Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
1. Bereiten Sie die Ratte
vor
- Drehen Sie den Sauerstoff auf 1 l/min und stellen Sie die Isofluran-Anästhesie auf 5% ein. Stellen Sie sicher, dass die Gasanästhesie in die Induktionskammer fließt, indem Sie alle Verbindungsschläuche und Hahnausrichtungen überprüfen.
- Legen Sie die Ratte für ca. 3 Minuten in die Gasanästhesie-Induktionskammer, bis die Ratte nicht mehr ansprechbar ist.
- Sorgen Sie für eine ausreichende Anästhesietiefe, indem Sie den Zeh einklemmen. Nach dem Zehenkneifen sollte es keine Bewegung im Fuß oder Bein geben.
- Reduzieren Sie die Isofluran-Anästhesie auf 2% für die Aufrechterhaltung und stellen Sie den Absperrhahn so ein, dass die Anästhesie zur Anästhesiemaske fließt.
- Legen Sie die Nase der Ratte in die Narkosemaske und stellen Sie die Ratte so ein, dass sie auf der Seite liegt.
- Identifizieren Sie die seitliche Schwanzvene.
HINWEIS: Die seitlichen Schwanzvenen liegen bei etwa 10 und 2 Uhr, wobei die dorsale Spitze des Schwanzes bei 12 Uhr liegt. Wenn die Ratte auf der Seite liegt, sollte die seitliche Schwanzvene nach oben zeigen. - Wischen Sie den Injektionsbereich mit dem Alkoholvorbereitungskissen ab. Die Injektionsstelle erstreckt sich zu zwei Dritteln über die Länge des Schwanzes.
2. Injizieren Sie den vector
- Halten Sie den Schwanz mit einem Finger direkt über der seitlichen Schwanzvene fest über dem Injektionsbereich; dies erweitert die Vene.
- Richten Sie die Nadel mit der Fase nach oben in die gleiche Richtung an der sichtbaren Schwanzvene aus.
- Durchstechen Sie die Haut über der Schwanzvene und achten Sie dabei sehr darauf, dass die andere Hand den Schwanz nicht hält und auf die Schwanzvene drückt.
- Lassen Sie den Druck von der Schwanzvene ab, um einen normalen Blutfluss zu ermöglichen.
- Schiebe die Nadel in die Vene. Um sicherzustellen, dass die Nadel die Schwanzvene durchstochen hat, ziehen Sie den Kolben leicht zurück. Befindet sich die Nadel in der Vene, fließt Blut in die Nadel.
- Positionieren Sie die Nadel nach Bedarf neu. Um die Nadel zu stabilisieren, bewegen Sie dann die Hand über die Injektionsstelle unter die Injektionsstelle und halten Sie das Ende der Spritze gegen den Schwanz.
- Injizieren Sie den Vektor langsam in den Schwanz (ca. 20 μl/s).
HINWEIS: Die Vene kann ihre Farbe verlieren, wenn der Vektor durch sie fließt. Anzeichen dafür, dass die Lösung außerhalb der Vene injiziert wurde, sind Blubben, Blanchieren der Haut oder Widerstand bei der Injektion des Vektors. Mit etwas Übung kann die extravaskuläre Exposition minimiert werden. - Nachdem der Vektor verabreicht wurde, entfernen Sie die Nadel von der Ratte und drücken Sie ein Mullkissen gegen die Injektionsstelle, um die Blutung für 30 - 60 Sekunden zu stillen.
3. Reinigung:
- Schalten Sie die Isofluran-Anästhesie und den Sauerstoff aus. Beobachte die Ratte, bis sie wieder zu Bewusstsein kommt, und bringe sie dann in ihren Käfig zurück.