Generierung eines Glioblastom-Rattenmodells

Zusammenfassung

Quelle: Bolcaen, J., et. al., PET- und MRT-gesteuerte Bestrahlung eines Glioblastom-Rattenmodells mit einem Mikrobestrahlungsgerät. J. Vis. Exp. (2017)

Dieses Video zeigt das Verfahren zur Etablierung eines Glioblastom-Rattenmodells durch stereotaktische Injektion von Hirntumor-verursachenden Glioblastomzellen in den präfrontalen Kortex.

Protokoll

Alle Verfahren, bei denen Tiermodelle zum Einsatz kommen, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss der JoVE überprüft.

1. F98 GB Rattenzellmodell

1. Die F98 GB-Zellen, die aus ATCC gewonnen wurden, werden in Monolayern mit dem modifizierten Eagle Medium von Dulbecco, 10 % Kälberserum, 1 % Penicillin, 1 % Streptomycin, 1 % L-Glutamin und 0,1 % Amphotericin b kultiviert und in einen CO₂-Inkubator (5 % CO₂ und 37 °C) gegeben.
2. Die Gliomzellen im Gehirn von weiblichen Fischer F344 Ratten (Körpergewicht 170 g) impfen.
   1. Verwenden Sie sterile Instrumente und tragen Sie immer sterile Handschuhe.
   2. Betäuben Sie die Ratten, indem Sie eine Mischung aus 74 mg/kg Ketamin und 11 mg/kg Xylazin intraperitoneal (IP) mit einer Insulinspritze (1 ml, 29 G) injizieren. Bestätigen Sie die Anästhesthesie durch das Fehlen einer Reaktion auf den Rückzugsreflex der Extremität. Immobilisieren Sie die Ratten in einem stereotaktischen Gerät mit Fixierungspunkten für Nase und Ohren. Geben Sie ein Carbomer-Augengel, um Trockenheit der Augen während der Narkose zu verhindern.
   3. Rasieren Sie die Ratte von Augenhöhe bis zum hinteren Schädel und desinfizieren Sie die Haut mit Povidon-Jod.
   4. Legen Sie den Schädel durch einen 2 cm langen Schnitt in der Mittellinie der Kopfhaut frei und machen Sie ein 1 mm Loch (Diamantbohrer) 2 mm posterior und 2,5 mm lateral des Bregmas in der rechten vorderen Hemisphäre.
   5. Führen Sie eine stereotaktisch geführte Insulinnadel (29 G) ein und injizieren Sie 5 μl Zellsuspension (20.000 F98 GB-Zellen) 3 mm tief mit einer Mikrospritzenpumpensteuerung (Einstellungen: injizieren (I50), Rate 1 nL/s (001 SDN)).
   6. Ziehen Sie die Spritze langsam zurück und verschließen Sie den Schnitt mit Knochenwachs. Vernähen Sie die Haut und desinfizieren Sie sie mit Povidon-Jod.
   7. Stabilisieren Sie die Körpertemperatur des Tieres nach der Operation mit einer roten Lampe. Beobachte das Erwachen der Ratte, bis sie wieder genügend Bewusstsein erlangt hat, um das Brustbein aufrecht zu erhalten. Geben Sie das Tier nicht an andere Tiere zurück, bis es vollständig genesen ist. Halten Sie alle Tiere unter kontrollierten Bedingungen (12 Stunden normale Hell-Dunkel-Zyklen, 20-24 °C und 40-70 % relative Luftfeuchtigkeit) mit Futter und Wasser ad libitum. Stellen Sie sicher, dass Sie die Tiere genau beobachten, indem Sie ihr Körpergewicht, ihre Nahrung, ihre Wasseraufnahme sowie ihre Aktivität und ihr normales Verhalten überwachen. Verwenden Sie eine tödliche Dosis Pentobarbital-Natrium, um die Tiere einzuschläfern (160 mg/kg), wenn eine Abnahme des Körpergewichts um 20% beobachtet wird oder wenn sich das normale Verhalten stark verschlechtert (, z. B. , mangelnde Pflege).

Materialien

https://www.aesculapusa.com/products/wound-closure/hemostatic-bone-wax

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
GB RAT model
F98 Glioblastom-Zelllinie	ATCC<
Fischer F344/Ico crl Rats	Charles River	N/A	http://www.criver.com/products-services/basic-research/find-a-model/fischer-344-rat
Micropump system	World Precision Instruments	UMP3	Micro 4: https://www.wpiinc.com/products/top-products/make-selection-ump3-ultramicropump/#tabs-1
Stereotaktischer Rahmen	Kopf	902<
Diamond drill	Velleman	VTHD02	https://www.velleman.eu/products/view/?id=370450
Bone wax	Aesculap	1029754<
Insulinspritze Microfine	Beckton-Dickinson	320924<
InfraPhil IR lamp	Philips	HP3616/01
Ethilon	Ethicon	662G/662H	FS-2, 4-0, 3/8, 19 mm

td style='width:113pt;'>CRL-2397<td style='width:127pt;'> td style='width:127pt;'>Model 902 Dual Small Animal Stereotaxic frametd style='width:127pt;'>td style='width:127pt;'>1 mL, 29G