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Alle Verfahren, die Tiermodelle betreffen, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem JoVE veterinärmedizinischen Überprüfungsausschuss überprüft.
1. Experimentelle M. marinum-Infektion mit intraperitonealer Injektion
- Pipettieren Sie einen 5-μL-Tropfen der verdünnten bakteriellen Lösung auf ein Stück Parafilmfilm und ziehen Sie den Tropfen in eine 30-G-Insulinnadel.
- Verwenden Sie 5–8 Monate alte Wildtypfische und rag1−/−hu1999 mutierte Fische für das Experiment. Betäuben erwachsene Zebrafische im Beckenwasser mit 0,02 % 3-Aminobenzoesäure-Ethylester (pH 7,0). Positioniere den Fisch mit der Bauchseite nach oben in einen Schlitz auf feuchtem, geschäumtem Plastik.
HINWEIS: Rag-/-mutierte Fische können keine somatische Rekombination durchlaufen und keine funktionellen T- und B-Zellen produzieren. - Injizieren Sie die Nadel zwischen die Bauchflossen in einem Winkel von etwa 45°. Halte die Nadel nach oben geöffnet, um zu beobachten, dass die gesamte Öffnung im Bauchraum liegt. Langsam die bakterielle Suspension injizieren und die Nadel vorsichtig entfernen.
HINWEIS: Falls der rote Tracer beim Eintreten aus dem Fisch austritt, schließen Sie den Fisch aus dem Experiment aus. - Unmittelbar nach der Injektion werden die Fische in ein Aufholbecken mit frischem Beckenwasser überführt.
- Entnehmen Sie alle 15 Minuten Proben der bakteriellen Suspension auf 7H10-Platten vom verwendeten bakteriellen Aliquot und inkubieren Sie die Bakterien bei 29 °C für 5 Tage und überprüfen Sie die Infektionsdosis, indem Sie die Kolonien auf den Platten zählen.
- Überprüfen Sie regelmäßig das Wohlbefinden der Fische und lassen Sie alle Fische mit Symptomen einer Infektion mit einer Konzentration von über 0,02 % von 3-Aminobenzoesäure-Ethylester (pH 7,0) einschläfern.
HINWEIS: Ungefähr 7 % der erwachsenen Zebrafische, die mit 34 ± 15 CFU infiziert sind, und 30 % der mit 2029 ± 709 CFU infizierten Zebrafische, werden bis 8 Wochen Symptome haben. Zu den Symptomen können abnormales Schwimmen, mangelnde Reaktion auf Berührung, Keuchen, Ödeme oder beobachtbare Auswaschung gehören. - Pflege der Zebrafische nach den gängigen Standards