Methodenartikel

Finger-Stick Blutprobenentnahme Methodik zur Bestimmung der Übung-induzierte Lymphozyten Apoptose

DOI:

10.3791/2595

⸱

24. Februar 2011

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Kinesiology, Recreation, and Sport, Western Kentucky University, 2Department of Health and Human Performance, University of Houston

* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

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Übung ist in der Lage die Apoptose in Immunzellen. Es gibt verschiedene Mess-Beschränkungen, insbesondere in Bezug auf die benötigte Zeit zu isolieren und zu behandeln, eine Blutprobe vor der Bewertung. Nachgewiesene ist eine schnelle und minimal-invasives Verfahren für die Analyse von belastungsinduzierten Lymphozyten Apoptose.

Zusammenfassung

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Übung ist ein physiologischer Reiz der Lage, die Apoptose in Immunzellen. Bis heute haben verschiedene Einschränkungen bei der Messung dieses Phänomens identifiziert worden, insbesondere in Bezug auf die benötigte Zeit zu isolieren und zu behandeln, eine Blutprobe vor der Bewertung des Zelltods. Aus diesem Grund ist es schwierig zu entscheiden, ob gemeldete Anstieg der Immun-Zell-Apoptose, um die tatsächlichen Auswirkungen von Bewegung auf das System kann dazu beigetragen werden, oder sind ein Spiegelbild der Zeit und Verarbeitung notwendig, schließlich erhalten diese Messung. In diesem Artikel zeigen wir eine schnelle und minimal-invasives Verfahren zur Analyse der durch körperliche Belastung ausgelöste Lymphozyten Apoptose. Im Gegensatz zu anderen Techniken wird Vollblut mit einem Antikörper-Panel sofort nach Erhalt einer Probe zugegeben. Nach der Inkubationszeit werden die roten Blutzellen lysiert und die Proben sind bereit, analysiert werden. Die Verwendung eines Finger-Stick Stichprobenverfahren reduziert das Volumen des Blutes benötigt, und minimiert das Unbehagen an Themen.

Protokoll

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1. Finger-Stick Blutprobenentnahme

  1. Sammlung von Vollblut ist in der Regel in Ruhe für eine Baseline-Messung (in der Regel folgende 10-15 min sitzen Rest), während oder unmittelbar nach einer Trainingseinheit, und während der post-Ausübungsfrist genommen (in der Regel 1-3 Stunden nach Beendigung der Übung).
  2. Mit Universal-Vorsichtsmaßnahmen, zuerst zu sterilisieren der Fingerspitze mit 70% igem Alkohol.
  3. Als nächstes Punktion der Website mit Hilfe eines automatisierten Lanzette oder einem ähnlichen Gerät. Obwohl wir eine 30-Gauge-Lanzette nach Thema Komfort nutzen, könnte eine größere Nadel verwendet werden.
  4. Wischen Sie den erste....

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Diskussion

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Ein minimal-invasive Probennahme und der nachfolgenden Analyse wird für die Analyse der frühen und späten Phasen der Übung-induzierte Lymphozyten Apoptose nachgewiesen. Es ist auch möglich, eindeutig ausschließt diejenigen Zellen, die nekrotisch, und nicht apoptotischer sind. Dieses Verfahren überwindet die Nachteile und Unannehmlichkeiten mit invasive Blutentnahme aus der Ellenbeuge Region zu mehreren Zeitpunkten vor assoziiert, während und unmittelbar nach dem Training oder der Sicherung eines Katheters für die Dauer .......

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Offenlegungen

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Keine Interessenskonflikte erklärt.

Danksagungen

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Diese Arbeit wurde von einem New Faculty Grant von der Fakultät Scholarship Council an der Western Kentucky University unterstützt.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
für die DurchflusszytometrieeBioscience00-4222-26
Erythrozyten-LysepuffereBioscience00-4333-57
LanzettengerätAccu Check Soft TouchGroup
KapillarröhrchenHeparinisierte KapillarröhrchenChase Scientific Glass, Inc.501
ZentrifugeGmC LabGilson, Inc.PMS-880
Annexin V-FITC konjugiert BiovisionInc.K201-400-1
CD4-PE KonjugiertesAnti-Human-Präparat, Klon RPA-T4eBioscience12-0049-42
CD8-PE KonjugiertesAnti-Human-Material, Klon OKT8eBioscience12-0086-73
CD19-PE KonjugiertesAnti-Human-Material, Klon HIB19eBioscience12-0199-42
7-AAD-Viabilitäts-FärbelösungeBioscience00-6993-50
CD45RA-APC KonjugiertesAnti-Human-Zytometer, Klon HI100eBioscience17-0458-42
DurchflusszytometerC6Accuri
Bindungspuffer Roche

Referenzen

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  1. Simpson, R. J., Florida-James, G. D., Whyte, G. P., Black, J. R., Ross, J. A., Guy, K. Apoptosis does not contribute to the blood lymphocytopenia observed after intensive and downhill treadmill running in humans. Res. Sports Med. 15, 157-174 (2007).
  2. Steensberg, A., Morrow, J., Toft, A. D., Bruunsgaard, H., Pedersen, B. K.

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Schlagwörter

DurchflusszytometrieErythrozytenlyseAnnexin V F rbungtrainingsinduzierte ApoptoseVollblutanalyseLymphozyten SubfraktionenKapillarr hrchen ProbenahmeInkubation des Antik rper Panels

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