Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.
Methodenartikel
11.3K Aufrufe
⸱
30. April 2023
Quelle: Tauc, H. M., et al. Isolierung von Darmstammzellen aus adulten Drosophila-Mitteldärmen durch FACS, um das Verhalten von Stammzellen während des Alterns zu untersuchen. J. Vis. Exp. (2014).
In diesem Video zeigen wir eine Sektion des adulten Drosophila-Darms und eine Sammlung von Mitteldärmen, die für die Einzelzelldissoziation und FACS geeignet sind, um Darmstammzellen zu isolieren.
Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Tauc et al., Isolating Intestinal Stem Cells from Adult Drosophila Midguts by FACS to Study Stem Cell Behavior During Aging, J. Vis. Exp. (2014).
HINWEIS: Wenn dieses Protokoll zum ersten Mal verwendet wird, um ISCs durch FAC-Sortierung zu isolieren, sind die folgenden Kontrollen zwingend erforderlich, um die FACS-Parameter zunächst richtig einzustellen: Dissoziierte Zellen aus Wildtyp-(z.B. w1118) Drosophila-Mitteldärmen ohne Sytox. Dissoziierte Zellen aus dem Wildtyp-Mitteldarm (z.B. w1118
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Pinzette: Dumont, Inox Biologie #5 | Werkzeuge für die Feinwissenschaft | Nr. 11252-20 | |
| SefarNitex 03-150um/38 (35 μm Nylongewebe) | Sefar | 3A03-0150-102-00 | |
| Falcon 5 ml Reagenzglas aus Polystyrol mit rundem Boden und Schnappkappe für das Zellsieb | Corning | 352235 | |
| Polymax 1040 | Heidolph | Artikel-Nr.: 543-42210-00 | |
| Albumin aus Rinderserum (BSA) | Sigma | A4503-50G | |
| 0,5 % Trypsin-EDTA | Invitrogen | Artikel-Nr.: 15400-054 | Trypsin, das von einem anderen Unternehmen bezogen wird, hat höchstwahrscheinlich eine andere Aktivität und die Dauer des Trypsinverdaus muss entsprechend angepasst werden. |
| SYTOX Blue Dead Cell Stain für die Durchflusszytometrie | Lebenstechnologien | Nr. S34857 | |
| RNAlater-Stabilisierungslösung | Lebenstechnologien | AM7023 | Andere Lösungen, z. B. Trizol, können für die anschließende RNA-Isolierung verwendet werden |
| FACSAria II Zellsortierer | Becton Dickinson | Einschalten eine Stunde vor der Sortierung |
