Methodenartikel

Micro-Dissektion Rattenhirns RNA oder Protein Extraction von bestimmten Hirnregion

DOI:

10.3791/269

⸱

30. August 2007

 ,  ,  ,  , 
1Laboratory of Neurodegenerative Diseases, Department of Anatomy, LKS Faculty of Medicine, The University of Hong Kong - HKU

In diesem Artikel

Zusammenfassung

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Micro-Dissektion Rattenhirn in verschiedenen Regionen ist äußerst wichtig für die Untersuchung von verschiedenen neurodegenerativen Erkrankungen. Dieses Video zeigt Mikrodissektion von vier großen Hirnregionen sind Riechkolben, frontalen Cortex, Striatum und Hippocampus in frischen Rattenhirngewebe. Nützliche Tipps für die schnelle Beseitigung von jeweiligen Regionen zu RNA-und Protein-Abbau des Gewebes zu vermeiden gegeben sind.

Zusammenfassung

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Micro-Dissektion Rattenhirn in verschiedenen Regionen ist äußerst wichtig für die Untersuchung von verschiedenen neurodegenerativen Erkrankungen. Dieses Video zeigt Mikrodissektion von vier großen Hirnregionen sind Riechkolben, frontalen Cortex, Striatum und Hippocampus in frischen Rattenhirngewebe. Nützliche Tipps für die schnelle Beseitigung von jeweiligen Regionen zu RNA-und Protein-Abbau des Gewebes zu vermeiden gegeben sind.

Protokoll

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Schritt 1

Sacrifice der Ratte nach festgelegten Protokollen. Entfernen Sie das Gehirn aus dem Schädel und spülen Sie ihn in eiskaltes DEPC behandelt Milli Q-Wasser auf jeder Oberfläche Blut zu entfernen.

Schritt 2

Legen Sie an kalten Metallplatte. Cut das Gehirn bi-Hälfte in rechter und linker Gehirnhälfte.

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Abbildung 1. Das Schneiden Positionen aus dem medialen Blick Ratte Hemisphäre

Schritt 3

Sammeln Sie die Riechkolben gleich nach dem ersten Schnitt. Flash-Freeze der Probe in flüssigem Stickstoff eingefroren und bei -80 ° C.

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Abbildung 2. Riechkolben Dissektion

Schritt 4

Sammeln Sie die frontalen Kortex direkt nach dem zweiten Schnitt mit einem Messer und einem Dumont Nr. 5 Pinzette. Flash-Freeze der Probe in flüssigem Stickstoff eingefroren und bei -80 ° C.

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Abbildung 3. Frontalen Kortex Dissektion

Schritt 5

Sammeln Sie das Striatum (Nucleus caudatus) direkt nach dem dritten Schnitt mit Hilfe von zwei Dumont No.5 Pinzette. Flash-Freeze der Probe in flüssigem Stickstoff eingefroren und bei -80 ° C.

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Abbildung 4. Striatum (Nucleus caudatus) Dissektion

Schritt 6

Zum Sammeln der Hippocampus, legte der ventralen Seite des Gehirns auf und entfernen Sie dann Mittelhirn zum Hippocampus aussetzen. Präparieren Sie die Hippocampus aus der Hirnrinde mit zwei Dumont No.5 Pinzette. Flash-Freeze der Probe in flüssigem Stickstoff eingefroren und bei -80 ° C.

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Abbildung 5. Hippocampus Dissektion

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Diskussion

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Verschiedenen Hirnregionen assoziieren mit verschiedenen neurodegenerativen Erkrankungen. Zum Beispiel beziehen frontalen Kortex und Striatum mit Parkinson-Krankheit, während Hippocampus bezieht sich mit der Alzheimer-Krankheit. Präzise Mikro-Dissektion des Gehirns ermöglicht es uns, die mRNA-und Protein-Veränderungen in erkrankten Region genauer zu erfassen.

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Offenlegungen

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Die Tiere wurden nach dem Protokoll für die Verwendung von tierischem in Forschung Ausschuss für die Verwendung lebender Tiere in Lehre und Forschung (CULATR) in der Universität von Hong Kong zugelassen und nach den National Institutes of Health Richtlinien für die Nutzung von Tieren behandelt.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
MikroskopOlympus Corporation
PräparationswerkzeugeMetallplatte, Pinzette, Klinge usw. Jedes Gerät einzeln in Aluminiumfolie verpackt und acht Stunden lang bei 180 °C erhitzt, um RNasen zu entfernen. Vor der Verwendung eiskalt stellen.

Referenzen

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  1. Palkovits, M. Maps and guide to micro-dissection of the rat brain. , Elsevier. New York. (c.1988).
  2. Swanson, L. W. Brain maps: structure of the rat brain. 3rd revised edition. , Elsevier Academic Press. (2004).

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Schlagwörter

RNA ExtraktionBulbus olfactoriusfrontaler KortexStriatumHippocampusfl ssiger Stickstoff

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