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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Tieranästhesie und Chirurgie
- Wiegen und betäuben Sie die Maus mit Ihrem von Ihrem örtlichen Tierpflegeausschuss genehmigten Anästhesieschema.
- Führen Sie vor der Operation eine Schwanz- oder Zehenkneifung mit einer Pinzette durch, um eine tiefe Anästhesie zu bestätigen.
- Positionieren Sie die Maus in einem stereotaktischen Gerät und fixieren Sie ihren Kopf.
- Tragen Sie Augensalbe auf beide Augen auf, um sie feucht zu halten. Befolgen Sie die Richtlinien Ihrer örtlichen Tierpflege in Bezug auf prä- und postoperative Analgesie.
- Rasieren Sie die Haare mit einer chirurgischen Haarschneidemaschine. Machen Sie mit einer Schere einen kleinen Schnitt (12-15 mm) in der Mitte des freiliegenden Operationsbereichs. Ziehen Sie die Kopfhaut mit einer Pinzette vorsichtig von der Mittellinie weg.
- Trennen Sie die Haut sanft und entfernen Sie Restgewebe. Reinige den Schädel mit Wasserstoffperoxid-beschichteten Wattestäbchen.
- Bohren Sie zwei kleine Löcher mit einem Radius von 1,0 bis 1,5 mm auf der linken und rechten Seite des Schädels, damit die Aufzeichnungsmikroelektroden unter einem Stereomikroskop in die M2-Regionen eingeführt werden können (Abbildung 1A).
Anmerkung: Stereotaktische Lokalisationen des bilateralen M2: 1,94 mm anterior des Bregmas, 1,0 mm lateral der Mittellinie und 0,8-1,1 mm ventral der Dura.
- Entfernen Sie die Dura Mater vorsichtig mit einer Wolframnadel.
- Ziehen Sie Borosilikat-Mikropipetten aus Glas (Außendurchmesser: 1,0 mm) als Aufzeichnungsmikroelektroden mit einem Widerstand von 1-2 MΩ.
- Führen Sie zwei separate, mit 0,5 M NaCl gefüllte Aufzeichnungsmikroelektroden mit mechanischen Mikromanipulatoren in die Löcher ein (bei 60°, Abbildung 1B).
>2. LFP-Aufzeichnungen in bilateralem M2 von Mäusen
- Senken Sie die linke und rechte Glaselektrode langsam in die entsprechenden Koordinaten von bilateralem M2 ab (Abbildung 1C).
- Testen Sie zur Qualitätskontrolle den Widerstand jeder Elektrode mit dem Differenzverstärker, bevor Sie LFPs erfassen.
- Stellen Sie den Aufnahmeprozess auf 0,1 Hz Hochpass und 1.000 Hz Tiefpass mit 1.000-facher Verstärkung ein.
- Sammeln Sie digitalisierte LFP-Rohdaten von mindestens 60 s spontanen Aktivitäten in einem stabilen Zustand, wobei Mäuse unter Narkose gleichmäßig mit einer Atemfrequenz von 2 Atemzügen pro Sekunde atmen.
- Heben Sie nach der Aufnahme die Elektroden langsam aus dem Gehirn heraus und euthanasieren Sie die Mäuse dann durch schnelle Gebärmutterhalsdislokation.
- Speichern Sie die Daten und analysieren Sie sie offline.
