Freeze-Cracking von Nematoden: Eine Methode zur Freilegung von innerem Wurmgewebe zur Färbung

Zusammenfassung

Quelle: Zhang, N., et al. Der C. elegans-Darm als Modell für die interzelluläre Lumenmorphogenese und die in vivo polarisierte Membranbiogenese auf Einzelzellebene: Markierung durch Antikörperfärbung, RNAi-Funktionsverlustanalyse und Bildgebung. J. Vis. Exp. (2017).

Dieses Video beschreibt das Freeze-Cracking, eine Methode, um C. elegans-Gewebe für die Antikörperfärbung zugänglich zu machen, indem die Kutikula aufgebrochen wird.

Protokoll

Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Zhang et al., The C. elegans Intestinal As a Model for Intercellular Lumen Morphogenesis and In Vivo Polarized Membrane Biogenesis at the Single-cell level: Labeling by antibody staining, RNAi Loss-of-function Analysis and Imaging, J. Vis. Exp. (2017).

Antikörperfärbung des C. elegans-Darms

1. Fixierung
   1. Nehmen Sie einen sauberen Objektträger und verwenden Sie Poly-L-Lysin, um einen dünnen Film zu erzeugen, an dem die Würmer haften können. Geben Sie 30 μl 0,1-0,2 % Poly-L-Lysin auf den Objek....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Antikörper-Färbung
poly-L-lysin	Sigma	Nr. P5899
Methanol	Fisher Scientific	Nr. A452-4
Aceton	Fisher Scientific	Nr. A949SK-4
Permount	Fisher Scientific	SP15-100
Objektträger	Fisher Scientific	4448
Mikroskop-Deckgläser (22x22-1)	Fisher Scientific	12-542-B
M9 mittel			Im Labor hergestellt
OP50 Bakterien	CGC