Name: 大鼠模型中颈部深部淋巴静脉吻合术的手术方案：淋巴结和淋巴管吻合术 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-14T14:53:00.000+00:00
Duration: 7 min 37 s
Description: 学习大鼠颈部深部淋巴静脉吻合术的标准化手术方案，包括淋巴结静脉吻合术和淋巴管静脉吻合术两种方法。该方案为阿尔茨海默病研究提供可重复的动物模型，支持机制探索和疗效评估。

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本工作得到国家自然科学基金（82173384 和 81773161）、黑龙江省重点研发计划项目（2023ZX06C11）以及国药医疗科研基金项目（TYYLKYJJ-2024-043）的支持。

本研究经哈尔滨医科大学机构动物护理和使用委员会（IACUC）批准（批准号：SYDW2025-037）。实验动物为雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，体重400-500 g，年龄12-14周，由该校动物中心提供。该中心拥有特定病原体阴性（SPF）级设施，并符合国家繁殖标准。
注意：本研究主要探讨深部颈淋巴管与静脉之间的两种吻合方法。建立深部颈淋巴结（dcLN）与面后静脉（PFV）之间的外科连接，该技术称为dcLnVA；在深部颈淋巴管（dcLaV）与PFV之间创建解剖学连接，该技术称为dcLaVA。我们将详细描述这两种显微外科手术操作，包括其手术方法及吻合后的评估手段。
1. 术前准备
<ol>
	<li>使用异氟烷（3–5%，流速为1–2 L/min）对大鼠进行诱导麻醉。&#160; 待动物失去翻正反射后，将异氟烷浓度降低至1.5–2.5%以维持外科麻醉水平。密切监测大鼠的反应，仅在足底反射完全消失时进行下一步操作。</li>
	<li>使用钝头针在下一步操作开始前约5分钟，缓慢将伊文思蓝（EB）溶液（约60–100 µL/kg，5%）5注入单侧鼻腔的鼻黏膜。将大鼠置于侧卧位，注射EB的一侧朝下，以利于染料在重力作用下引流至深部颈淋巴结，同时防止EB进入对侧鼻孔或呼吸道。</li>
	<li>剃除大鼠颈部的毛发，以确保术野清晰。手术期间在双眼涂抹凡士林，防止角膜干燥或损伤。</li>
</ol>
2. 手术切口
<ol>
	<li>用碘酊和70%异丙醇交替对大鼠颈部中线消毒三次，&#160;以确保手术区域无菌。</li>
	<li>使用手术刀沿中线做一条长约3 cm的切口。 
	注意：解剖过程中注意避免损伤下颌下腺（SMG）和血管。</li>
	<li>牵开皮肤，暴露胸骨舌骨肌（STM）、胸锁乳突肌（SCM）和肩胛舌骨肌（OHM）。</li>
</ol>
3. PFV 的制备
<ol>
	<li>沿胸锁乳突肌（SCM）的外侧缘识别面后静脉（PFV），该静脉为颈外静脉（EJV）的属支。</li>
	<li>在 PFV 与 EJV 的分叉处，使用微血管夹阻断 PFV。</li>
	<li>继续钝性分离 PFV，以获得足够的长度，并在远端夹闭。确保 PFV 节段尽可能松弛，以便在与深颈淋巴结（dcLN）吻合时便于后续牵引。</li>
	<li>使用微血管剪沿血管轴线做纵行切口。 
	注意：务必使 PFV 切口呈纵行，因为横向切口可能因牵引而扩大甚至破裂。</li>
	<li>用肝素化生理盐水（含 0.1% 肝素钠的 0.9% NaCl 溶液）充分冲洗分离出的血管节段，直至完全清除血液。</li>
</ol>
4. 淋巴结-静脉吻合术
<ol>
	<li>在 STM 和 SCM 的中部探查并充分暴露 dcLN 及其传入淋巴管（ALV）4。</li>
	<li>采用钝性技术逐步解剖 dcLN。仔细切开 dcLN 与周围组织之间的筋膜，避免损伤 dcLN 及其 ALV。 
	注意：确保 PFV 与 dcLN 相互靠近，以尽量减少吻合后的张力。</li>
	<li>通过部分切除淋巴结组织，在 dcLN 的远端创建一个开口&#160;。确保开口的宽度小于或接近 PFV 的直径，以避免显著影响 PFV 的血流。</li>
	<li>使用 12-0 尼龙缝线，将 PFV 切口的近端与 dcLN 切口的近端进行吻合。</li>
	<li>继续将 PFV 切口向远端延长，使其长度略大于 dcLN 切口的长度。</li>
	<li>将缝针依次穿过 dcLN 横断面的外缘和 PFV 切口的内缘，从而将 dcLN 横断面拉入 PFV 管腔内。</li>
	<li>从 dcLN 横断面的下缘至上缘进行连续缝合。在完成最后一针缝合前，再次用肝素钠溶液冲洗管腔，以防止 PFV 管腔内形成血栓。在连续缝合过程中保持适当的缝线张力，以确保牢固闭合，防止后续渗漏。</li>
	<li>在连续吻合处出现松动的位置，加做间断缝合。</li>
</ol>
5. 淋巴管-静脉吻合术
<ol>
	<li>横断前淋巴管（ALV），并保留周围组织作为缝合锚定点。</li>
	<li>使用12-0缝合针，从PFV切口近端约2 mm处进针，并推进针线，使其从PFV切口的开口处穿出。</li>
	<li>将缝合针刺入ALV残端附近的组织，以捕获ALV残端。</li>
	<li>将针穿入PFV切口，并从其近端边缘穿出，然后打结固定，使ALV残端位于PFV管腔内。 
	注意：必须将ALV残端完全插入PFV管腔内，并使其朝向近端方向，以维持生理性的淋巴引流。</li>
	<li>将ALV残端附近的周围组织与PFV切口的内侧边缘缝合，以提供外部固定。在完成最终缝合前，再次用肝素钠溶液冲洗管腔，以防止PFV管腔内血栓形成。</li>
</ol>
6. 缝合与术后护理
<ol>
	<li>对皮下筋膜进行连续缝合，对皮肤进行间断缝合。</li>
	<li>用碘酊消毒手术区域，然后在切口周围均匀涂抹红霉素软膏，以预防感染。</li>
	<li>术后根据机构动物护理指南，每日皮下注射美洛昔康（1–2 mg/kg），最多持续72小时，以提供镇痛。注射部位为颈部或侧腹部的疏松皮下组织。</li>
</ol>
7. 吻合口的验证
<ol>
	<li>识别并解剖位于面后静脉（PFV）外侧的面静脉前支（AFV），其为颈外静脉（EJV）的属支。</li>
	<li>通过观察面后静脉（PFV）的染色强度明显高于相邻的面静脉前支（AFV），来验证吻合是否成功。</li>
	<li>使用标准化的CIE LAB色彩空间对颜色变化进行客观量化。在Fiji中定义并提取感兴趣区域（ROIs），获取平均CIE L*a*b*值，然后利用以下公式计算以度为单位的色相角（h°）： 
	h° = atan2(b, a) × (180/π)6,7。</li>
</ol>

<ol><li>Formolo, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leveraging+the+glymphatic+and+meningeal+lymphatic+systems+as+therapeutic+strategies+in+Alzheimer%27s+disease%3A+an+updated+overview+of+nonpharmacological+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Leveraging the glymphatic and meningeal lymphatic systems as therapeutic strategies in Alzheimer's disease: an updated overview of nonpharmacological therapies.</a> Mol Neurodegener. 18 (1), 26(2023).</li>
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</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

2012年，ILif 等人首次描述了类淋巴系统82015年，Louveau 等人发现淋巴管腔内存在T细胞聚集结构，并将这些结构命名为脑膜淋巴管。他们进一步证实，脑膜淋巴管与胶淋巴系统和深颈部淋巴结（dcLN）均存在连接。综上所述，在脑淋巴系统（包括胶淋巴系统和脑膜淋巴管）的调控下，脑间质液中的Aβ被引流至脑脊液（CSF），随后进入脑膜淋巴管，最终到达深颈部淋巴结（dcLN）9后续的动物实验一致表明，脑膜淋巴功能受损会导致小鼠认知能力下降和Aβ沉积增加10相反，诸如近红外光照射等可增强脑膜淋巴管功能的治疗策略，已被证明可改善小鼠的认知功能并减轻阿尔茨海默病相关的病理特征。11随着研究的深入，越来越多的证据表明脑脊液外流 通过 颅底部位的脑膜淋巴管在清除效率上比通过蛛网膜颗粒的传统通路更具可信度和高效性。该发现进一步凸显了脑淋巴系统在阿尔茨海默病发病机制及疾病进展中的关键作用。12<su...

阿尔茨海默病（AD）是一种逐渐进展的神经退行性疾病，常导致认知功能下降。AD 的典型病理特征是淀粉样蛋白-β（Aβ）斑块和由异常磷酸化的 tau 蛋白形成的神经纤维缠结。近年来，关于脑淋巴系统的研究为治疗 AD 开辟了新的治疗途径。该系统通过脑膜淋巴管（mLVs）将 Aβ 从脑间质液（ISF）引流至脑脊液（CSF），并进一步输送至深颈部淋巴结1。2024 年，谢教授团队报道了首例在接受深颈部淋巴-静脉吻合术（dcLVA）后认知功能改善的 AD 患者，并随后启动了一项临床试验（NCT06530732）2。
尽管dcLVA作为一种治疗阿尔茨海默病（AD）的新疗法，为患者带来了令人期待的前景，但其治疗作用的具体机制仍需进一步阐明3。动物模型为研究这些机制提供了不可或缺的平台。深入理解dcLVA的治疗机制，不仅有助于加深对AD发病机制的认识，还将优化手术技术、明确治疗适应证，并最终为患者带来更大的临床获益。
谢教授团队近期报道了一种深颈淋巴管-静脉吻合（dcLVA）模型，证明了将颈外静脉属支与深颈淋巴结相连的可行性4。然而，该模型的描述仍不充分。首先，对深颈淋巴结（dcLN）及其周围解剖结构的描述不足。其次，缺乏术后通畅性的客观定量评估。更重要的是，尚缺少关于dcLN与静脉吻合步骤的详细描述，以及便于教学的清晰、直观的图片和视频资料。
由于该技术涉及复杂的外科操作，且考虑到大鼠与人类之间存在的解剖学差异，大鼠模型中的手术步骤和技术细节的任何变化均可能导致实验结果出现显著偏差。因此，清晰地展示大鼠的相关解剖标志，并对吻合手术提供详尽的技术描述，具有重要的紧迫性和必要性。这些工作对于提高手术方案的可重复性和标准化程度至关重要，有助于研究人员更广泛地应用该模型，并推动相关科学研究的发展。此外，鉴于临床外科技术的多样性，例如淋巴结-静脉吻合术与淋巴管-静脉吻合术，以及不同手术方式可能导致的疗效差异，有必要开展比较研究以评估其相对有效性。针对上述挑战，本文提出了两种高度可重复的深颈部淋巴管静脉吻合方法：深颈部淋巴结-静脉吻合术（dcLnVA）和深颈部淋巴管-静脉吻合术（dcLaVA）。这些方法旨在标准化模型构建流程，促进后续基础研究的开展。

<table><tbody><tr><td>0.9% 无菌生理盐水溶液&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>山东齐都药业有限公司&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>R9824041307&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>红霉素软膏</td><td>三九药业有限公司</td><td>H34020307</td><td></td></tr><tr><td>伊文思蓝染料 5% (50 mL)</td><td>LEAGENE</td><td>DK0053</td><td></td></tr><tr><td>肝素钠溶液 0.1%</td><td>BIOSCO</td><td>BAC006</td><td></td></tr><tr><td>显微镊子</td><td>ANLIXIN</td><td>AT-15</td><td></td></tr><tr><td>微血管夹</td><td>Tigergene</td><td>TG-AC-18-Z</td><td></td></tr><tr><td>青霉素钠</td><td>河北远征禾木药业有限公司</td><td>JFT230602</td><td></td></tr><tr><td>白色凡士林</td><td>天成&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>20250202</td><td></td></tr></tbody></table>

大鼠模型中深部颈淋巴管静脉吻合术的手术方案：淋巴结与淋巴管吻合

Surgical Protocols for Deep Cervical Lymphovenous Anastomosis in a Rat Model: Lymph Node and Lymphatic Vessel Anastomoses

深部颈淋巴静脉吻合术（dcLVA）已成为阿尔茨海默病（AD）的一种有前景的治疗策略，相较于目前有限的治疗手段，可带来显著改善。然而，dcLVA的作用机制尚不明确。尽管相关临床试验正在进行中，模拟dcLVA的动物模型仍为探索其机制提供了有价值的工具。本研究旨在建立一种标准化的动物dcLVA模型制备方案，以促进基础研究并应对临床挑战。我们描述了将深部颈淋巴结（dcLN）及其传入淋巴管（ALV）与面后静脉（PFV）进行吻合的手术步骤和关键操作，并详细介绍了两种不同的手术方法：深部颈淋巴结-静脉吻合术（dcLnVA）和深部颈淋巴管-静脉吻合术（dcLaVA）。除了促进淋巴引流外，比较这两种手术方法还有助于我们理解并探索深部颈淋巴结及深部颈淋巴系统在AD发病机制中的作用。总体而言，在大鼠中完整清晰地呈现手术步骤及关键解剖标志，有助于标准化手术操作流程，从而最大限度地减少混杂因素，降低实验间变异，为深入理解相关机制奠定坚实的方法学基础。

dcLnVA 和 dcLaVA 的手术步骤及术后结果各以一例代表性病例进行说明。在 dcLnVA 病例中，发现并分离出位于胸锁乳突肌（SCM）外侧缘的 PFV（直径 2 mm）图1A, 图 S1A在胸锁乳突肌（SCM）与肩胛舌骨肌（STM）之间的间隙内，距穿支静脉（PFV）约4 mm内侧处，发现一枚长椭圆形的深颈淋巴结（dcLN，5 mm × 4 mm × 2 mm），并进行精细分离（图1B，C，图S1B-E）。随后，将夹闭的PFV与分离的dcLN并置图1D沿PFV侧壁做一纵向切口（1.5 mm），并用约1 mL肝素钠溶液（0.1%）冲洗管腔 (图1E- F, 图 S1F）。在dcLN处做一个切口（长2.5 ...

本文介绍了一种实验方案，旨在明确阐述在大鼠体内将深部颈淋巴结或其输入淋巴管与面后静脉进行吻合的各个步骤，以尽量减少其他变量的影响，并标准化基于手术的研究操作。

深部颈淋巴管静脉吻合术（dcLVA）已成为阿尔茨海默病（AD）一种颇具前景的治疗策略，具有显著的……

我们的dcLVA技术在治疗阿尔茨海默病方面展现出潜力，但其作用机制尚不明确。动物模型对此至关重要，然而大鼠与人类之间的解剖学差异是一个关键挑战。标准化手术标志和操作技术对于获得可靠结果至关重要。首先，使用碘酊和70%异丙醇交替对麻醉大鼠颈部中线区域进行三次消毒，以确保手术区域无菌。随后，使用手术刀沿中线做一条长约三厘米的切口。解剖过程中注意避免损伤下颌下腺及血管。牵拉皮肤以暴露胸骨甲状肌、胸锁乳突肌和肩胛舌骨肌。沿胸锁乳突肌的外侧缘辨认耳前面前静脉，此为颈外静脉的一条属支。在耳前面部静脉与颈外静脉的分叉处，使用微血管夹阻断耳前面部静脉。继续钝性分离耳前面部静脉以获得足够的长度，并在远端进行夹闭。确保耳前面部静脉段尽可能松弛，以便在与深部颈淋巴结吻合时便于后续牵引。然后，使用显微血管剪沿血管轴线做纵行切口。务必使耳前面部静脉的切口呈纵行，因为横行切口可能因牵拉而扩大甚至破裂。用肝素化生理盐水彻底冲洗分离出的血管节段，肝素化生理盐水的配制方法为0.9%氯化钠溶液中加入0.1%肝素钠，直至完全清除红细胞。在胸骨舌骨肌与胸锁乳突肌之间，探查并充分暴露深部颈淋巴结及其传入淋巴管。采用钝性分离技术逐步解剖深部颈淋巴结。仔细切开深部颈淋巴结与周围组织之间的筋膜，避免损伤淋巴结及其传入淋巴管。确保耳前面部静脉与深部颈淋巴结彼此靠近，以尽量减少吻合后的张力。接着，通过部分切除淋巴结组织，在深部颈淋巴结的远端创建一个开口。确保开口的宽度小于或接近耳前面部静脉的直径，以避免显著影响静脉内的血流。使用12-0尼龙缝线，将耳前面部静脉切口的近端与深部颈淋巴结切口的近端进行吻合。继续向远端延长耳前面部静脉的切口长度，使其略大于深部颈淋巴结切口的长度。然后，将针依次穿过深部颈淋巴结横断面的外缘和耳前面部静脉切口的内缘，从而将淋巴结的横断端拉入静脉腔内。从深部颈淋巴结横断面的下缘至上缘行连续缝合。在完成最后一针缝合前，再次用肝素钠溶液冲洗管腔，以防止耳前面部静脉管腔内血栓形成。连续缝合过程中应保持适当的缝线张力，以确保严密闭合，防止术后渗漏。横断传入淋巴管，并保留周围组织作为缝合锚定点。使用12-0缝合针，在耳前面部静脉切口近端约两毫米处插入，推进针头使其从静脉切口的开口处穿出。将缝合针穿入传入淋巴管残端附近的组织，以捕获该淋巴管。将针从耳前面部静脉切口处穿入，再从其近端边缘穿出，然后打结固定，使输入淋巴管残端位于静脉腔内。将输入淋巴管残端完全插入耳前面部静脉腔内，并使其朝向近端方向，以维持生理性的引流方向。最后，将输入淋巴管残端周围的组织与耳前面部静脉切口的内侧边缘缝合，以提供外部固定。在深部颈淋巴结-静脉吻合术中，吻合后后面部静脉的平均色调角偏向蓝色，为278.2度，而相邻的前面部静脉为327.9度，其差异大于吻合前后面部静脉的24.8度。在深部颈淋巴管-静脉吻合术中，吻合后后面部静脉的平均色调角为282.4度，比相邻前面部静脉的303.7度呈现出更强的蓝色调，其差异也比吻合前后面部静脉的39.6度更为显著。本研究为深部颈淋巴管静脉吻合术（dcLVA），包括深部颈淋巴结-静脉吻合术（dcLNVA）和深部颈淋巴管-静脉吻合术（dcLAVA），提供了具体的参考依据和标准化框架，支持相关科研与临床应用。未来我们将研究该手术方法在阿尔茨海默病大鼠模型中的疗效及其作用机制。

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