Live-Imaging von Gliazellen Migration in der Drosophila Eye Imaginalscheibe

Zusammenfassung

Hier beschreiben wir ein Protokoll, um die Migration von Gliazellen in den Entwicklungsländern Drosophila Auge mit Live-mikroskopische Analyse mit GFP markierten Gliazellen gepaart untersuchen.

Zusammenfassung

Gliazellen der Wirbeltiere und wirbellose Organismen müssen Endziel Regionen wandern, um umhüllen und Unterstützung verbunden Neuronen. Während die jüngsten Fortschritte gemacht worden, um die Live-Migration von Gliazellen in den Entwicklungsländern Puppenstadium Flügel (1), Studium der Beschreibung

Protokoll

Teil 1: Pre-Versuchsanordnung.

1. Eine Woche im Voraus, fliegt Kumpel zur Larve zu generieren, die ausdrückliche GFP unter der Kontrolle eines Glia-spezifischen Promotors. Für unser Experiment haben wir visualisiert GFP mit einem Kernlokalisierungssequenz in Gliazellen mit umgekehrter Polarität (Repo)-Promotor (3, 4) zum Ausdruck markiert.
2. Bereiten Deckgläser mindestens einen Tag im Voraus durch Einweichen 18 mm runde Deckgläser für 10 Minuten in 1% Poly-L-Lysin-Lösung und in der Luft über Nacht trocknen.
3. Am Tag vor dem Experiment, sauber ein Chamlide magnetischen Kultur Kammer durch Einweichen über Nacht Komponenten in 70% Ethano....

Diskussion

In diesem Protokoll beschreiben wir Beobachtung von Gliazellen Migration in das Auge Imaginalscheibe mit Live-Mikroskopie. In unserem Wildtyp Beispiel (Abbildung 1 AD), verwendeten wir eine nukleare GFP Marker Gliazellen Bewegung in die Augen zu beobachten Disc im Laufe von einer Stunde. In einer Mutante für einen Kandidaten-Gen für Gliazellen Migration derzeit untersucht in unserem Labor erforderlich, beobachteten wir einen Stillstand der Glia-Zellkernen in der Optik Stiel während eines Zeitraums von einer Stu.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Poly-L-lysine	Reagenz	Sigma-Aldrich	P8920
Schneider’s Insect Media	Reagenz	Sigma-Aldrich	S0146
Penicillin-Streptomycin	Reagenz	Sigma-Aldrich	P4458
Insulinlösung aus Rinderpankreas	Reagenz	Sigma-Aldrich	I0516
Chamlide Magnetkammer	Werkzeug	Live cell Instrument	CM-R-10	35-mm-Schale für 18-mm-Deckglas
Ultrascharfe Schneideschere	Werkzeug	Fine Science Tools	15200-00
Dumont #5 Pinzette	Werkzeug	Fine Science Tools	11251-20
Fluoreszenzmikroskop	Mikroskop	Carl Zeiss, Inc.		Jedes Fluoreszenz-Bildgebungssystem, das die erforderlichen Filter und Anregung für GFP besitzt, kann verwendet werden.