Die Autoren haben keine Offenlegungen vorzunehmen.

dissection der imaginalscheiben vom 3. instar drosophila-larven

Dissection of Imaginal Discs from 3rd Instar Drosophila Larvae

Dieses Protokoll zeigt die Dissektionstechnik zur Isolierung Imaginalscheiben von Drosophila-Larven im 3. Larvenstadium Stufe eingesetzt. Verfahren zur Festsetzung des Gewebes nach Worten und dem Entfernen der Flügel-, Bein-und Augen-Scheiben werden direkt auf einem Objektträger für spätere Visualisierung unter Beweis gestellt.

Dissection der Imaginalscheiben vom 3. Instar Drosophila-Larven

Heute werde ich Ihnen zeigen, wie man Imaginalanlagen aus Drosophila-Larven des dritten Larvenstadiums präpariert. Die Imaginalanlagen von Larven des dritten Stadiums können für eine Vielzahl von Entwicklungsprozessen verwendet werden. In unserem Labor untersuchen wir sie, um den Prozess der Apoptose zu beobachten, aber Sie können auch verschiedene Proteine in ihnen exprimieren und auf diese Weise unterschiedlichste Entwicklungsprozesse innerhalb der Anlagen untersuchen.Dazu werde ich mehrere sehr wichtige Werkzeuge verwenden. Zunächst ist dies der Pflückstab, mit dem wir die Larven aus ihren Schalen entnehmen werden. Als nächstes, und das ist sehr wichtig, die Präparationspinzette, die äußerst scharf sein muss, damit die Dissektion erfolgreich durchgeführt werden kann.Dann verwenden wir eine chirurgische Klinge, eine Nr. 11-Chirurgieklinge, um die Discs vom Kopf zu entfernen. Anschließend platzieren wir die Discs auf einem Objektträger mit etwas Vector Shield als Einbettmedium. Zunächst sammeln wir daher einige dritte-Instar-Wanderlarven, dritte-Instar-Larven.Ich verwende hier lediglich meinen Pflückstab, um sie gewissermaßen von der Röhrenwand abzulösen. Manchmal hilft es, wenn der Stab leicht angefeuchtet ist; anschließend legt man sie in einen Tropfen PBS. Gut, hier haben wir unsere dritten Stadiums-Larven.Da ich rechts dominant bin, werde ich seinen Kopf in Richtung meiner rechten Seite drehen, und wir werden einige markante anatomische Strukturen nutzen, um uns bei der richtigen Grifflegung zu orientieren. Zunächst ist dies der Hauptteil der Luftröhre hier und hier. Dann gibt es noch einen kleinen Querschnitt weiter oben in Richtung des Kopfes.Zunächst halte ich die Larven etwa zwei Drittel des Körpers von Kopf aus sanft fest. Anschließend greife ich mit der rechten Hand einige Millimeter hinter dem Querstück hier an, wobei ich versuche, etwa die Hälfte der Breite der Larve zu erfassen. Das ist ein ziemlich guter Griff.Sie sehen, dass ich etwa zur Hälfte fertig bin. Nun ziehe ich vorsichtig mit der rechten Hand nach vorne, wobei alle Eingeweide heraustreten. Okay. Der Hauptteil des Körpers kann nun entsorgt werden.Und hier haben wir den Kopf, der die an den Mundteilen befestigten Imaginalanlagen umfasst. Daher werde ich ihn an den Mundteilen packen, um die Anlagen nicht zu beschädigen, und ihn auf einen frischen Tropfen PBS verschieben. Nun haben wir unseren fixierten larvalen Kopf.Wir werden das gesamte überschüssige Gewebe entfernen und entweder wie zuvor die Mundwerkzeuge ergreifen oder die Larve mit der Pinzette gegen die Präparationsplatte nach unten drücken. Die Mundwerkzeuge befinden sich nun links. Gut, hier haben wir den Darm, den wir nicht benötigen, und hier liegt eine Speicheldrüse.Es befindet sich etwas Fettgewebe oder Fettkörper. Ziehen Sie dieses weiterhin vorsichtig ab, insbesondere das Fett, da es bestimmte Nachweise und Färbungen stören kann, die Sie nicht wünschen. Nun haben wir den gereinigten larvalen Kopf.Jetzt haben wir unsere Larvenköpfe, die vom Körper abdisseziert, fixiert und gewaschen wurden, bei denen das überschüssige Gewebe entfernt wurde und die mit dem jeweils erforderlichen Reagenz behandelt wurden, beispielsweise einer Antikörperfärbung in C zwei Tunnel oder einer anderen funktionellen Färbung. Nun haben wir sie auf einen Objektträger gelegt und sind bereit, die eigentlichen Discs vom Kopf, also den Mundteilen, zu trennen.Okay, diesmal befinden sich unsere Mundteile hier links. Ich nehme nun meine Pinzette und drücke sie leicht gegen den Objektträger. In meiner rechten Hand halte ich eine Skalpellklinge der Größe 11, ein etwas feineres Instrument, das sich zum Präparieren eignet.Zunächst werde ich das ZNS und die Opticallappen entfernen. Hier sehen Sie das ZNS, die beiden Opticallappen und hier die mit ihnen verbundenen Augen-Antennen-Anlagen. Wenn ich nun das ZNS entferne, indem ich die Klinge zwischen die Opticallappen und die Augenanlagen einführe und langsam ziehe, dehnen sich die Augenanlagen dabei gewissermaßen nach außen.Okay, nun haben wir das ZNS und die Opticallappen. Nun liegen die beiden Augen- oder Augenscheiben vor, die vom ZNS abgetrennt wurden. Jetzt entferne ich sie vorsichtig von den Mundteilen, indem ich am Ansatz vorsichtig schneide und ziehe.Okay, hier ist eine Augenantennenscheibe, dort die andere Augenintenscheibe. Okay. Und jetzt können wir die heraustretende Flügelscheibe sehen. Ich werde erneut vorsichtig den Basisschnitt finden und ziehen.Hier haben wir also eine Flügelscheibe und eine daran befestigte Beinscheibe, zusammen mit etwas Trachea. Gut, das ist Ihre Flügelscheibe mit einer angehängten Beinscheibe, und offensichtlich gibt es mehrere Beinscheiben. Wir können also hier ein wenig herumsuchen und weitere Scheiben finden, indem wir vorsichtig mit der Klinge tasten.Das sind alle Scheiben, die wir hier finden werden. Es gibt noch ein paar weitere Beinscheiben.

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University of California, Irvine (UCI).  Dieses Protokoll zeigt die Dissektionstechnik zur Isolierung Imaginalscheiben von Drosophila-Larven im 3. Larvenstadium Stufe eingesetzt. Verfahren zur Festsetzung des Gewebes nach Worten und dem Entfernen der Flügel-, Bein-und Augen-Scheiben werden direkt auf einem Objektträger für spätere Visualisierung unter Beweis gestellt.

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