Herstellung einer mikrofluidischen Platte mit bakteriellen Zellen

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Sutlief, A. L., et al. Live-Zell-Analyse der Scherspannung auf Pseudomonas aeruginosa mit einem automatisierten hochdurchsatzfähigen mikrofluidischen System. J. Vis. Exp. (2019).

Dieses Video demonstriert die Herstellung einer mikrofluidischen Platte für Scherspannungsstudien in bakteriellen Kulturen. Nach dem Primieren der Kanäle mit Medien werden Bakterienzellen in den experimentellen Kanal eingeführt und zur Befestigung inkubiert. Restmedien und Kultur werden entfernt, um das System auf spätere Scherspannungsexperimente vorzubereiten.

Protokoll

1. Medienvorbereitung

Bereiten Sie Minimalmedium (MM) mit 0,25 % Glukose vor. Um 1 L MM mit 0,25 % Glukose herzustellen, fügen Sie 200 ml sterile M9-Salzlösung, 2 ml sterile 1 M Magnesiumsulfat (MgSO₄), 100 μL sterile 1 M Calciumchlorid (CaCl₂) und 12,5 ml sterile 20 % (w/v) Glukose in Wasser (dH₂O) mit einem Endvolumen von 1 L hinzu.
Das benötigte Medium in eine sterile Flasche mit sterilen Techniken übertragen. Bereite die benötigte Menge je nach Anzahl der verwendeten Kanäle vor. Typischerweise benötigt jeder Kanal 200 μL zum Priming, 300 μL zum Seeding und 1300 μL für das 24-Stunden-Experiment.
Stellen Sie di....

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Ergebnisse

Abbildung 1: Einzelne Komponenten des mikrofluidischen Systems. Die einzelnen Komponenten sind von links nach rechts aufgelistet: 1. CCD-Kamera, 2. Hochauflösendes Invertiertes Mikroskop mit automatischer Bühne, automatischem Fluoreszenzmod.......