Konservierte Insulin-Signalwege in der Fruchtfliege gefunden Drosophila melanogaster Make dieser Organismus ein potentielles Werkzeug für die Modellierung von Stoffwechselerkrankungen wie Typ II Diabetes. Zu diesem Zweck ist es wichtig, physiologische Tests zu etablieren, um effektiv zu messen systemischen Wirkung von Insulin in peripheren Glukose zur Verfügung in die erwachsene Fliege.
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Methodenartikel
Insulin-Injektion und Hämolymphe Extraction die Insulinsensitivität in Adult Measure Drosophila melanogaster
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Konservierte Nährstoff sensing Mechanismen existieren zwischen Säugetier und Fruchtfliege, wo Peptide ähnlich Säugetieren Insulin und Glukagon bzw. Funktion, um Glukose-Homöostase während der Entwicklung Larvenstadien 1,2 zu halten. Studien zu weitgehend post-mitotischen erwachsenen Fliegen haben Störung des Glukose-Homöostase als Ergebnis des genetischen Ablation von Insulin-like peptide (ILP) produzierenden Zellen (IPCs) 3 enthüllt. So halten erwachsenen Fruchtfliegen großes Versprechen als eine geeignete genetische Modellsystem für Stoffwechselstörungen wie Diabetes Typ II. Zur weiteren Entwicklung der Fruchtfliege System, müssen vergleichbare physiologische Tests verwendet werden, um die Glukosetoleranz und Insulinsensitivität bei Säugetieren messen eingerichtet werden. Zu diesem Zweck haben wir kürzlich ein neues Verfahren zur Messung der oralen Glukosetoleranztest Reaktion in die erwachsene Fliege beschrieben und demonstriert die Bedeutung der Erwachsenenbildung IPCs bei der Aufrechterhaltung Glukosehomöostase 4,5. Hier haben wir ein zuvor beschriebenes Verfahren zur Insulin-Injektion 6 modifiziert und kombiniert es mit einem neuartigen Hämolymphe-Extraktions-Verfahren der peripheren Insulinsensitivität in der erwachsenen Fliegen zu messen. Einzigartig ist, ermöglicht es unseren Protokoll direkte physiologische Messungen der Erwachsenen fliegen die Fähigkeit eines peripheren Glukose-Last auf Insulin-Injektion, eine Methodik, die es möglich, Insulin-Signalkaskade Mutanten und möglichen Interventionen beeinflussen Glukosetoleranz und Insulinsensitivität in die erwachsene Fliege zu charakterisieren, macht entsorgen.
Protokoll
1. Insulin Herstellung der Lösung
- Bereiten Sie frische Rinder-Insulin durch Auflösen von Insulin in PBS, um die Konzentration von 0,01 mg / ml zu erreichen. Sowohl Insulin / PBS und Kontrolle PBS-Lösungen müssen auf dem Eis während der Injektion gehalten werden. Diese Lösungen sollten mit 0,5% (v / v) FD & C Blau nicht vorbereitet werden. 1 Nahrung Färbung.
2. Needle Vorbereitung und Injection Set-up
- Bereiten Kapillare Glasnadeln mit einer Mikropipette puller.The folgenden puller Einstellungen erzeugen Nadeln von ausreichender Qualität für die Injektion: Hitze, 345; Pull, 210; Velocity, 100; Zeit, 200 (100ms). ....
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Diskussion
Die Technik in diesem Bericht beschrieben wird, potentiell nützlich in jeder Studie, die physiologischen Prozesse sich in nachweisbaren Veränderungen in Drosophila Hämolymphe Zusammensetzung untersucht. Durch die Kombination von Injektions-und Hämolymphe Sammlung auf diese Weise ist es möglich, die unmittelbare physiologisch relevanten Auswirkungen einer bestimmten experimentellen Behandlung oder Manipulation zu ermitteln. Der primäre Vorteil dieser "Aderlass"-Technik in Hämolymphe Sammlung im Verglei.......
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Offenlegungen
Keine Interessenskonflikte erklärt.
Danksagungen
Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse aus dem NIA zu YW.CF (AG21068, AG31086) unterstützt.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Name des Reagenzes / Ausrüstung | Firma | Katalog-Nummer | |
| Rinderinsulin | Sigma | I5500 | |
| Infinity Glukose-Reagenz | Thermo Electron Corporation | TR1541 | |
| Manuelle Mikroinjektor | Sutter Instrument | ||
| P-87 Flamming / Brown Mikropipette puller | Sutter Instrument | ||
| Single Barrel Borosilikat Kapillare aus Glas | AM-Systeme | 626000 | |
| FD & C Blau Nr. 1 | McCormick & Company | ||
| 1 ul Mikrokapillare Rohre | Drummond | ||
| Drei-Achs-Handbuch Mikromanipulator und Base | World Precision Instruments |
Referenzen
- Rulifson, E. J., Kim, S. K., Nusse, R. Ablation of insulin-producing neurons in flies: growth and diabetic phenotypes. Science. 296, 1118-1118 (2002).
- Kim, S. K., Rulifson, E. J. Conserved mechanisms of glucose sensing and regulation by Drosophila corpora c....
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Nachdrucke und Genehmigungen
