Mikrofluidik-basiertes Mikroinjektrodensystem für die kombinierte Wirkstoffinfusion und Elektrophysiologie

Zusammenfassung

Quelle: Vanegas, M. I., et al. Mikroinjektrodensystem für kombinierte Wirkstoffinfusion und Elektrophysiologie. J. Vis. Exp. (2019)

Dieses Video zeigt ein mikroelektrodenbasiertes mikrofluidisches Gerät, das eine Arzneimittellösung durch ein Kapillarrohr abgibt, wobei eine ölbasierte Markerlösung für eine präzise Volumenverfolgung verwendet wird und eine gleichzeitige neuronale Aufzeichnung und Wirkstoffinfusion ermöglicht wird.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

1. Aufbau der Mikroinjektrode für die Stimulation und Aufzeichnung (Abbildung 1a)

1. Messen Sie die Länge der Kanüle und der Sonde (in diesem Beispiel eines Nanosensors). Die Sonde muss länger als die Kanüle sein, und zwar um die Länge, die sie aus der Kanülenspitze herausragen soll (je nach Sondenausführung), plus ca. 2 cm.
2. Laden Sie die Sonde unter einer Lupe oder einem Mikroskop (~10-fache Vergrößerung) in die Kanüle; wenn möglich, ist ein Backloading vorzuziehen, um die Spitze der Sonde z....

Ergebnisse

Abbildung 1: Schritt-für-Schritt-Herstellung von Mikroinjekrode.) Konfiguration für den Einsatz unabhängig vom mikrofluidischen System. Kanüle und Sonde werden vermessen, um zu bestätigen, dass die Spitze der Sonde in der gew.......

Materialien

https://products.labsmith.com/interconnect-tee#.XO8z8dNKh24

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Manuelle Ventile	LabSmith	Manual 3-Port Selector Valve (MV201-C360)	https://products.labsmith.com/mv201-manual-3-port-selector-valve/#.XNYEC9NKh26
Kanülen	Vita Needle Company	304 Edelstahlrohr, Außendurchmesser 228μm, Innendurchmesser 165μm	https://www.vitaneedle.com/assets/files/Vita_Needle_Master_Tubing_Gauge_Chart.pdf
Spaltstein	Molex	Spaltstein 1" x 1" (Teile-Nr. 1068680064)	Es wird dringend empfohlen, die Methode zum Spalten von Kapillarschläuchen zu befolgen: https://www.cmscientific.com/info_sheets/cleaving_procedure.pdf
Clorhexidindiacetat	Walmart	Nolvasan Lösungsdesinfektionsmittel (AAP311)	Wird für die Spülung von Mikrofluidikkreisen verwendet, gelöst bei 20 g/L
Kundenspezifischer Adapter Kundenspezifischer			Anbieter-Kundenspezifischer Adapter zum Verbinden der Mikroinjektrode mit dem hydraulischen Mikroantrieb
Treiber	LabSmith	T7 TORX Treiber für die Montage von Steckbrettschrauben (LS-TORX Driver)	https://products.labsmith.com/ls-torx-driver/#.XO8sndNKh25
Epoxidkleber	LabSmith	Zweikomponentiger hochfester Epoxidkleber (LS-EPOXY) für Metall- und Kunststoffverklebungen	https://products.labsmith.com/ls-epoxy-12ml-epoxy-adhesive/#.XO8t89NKh24
Ferrule	LabSmith	Einteiliger Anschluss (C360-100) zum Anschluss von Kapillaren, Durchgangsloch für 360μm Außendurchmesser Kapillare	https://products.labsmith.com/one-piece-fitting#.XNYEaNNKh24
Aderendhülsenstecker	LabSmith	Einteiliger Stecker (C360-101) zur Verwendung in jedem -C360 Port	https://products.labsmith.com/one-piece-fitting-plug/#.XNYFl9NKh24
Aderendhülsenschlüssel	LabSmith	1/8" Inbusschlüssel zur Montage von einteiligen Verschraubungen und Steckern (LS-HEX 1/8" Inbusschlüssel)
Gasdichte Spritze	Hamilton Company	500μL gasdichte Spritze Modell 1750 (81220) und 1mL gasdichte Spritze Modell 1001 (81320)	https://www.hamiltoncompany.com/laboratory-products/syringes/81220#top
Goldstifte	Aim-Cambridge	Männlich vergoldet Crimp-On-Steckerstift (40-9856M)	https://www.masterelectronics.com/aim-cambridge-cinch-connectivity-solutions/409856m-10109145.html
Fusselfreie Tücher	Kimberly Clark	Kimtech Science Kimwipes Delicate Task	Fusselfreie Tücher, die zur Identifizierung von Lecks im System verwendet werden
Flüssige Lebensmittelfarbe	McCormick & Co.	Wasserbasierte, schwarze flüssige Lebensmittelfarbe (52100581873)<	a href='https://www.mccormick.com/spices-and-flavors/extracts-and-food-colors/food-colors/black-food-color'>https://www.mccormick.com/spices-and-flavors/extracts-and-food-colors/food-colors/black-food-color
Öl mit niedriger Viskosität	Clearco Products Co.	Reines Silikonöl Octamethyltrisiloxan mit einer Viskosität von 1cSt bei 25°C (PSF-1cSt)	http://www.clearcoproducts.com/pure-silicone-super-low-viscosity.html
Luer-Lock-Anschluss	LabSmith	Luer-Lock-Adapter (C360-300), weiblicher Anschluss zum Anschluss einer Luer-Lock-Spritze an einen	360μm Kapillarschlauchhttps://products.labsmith.com/luer-lock-adapter-assembly#.XO81MtNKh24
Mikrobohrer	Grainger	Mikrobohrer, 0,23 mm (414H85)	https://www.grainger.com/category/machining/drilling-and-holemaking/drill-bits/machining-drill-bits/micro-drill-bits
Mikroelektrode	FHC	Metall-Mikroelektrode, Wolfram mit Epoxidisolierung	https://www.fh-co.com/category/metal-microelectrodes
Ölhydraulischer Mikromanipulator	Narishige Group	Ölhydraulischer Mikromanipulator mit angebrachtem Führungsrohr (MO-96)	http://products.narishige-group.com/group1/MO-96/chronic/english.html
Polymicro Kapillarschlauch	Molex	Polymicro flexibler Kapillarschlauch aus Quarzglas (TSP150375), Außendurchmesser 375μm, Innendurchmesser 150μm	https://www.molex.com/webdocs/datasheets/pdf/en-us/1068150024_CAPILLARY_TUBING.pdf
Programmierbare Spritzenpumpe	Harvard Apparatus	Standard Infuse/Withdraw Pump, programmierbar (70-2213)
Ruler	Empire	Edelstahl 6" Steifes Lineal (27303)	http://www.empirelevel.com/rulers.php
Schraubensatz	LabSmith	Ventilbefestigungsschraubensatz (LS-SCREWS .25), gewindefurchende Schrauben (2-28 x 1/4") zur Befestigung von Ventilen an Steckbrett	https://products.labsmith.com/ls-screws-25#.XO8widNKh24
Standard-Steckbrett	LabSmith	4" x 6" Plattform (LS600), mit 0,25" Lochabstand für die Montage des Flüssigkeitskreislaufs	https://products.labsmith.com/standard-breadboard/#.XO8xDdNKh24
Sterile Kochsalzlösung (Natriumchlorid) 0,9%.	Baxter	0,9% Natriumchlorid steril	sterile intravenöse Infusion
Sterile Spritzenvorsatzfilter	Millipore	Sigma MilliporeSigma™ Millex-GP™ sterile Spritzenvorsatzfilter mit PES-Membran (SLGPM33RS)
Stoelting manuelle Mikrospritzenpumpe	Stoelting Company	Manuelle Infusions-/Entnahmepumpe (51222)	https://www.stoeltingco.com/manual-infusion-withdrawal-pump-2649.html
T-Junction	LabSmith	Verbindungs-T-Stück (C360-203) zum Kombinieren von Strömungsströmen, zur Verwendung mit Kapillarschläuchen mit 360 μm Außendurchmesser

https://products.labsmith.com/ls-hex-1-8-hex-wrench/#.XO8sqtNKh24 https://www.harvardapparatus.com/standard-infuse-withdraw-pump-11-pico-plus-elite-programmable-syringe-pump.html https://www.fishersci.com/shop/products/emd-millipore-millex-sterile-syringe-filters-pes-membrane-green-4/slgpm33rs