Chronologischer Alterung in Hefe bezieht sich auf den Verlust der Lebensfähigkeit der Zellen mit der Zeit in der stationären Phase assoziiert. Hier beschreiben wir eine High-Throughput-Verfahren zur quantitativen Bestimmung Hefe chronologische Lebensspanne.
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Methodenartikel
Die Quantifizierung der Hefe Chronologisches Life Span durch Auswachsen von gealterten Zellen
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die Bierhefe
Protokoll
Teil 1: Vorbereitung der alternden Kulturen
- Streak-Stämmen von Interesse aus gefrorenen Beständen auf YEPD Agarplatten (1% Hefeextrakt, 2% Bacto-Pepton, 2% Agar, 2% Glucose).
- Inkubieren Sie die Zellen bei 30 ˚ C für 48 Stunden oder bis einzelne Kolonien erscheinen.
- Wählen Sie einzelne Kolonien und impfen in 5 ml YEPD flüssigen Medium (1% Hefeextrakt, 2% Bacto-Pepton, 2% Glucose) in Reagenzgläsern.
- Wachsen Kulturen über Nacht bei 30 ˚ C unter Beibehaltung konstanter Bewegung entweder mit einem Shaker oder Bandage.
- Impfen 5 ml synthetischen komplett (SC)-Medium (Tabelle 1) mit 50 ul der Übernacht-Kultur. In der Regel d....
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Diskussion
Die High-Throughput-chronologische Lebensspanne beschriebene Assay ist hier eine effektive Methode zur Quantifizierung der Alterungspotential einer großen Zahl von Stämmen mit hoher Genauigkeit und Präzision. Der primäre Voraus dieser Methode gegenüber klassischen Methoden zur Bestimmung der Überlebenszeit durch Zählen Kolonie-bildenden Einheiten (siehe z. B. 3) ist die Verwendung eines Shakers / Inkubator / Platte Lesegerät wie dem Bioscreen C MBR-Maschine mit hoher Auflösung Wachstumskurven bei erhalten jed.......
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Danksagungen
Diese Arbeit wurde vom NIH Grant 1R21AG031965-01A1 unterstützt. MK ist eine Ellison Medical Foundation New Scholar in Aging.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare | |
|---|---|---|---|---|
| Bacto-Pepton | Reagenz | BD Biosciences | 211677 | |
| Bacto-Hefeextrakt | Reagenz | BD Biosciences | 288620 | |
| Difco-Agar | Reagenz | BD Biosciences | 214530 | |
| Hefestickstoffbase ohne A.A. und A.S. | Reagenz | MidSci | J630-500G | |
| Aminosäuren | Reagenz | Sigma-Aldrich | ||
| Ammoniumsulfat | Reagenz | Spectrum | AM185 | |
| Dextrose | Reagenz | Fisher Scientific | D16-10 | |
| Bioscreen C MBR-Gerät | Werkzeug | Growth Curves USA | 5101370 | |
| Bioscreen 100-Loch-Honeycomb-Platte | Werkzeug | Growth Curves USA | 9502550 |
Referenzen
- Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Replicative aging in yeast: the means to the end. Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29(2008).
- Kaeberlein, M. Handbook of models for human aging. Conn, P. M. , Elsevier Press. Boston. 109(2006).
- Fabrizio, P., Longo, V. D.
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Nachdrucke und Genehmigungen
