Ein In-vitro-Assay zur Untersuchung mikrobieller Interaktionen in Kokultur

Zusammenfassung

Quelle: Temkin, M. I. et al. Hochdurchsatz-Kokultur-Assays zur Untersuchung mikrobieller Wechselwirkungen. J. Vis. Exp. (2019)

Dieses Video demonstriert einen in-vitro-Test zur Untersuchung mikrobieller Interaktionen zwischen Corynebacterium propinquum und Staphylococcus in einer Kokultur.

Protokoll

1. Inokulation des Zielorganismus

HINWEIS: Nach der Übernachtung sollten die Kulturen trüb sein. Einige Bakterienkulturen können sich am Boden des Kulturröhrchens zusammenfließen. Wirbeln die Kulturröhren, um Klumpen zu zerstreuen und die Kulturtrübung zu beurteilen.

1. Bereiten Sie die Zielplatte vor, indem Sie jeden Brunnen einer leeren 12-Well-Platte mit 1,8 ml Hirn-Herz-Infusionsbrühe (BHI) und 200 μL der Ziel-Übernachtkultur füllen.
   HINWEIS: Ein Zielorganismus bezeichnet den Organismus, dessen Hemmungsstatus mittels des Kokultur-Interaktionstests bestimmt wird. Für dieses Experiment sind die Zielorganismen Staphylococcus-Arten , die aus menschlichen Nasenspülproben isoliert wurden.
2. Wickle aus und setze einen sterilen Impfstempel in die Zielplatte. Lassen Sie die Kulturen vorsichtig in den Brunnen herumwirbeln und achten Sie darauf, dass die Kulturen die benachbarten Brunnen nicht kreuzkontaminieren.
3. Heben Sie den Impfstempel an und stellen Sie sicher, dass auf jeder Stempelspitze ein Tropfen verdünnter Zielkultur vorhanden ist.
4. Bereiten Sie eine Monokultur-Kontrollplatte vor, indem Sie den Impfstempel auf eine unimpfbare Bioassay-Platte legen und den Stempel vorsichtig wiegen, sodass ein Kulturtropfen jeden Brunnen impft. Sobald der Impfstempel entfernt ist, sollte ein Kulturtropfen in den Brunnen der Bioassay-Platte sichtbar sein.
   1. Wenn Brunnen aufgrund ungleichmäßiger Medienmengen nicht mit dem Impfstempel geimpft sind, wird 3 μL verdünnte Übernachtkultur mit einer Pipette auf die rechte Seite der Brunnen gepflanzt.
5. Inokulieren Sie die Bioassay-Platten wie oben (siehe Schritt 1.4.1), richten Sie den Stempel jedoch so aus, dass die Spitzen mit der rechten Seite der 12-Well-Platte ausgerichtet sind. Stellen Sie sicher, dass der Stempel beim Impfen der Brunnen nicht mit der bestehenden Bakterienkolonie in Kontakt kommt.
6. Entfernen Sie den Stempel vorsichtig und legen Sie ihn zurück in die Zielplatte.
7. Wiederholen Sie die Impfung für jede Bioassayplatte, bis alle Platten geimpft sind.
8. Inkubieren Sie Bioassay-Platten kopfüber bei der entsprechenden Temperatur für 7 Tage.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
12-Well-Zellkulturplatte, steril mit Deckel	Greiner bio-one	665 180
Agar, bakteriologisch	VWR	J637
Hirn-Herz-Infusionsbrühe	Dot Scientific	DSB11000-5000