使用毛细血管镜检查小鼠甲床微血管形态的无创可视化

我们实验室的兴趣之一是神经退行性疾病中的血管功能障碍。我们的目标是通过毛细血管镜检查检测和监测外周微血管病变，以深入了解其在中枢神经系统疾病中的潜在作用。检测动物的微血管功能障碍通常是侵入性的、离体进行的或昂贵的。通过该协议，研究人员可以轻松且廉价地评估钉状微血管系统，并将临床甲襞毛细血管镜检查结果转化为动物模型。我们介绍了一个用于可视化镜像外周微血管系统的新位置，即钉子。与甲皱毛细血管镜检查相比，甲皱毛细血管镜检查提供了更大的区域，可以更好地观察微血管形态和结构。

[导师]首先，将麻醉的小鼠放在手术台上进行手术。然后在双眼上涂抹润滑眼胶或无菌非药物眼药膏，以防止角膜干燥。然后，使用鼻锥将动物保持在麻醉状态，使用涂抹器将大量脱毛膏涂抹在整个爪子上。确保完全覆盖爪子和指甲区域。将乳霜放置两分钟后，用干净的纸巾小心地清洁脱毛霜，然后用温水清洗爪子。去除皮毛后 24 小时，将毛细血管镜设备安装在温度保持在 21.5 至 22.5 摄氏度之间的温度控制室中。通过 USB 连接将毛细血管镜连接到笔记本电脑。在笔记本电脑上打开 Debut 视频软件应用程序。小鼠适当麻醉后，在双眼上涂抹润滑眼胶或无菌非药物眼药膏。在爪子下方放置白色实验室胶带或类似的背景材料，以增强对比度并改善血管可视化。现在将后爪掌口面朝上放在实验胶带平台上，物镜下方。使用涂抹器轻轻张开脚趾，将指甲分开在显微镜物镜下。确保甲床清晰分开，以获得最佳血管成像。通过调整 X 级和 Y 级调节器以及放大轮来可视化毛细血管镜正在放大的内容，并专注于甲床，以获得清晰的图像。为了减少眩光并提高注意力，请在爪子上大量涂抹浸油，确保指甲完全覆盖。重点关注后爪第二指的指甲，因为这是最大的指甲，最容易在小鼠身上成像。调整 X 级和 Y 级调节器和放大轮，使船舶网络成为焦点。调整物镜以尽量减少眩光并使钉血管网络进入视野。要录制视频，请点击红色 录制 首次亮相中的按钮。将每个视频保存到相应的项目文件夹，并相应地标记每个视频。接下来，打开ImageJ软件，将文件拖入软件界面以加载图像。要调整亮度和对比度，请选择图像，然后选择调整和亮度/对比度。该工具有助于改变图像的对比度，以更好地可视化血管形态。调整图像后，单击亮度/对比度工具中的设置。最后，转到文件，另存为，然后选择 Tiff 保存图像。使用毛细血管镜方法成功对甲状血管形态进行成像。典型的小鼠甲状脉管系统由传入血管、传出血管和连接两者的毛细血管网络组成。钉状毛细管网络在不同小鼠品系中是一致的，如在SV129 / S6背景和C57 / B6J背景下的野生型小鼠中得到证明。