In diesem Video-Artikel präsentieren wir Ihnen eine Schritt-für-Schritt-Demonstration von Möglichkeiten zur Sammlung und Kryokonservierung Hamster-Oozyten mit hoher post-Tau-Überlebensraten. Das gleiche Verfahren kann auch angewendet werden, um erfolgreich einfrieren und auftauen Maus-Embryonen in verschiedenen Stadien der Präimplantationsdiagnostik Entwicklung sein.
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Methodenartikel
Sammlung und Kryokonservierung von Oozyten Hamster und Maus Embryonen
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Embryonen und Eizellen wurden zunächst erfolgreich mehr als 30 Jahren, kryokonserviert, wenn Whittingham
Protokoll
Tierpflege und-verfahren wurden nach den Richtlinien und Vorschriften durch die Ethikkommission für die Tier-und Human Research der Universitat Autónoma von Barcelona, Spanien zugelassen durchgeführt.
I. Eizellenentnahme
- Prüfen Sie, und wählen weiblichen Hamster (Mesocricetus auratus; 8-12 Wochen alte) der Golden Syrian Belastung für das Vorhandensein einer dicken Ausfluss (postovulatorische Entladung).
- Induce ausgewählten Weibchen durch intraperitoneale Injektion von 40 IE PMSG (Pregnant Mare Serum Gonadotropin), gefolgt von 40 IE hCG (humanes Chorion Gonadotropin) 60 Stunden später superovulate.
- Euthaniz....
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Diskussion
Mit diesem Protokoll Hamster-Oozyten-und Maus-Embryonen erfolgreich kryokonserviert werden. Einmal gefroren, können Eizellen / Embryonen in flüssigem Stickstoff Tanks auf unbestimmte Zeit gespeichert und wiederhergestellt werden an jedem Ort und Zeit gewünscht. Dies bietet den Vorteil, dass Proben fast einsatzbereit, wann immer erforderlich. Auf der anderen Seite kann dieses Protokoll auch verwendet, um Embryo Kryobanken aus wertvollen Mausstämme (wie transgenen Linien), wie eine kostengünstige und sichere Alternative für die Aufrechterhalt.......
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Danksagungen
Diese Arbeit wurde von der spanischen Ministerio de Educación y Ciencia (BIO 2006-11792) und der Generalitat de Catalunya (2005-SGR00437) unterstützt. Autoren möchten Marc Puigcerver und Jonatan Lucas für ihre technische Unterstützung danken, bei der Vorbereitung der Medien. Alle Mitarbeiter aus dem Servei d'Estabulari ist für Tierhaltung anerkannt, und vor allem Juan Jose Martin und Javier Benito für ihre zusätzlichen Beitrag zur Aufzeichnung Teil dieses Video. NZB ist ein Fellow des portugiesischen Fundação para a Ciência e Tecnologia und SG ist ein Fellow des spanischen Ministerio de Educación y Ciencia.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare | |
|---|---|---|---|---|
| Materialname | Typ | Firma | Katalognummer | Anmerkung |
| Mini-Straw vom französischen Typ, 0,25 ml | Mini-tub | 13407/0010 | ||
| hCG | Farma-Lepori, Spanien | 749036.4 | ||
| Hyaluronidase | Sigma | H-3884 | ||
| KSOM-H-Medium | Ref. [11] | |||
| Flüssiger Stickstoff | Air Liquide | |||
| Kunststoffstopfen | Mini-tub | 19046 | ||
| PMSG | Intervet, Spanien | 1.614/8447 | ||
| Propylenglykol | Fluka | 82280 | ||
| Saccharose | Merck | 107687 | ||
| Chirurgische Schere | Aesculap | BC-060R; BG-061R | ||
| Thermoversiegelungsgerät | SIZ | 220 | ||
| Kulturschalen, 35 und 90 mm | Nunc | 153066; 150350 | ||
| 10-ml-Röhrchen | Greiner Bio-one | 163160 | ||
| Stickstofftank | MVE, Cryogenics | XC 43/28 | ||
| Programmierbarer Gefrierschrank | Planner Products Ltd. | Kryo-10 Series III | ||
| Pinzette | Aesculap | BD-331R; BD-053R; OC-020R |
Referenzen
- Whittingham, D. G., Leibo, S. P., Mazur, P. Survival of mouse embryos frozen to -196 and -269 °C. Science. 178, 411-414 (1972).
- Wilmut, I. The effect of cooling rate, warming rate, cryoprotective agent and stage of develo....
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Nachdrucke und Genehmigungen
