In diesem Video zeigt Nijole Jasinskiene der angewandten Methode, um transgene Aedes aegypti Mücken, die Überträger für Dengue-Fieber sind zu generieren. Die Techniken für die richtige Vorbereitung Mikroinjektion Nadeln, Entfeuchtungsmittel Embryonen, und die Durchführung der Mikroinjektion werden aufgezeigt.
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Methodenartikel
Mikroinjektion von A. aegypti Embryonen, um transgene Moskitos erhalten
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
In diesem Video zeigt Nijole Jasinskiene der angewandten Methode, um transgene Aedes aegypti Mücken, die Überträger für Dengue-Fieber sind zu generieren. Die Techniken für die richtige Vorbereitung Mikroinjektion Nadeln, Entfeuchtungsmittel Embryonen, und die Durchführung der Mikroinjektion werden aufgezeigt.
Protokoll
Vorbereitung im Vorfeld der Mikroinjektion
- Blut ernähren Mücken: für die Injektion von Montag bis Freitag Feed Weibchen auf der vorigen Donnerstag.
- Bereiten Glasnadeln mit dem Programm 3 oder 2 (siehe Materialien).
- Legen Rohr für die Embryonen Drosophila Kultur Durchstechflasche. Wet Watte in den Boden, mit einem nassen Scheibe Filterpapier für sie.
- Bereiten Kunststoff Deckglas durch Kleben beidseitig Klebeband an einem Ende. Trim Band Deckglas, so dass es am Rande des Deckglases endet.
- Bereiten Öl für Austrocknung (siehe Materialien)
- 150 ml Kunststoffbecher mit einem feuchten Wattebausch in den Boden, mit ....
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare | |
|---|---|---|---|---|
| 1x Injektionslösung | Puffer | 5 mM KCl, 0,1 mM Natriumphosphat, pH 6,8 | ||
| Konstrukt-Plasmid | DNA | 0,5 mg/ml | ||
| Hilfsplasmid | DNA | 0,3 mg/ml | ||
| EndoFree-Plasmid-Kit | Kit | Qiagen | ||
| Millex-GV-Säule | SLGV RO4 NL | Zur DNA-Reinigung. | ||
| Glaszieher | Instrument | Sutter Instrument Co. | Modell P-87 | Heat-815, Pull-10, Vel-10, Time-100. Heat-700, Pull-30, Vel-36, Time-50 |
| Quarz-Zieher | Instrument | Sutter Instrument Co. | Modell P-2000 | Heat-275, Fil-3, Vel-38, Del-250, Pull-141 |
| Injektions-Glasnadeln | Wurden hergestellt, indem Kapillarrohre mit einem Mikropipettenzieher auf eine feine Spitze von 3–8 µm und einen Schaft von ca. 100–300 µm gezogen wurden. Wenn die Nadel neu ist, ist die Spitze verschlossen und bricht gewöhnlich beim ersten oder zweiten Injektionsversuch; alternativ kann die Glasnadelspitze mit einem Brown-Typ Mikropipetten-Fasenwerkzeug (Sutter Instrument) abgeschrägt werden. | |||
| Aedes aegypti | Tier | Männliche und weibliche Mücken zur Gewinnung von Embryonen. | ||
| Drosophila-Kulturgefäß | Für die Eiablage von Mücken. | |||
| Halocarbon-Öl | Reagenz | Öl zur Trocknung: Halocarbon-Öl 700 : Halocarbon-Öl 27 (1:1) | ||
| Pinzette Nr. 5 | Werkzeug | |||
| Feine Pinsel | Kolinsky-Schminken | Nr. 0000 | ||
| Whatman-Papier | Werkzeug | |||
| Microloader | Werkzeug | Eppendorf | 5242 956.003 | |
| Transjektor | Werkzeug | Eppendorf | ||
| Mikroskop | Leica Microsystems | Mit verfahrbarer Probebühne und Mikromanipulator. | ||
| 3MM-Whatman-Papier | ||||
| Doppelseitiges Klebeband |
Nachdrucke und Genehmigungen
