型

非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型中肝脏细胞外基质的三维成像

本文介绍了一种建立正位肝细胞癌异种移植模型的方案，该方案包括结扎和不结扎肝动脉的条件，并利用[18F]氟米索硝唑（[18F]FMISO）和[18F]氟脱氧葡萄糖（[18F]FDG）进行无创正电子发射断层扫描（PET）成像，以检测肿瘤缺氧情况。...

原位小鼠肝细胞癌模型中的无创PET/MR成像

富含脂质的肝细胞在肝脏再生过程中具有内在作用，但通常在密度梯度离心过程中丢失。本文介绍了一种优化的细胞分离方案，可保留脂肪变性肝细胞，从而在小鼠部分肝切除术后获得具有代表性的再生肝细胞群体。...

小鼠部分肝切除术后再生肝细胞的分离

在本实验方案中，我们探讨了在小鼠中成功实施原位肝移植（OLT）模型的方法。此外，还讨论了在小鼠成功进行OLT后，用于进一步分析同种异体移植物通畅性的辅助技术，特别是利用微型计算机断层扫描（microCT）成像的方法。...

利用显微计算机断层扫描血管造影术在小鼠中成功实施原位肝移植

联合肝脏分割和门静脉结扎分阶段肝切除术（ALPPS）已被证实可在第一阶段手术后数周内显著促进肝脏再生。已建立接受ALPPS的动物模型，以探索肝脏再生潜力并获得理想的临床效果。...

一种在显微镜辅助下建立用于分阶段肝切除术的肝脏联合分割和门静脉结扎小鼠模型

学习小鼠扩展78%肝切除术手术模型，用于研究小肝综合征和评估A20基因治疗等肝脏再生修复策略。该模型术后存活率约50%，为优化肝移植和肝癌手术方案提供重要研究平台。

小鼠手术模型中的扩大78%肝切除术

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