Parkinson-Krankheit ist durch den Verlust von dopaminergen Innervation des Striatum, die experimentell durch 6-OH-Dopamin induziert werden können verursacht werden. Wir beschreiben, wie eine stereotaktische Läsion durchzuführen und Apomorphin-induzierte Drehverhalten in Mäusen zu überwachen. Dieses Modell ist nützlich und zuverlässig für die Erprobung neuer Therapien für Parkinson-Krankheit.
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Methodenartikel
Mausmodell für Morbus Parkinson: von 6-OH Dopamin Läsion Behavioral-Test
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Morbus Parkinson (PD) betrifft mindestens 6,5 Millionen Menschen weltweit, unabhängig von Geschlecht, sozialer, ethnischer, wirtschaftlicher oder geografische Grenzen. Key Symptome wie Tremor, Rigor und bradikinesia, entwickeln sich, wenn etwa 3 / 4 der dopaminergen Zellen in der Substantia nigra sind verloren, und nicht, um für den reibungslosen und koordinierten Regelung der striatalen Motorstromkreisen bieten. Depression und Halluzinationen sind häufig, und Demenz tritt schließlich in 20% der Patienten. Zu diesem Zeitpunkt gibt es keine Behandlung zu verzögern oder stoppen das Fortschreiten der PD. Vielmehr sind die zurzeit verfügbaren Medikamente zielen stärker auf die Linderung der Symptome. Neue OP-Strategien können reversibel an das funktionell beschädigt Schaltungen durch die elektrische Stimulation von tief Hirnstrukturen wechseln, aber obwohl die tiefe Hirnstimulation ist ein bedeutender Fortschritt, ist es nicht für alle Patienten geeignet. Es bleibt daher notwendig, neue Zelltherapie Ansätze in präklinischen Modellen zu testen.
Selektive neurotoxische Störungen des dopaminergen Bahnen können durch Injektion von 6-Hydroxydopamin (6-OHDA) oder MPTP reproduziert werden (1-Methyl-4-phenyl-1 ,2,3,6-tertahydropyridine), während abbauenden Drogen und oxidative-schädliche Chemikalien können auch reproduzieren Besonderheiten der PD bei Nagetieren. Im Gegensatz zu MPTP, verursachen 6-OHDA Läsionen massiven irreversiblen Verlust von Nervenzellen und kann uni-oder bilateral. Die 6-OHDA Läsion Modell ist zuverlässig, führt zu robusten motorische Defizite, und ist die am weitesten nach 40 Jahren Forschung in rats1 verwendet. Da Wechselwirkungen zwischen transplantierten Zellen und Gastgeber können nun genauer in Mäusen als bei Ratten untersucht werden, hat das Modell bei Mäusen 2,3, wo es vor kurzem 4 gekennzeichnet umgesetzt worden.
In diesem Video zeigen wir, wie man Läsion der linken nigro-striatalen Weg von narkotisierten Mäusen durch langsam liefert 2,0 ul der 6-OHDA durch eine stereotaxically eingefügt Mikro-Kanüle. Der Verlust von dopaminergen Input erfolgt innerhalb weniger Tage, und die funktionellen Beeinträchtigungen können über post-operative Wochen und Monaten nach Bewertung Tier Rotationen von dopaminergen Wirkstoffen 5 induzierte überwacht werden. Hier zeigen wir Ganzkörper-kontralateralen Rotationen auftretenden 10 Minuten nach einer einzigen subkutanen Verabreichung von Apomorphin, gemessen ein Monat nach der Läsion. Ergebnisse und Nachteile werden im Folgenden erörtert.
Protokoll
Alle Chemikalien in fester Form gespeichert wird, wie 6-OHDA und Apomorphin, wurden in sterile Injektion Wasser verdünnt und filtriert in einem Laminar-Flow-Haube, um Verunreinigungen zu vermeiden. Darüber hinaus wurden Neurotoxine und neuroaktiven Stoffe gelagert, zubereitet, behandelt und entsorgt werden gemäß den Vorschriften von internationalen Richtlinien 6 und der örtlichen Kommission für Biosicherheit gesetzt.
1 - Anästhesie und Chirurgie
Erwachsene männliche Swiss-Mäuse (25-30g) werden mit Atropin (0,2 mg / kg, sc) vorbehandelt, um Vagotonus zu reduzieren und dann betäubt mit einer intraperito....
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Diskussion
Umfangreiche einseitige Läsion des nigro-striatalen Bahn zuverlässig bei Mäusen erzielt werden durch eine einzige stereotaktische Injektion von 6-OHDA in das Striatum. Die Ausdehnung der Läsion kann post-mortem durch Immunhistochemie nachgewiesen werden für Tyrosinhydroxylase (was katalysiert den geschwindigkeitsbestimmenden Schritt der Synthese von DA, dh die Umwandlung von L-Tyrosin zu Dihydroxyphenylalanin), wie in dem Video dargestellt.
In vivo sind kontralateralen Rotationen durch Apomo.......
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Offenlegungen
Die Experimente wurden in Übereinstimmung mit den internationalen Richtlinien für die Pflege und Nutzung der Säugetiere in Neuroscience and Behavior Forschung durchgeführt 6, Nach Genehmigung durch die Institutional Animal Care und Verwenden Committee (Comissão de avaliação de Uso de Animais em Fortgeschrittenen: UFRJ / CAUAP Protokoll # DAHEICB 027). Angemessene Maßnahmen wurden ergriffen, um die Schmerzen und Beschwerden der Versuchstiere zu minimieren.
Danksagungen
Unterstützt von Fundação de Amparo ein Fortgeschrittenen-do Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ) und Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). Wir bedanken uns bei anonymen Gutachtern, deren Kommentare dazu beigetragen, uns zu verbessern sowohl das Manuskript und Video.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Ketaminhydrochlorid | König | 90–120 mg/kg | |
| Xylazinhydrochlorid | König | 10 mg/kg | |
| Atropinsulfat | Isofarma | Isofarma | |
| 6–Hydroxydopaminhydrochlorid | Sigma-Aldrich | 5 μg/μL | |
| L-Ascorbinsäure | USB Corp., Affymetrix | 0,2 % | |
| Xylocain (Lidocainhydrochlorid) | AstraZeneca | 5 % 50 mg | |
| Nebacetin (Neomycinsulfat + Bacitracin) | Altana Pharma | 5 mg/g + 250 IE/g | |
| R-(–)-Apomorphinhydrochlorid | Sigma-Aldrich | 0,5 mg/kg | |
| GenTeal Augensalbe mit Hypromellose | Novartis AG | 0,33 % | |
| Ibuprofen | Abbott Laboratories | 4 mg/100 ml Trinkwasser | |
| Povidon | Johnson Diversey | ||
| R-(–)-Apomorphinhydrochlorid | Sigma-Aldrich | 0,5 mg/kg |
Referenzen
- Ungerstedt, U. 6-hydroxy-dopamine induced degeneration of central monoamine neurons. Eur. J. Pharmacol. 5, 107-110 (1968).
- Akerud, P., Canals, J. M., Snyder, E. Y., Arenas, E. Neuroprotection through del....
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Nachdrucke und Genehmigungen
