Dieses Protokoll stellt eine Erntetechnik für coccygeal Rinder Bandscheiben für Orgel Kultur In-vitro- Orgel Kultur.
Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.
Methodenartikel
Vorbereitung von Intact Bovine Rute Bandscheiben für Orgel Kultur
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die Bandscheibe (IVD) ist das Gelenk der Wirbelsäule verbinden Wirbel zu Wirbel. Es funktioniert nach Belastung der Wirbelsäule übertragen und bieten die Flexibilität, um die Wirbelsäule. Es komponiert aus drei Abteilungen: der innerste Kern pulposus (NP) umfasst von der Faserring (AF), und zwei knorpeligen Endplatten Anschluss der NP und AF auf die Wirbelkörper auf beiden Seiten. Bandscheibenbedingte Schmerzen möglicherweise durch degenerative Bandscheibenleiden (DDD) und Bandscheibenvorfälle verursacht hat, als ein großes Problem in unserer modernen Gesellschaft identifiziert worden. Zur Untersuchung möglicher Mechanismen der IVD-Degeneration, sind in vitro Orgelkultur Systeme mit Live-CD-Zellen sehr ansprechend. Die in vitro-Kultur von intakten Rinder coccygeal IVD hat einen entsprechenden Modell, das die Untersuchung der mechanisch-biologischen Aspekten in einer gut kontrollierten physiologischen und mechanischen Umgebung ermöglicht fortgeschritten. Bovine Schwanz IVD erhalten relativ leicht in höhere Zahlen Seien Sie eind sind sehr ähnlich wie das menschliche Lendenwirbelsäule IVD in Bezug auf die Zelldichte, Zell-Population und Dimensionen. Allerdings gelang früheren Rinder caudal IVD Erntetechniken Beibehaltung knorpeligen und knöchernen Endplatten Endplatten nach 1-2 Tagen der Kultur, da die Ernährung Wege waren offensichtlich durch geronnenes Blut blockiert. IVD sind die größten avaskuläre Organe, so sind die Nährstoffe zu den Zellen in der NP allein abhängig von der Diffusion über die Kapillare Knospen aus der benachbarten Wirbelkörper. Präsenz von Knochen Schutt und geronnenes Blut auf der Endplatte Oberflächen können Nährstoffdiffusion in die Mitte der Scheibe und des Kompromisses die Lebensfähigkeit der Zellen zu verhindern. Unsere Gruppe wurde eine relativ schnelle Protokoll-out "knacken" des IVD vom Schwanz mit einem geringen Risiko für Verunreinigungen. Wir sind in der Lage, den frisch geschnittenen knöchernen Endplatte Oberflächen mit Hilfe eines chirurgischen Jet-Lavage System, das die Bildung von Blutgerinnseln und Schneidabfall entfernt und sehr effizient öffnet die Ernährung Diffusionsweg permeabilisierenum die Mitte des IVD. Die Anwesenheit des Wachstums Platten auf beiden Seiten der Wirbelknochen muss vermieden werden und vor der Kultur entfernt werden. In diesem Video stellen wir die entscheidenden Schritte bei der Vorbereitung und Demonstration der Schlüssel zu einer erfolgreichen Orgelkultur Beibehaltung der hohen Lebensfähigkeit der Zellen für 14 Tage unter freiem Schwellungen Kultur. Die Kultur der Zeit könnte erweitert werden, wenn geeignete mechanische Umwelt durch mechanische Belastung Bioreaktor aufrechterhalten werden kann. Das kann die Methode auf andere Tierarten wie Schweine, Schafe und leporine caudal-und Lendenwirbelsäule IVD Isolation erweitert werden.
Protokoll
1. Bandscheiben-Harvesting
- Ganze Länge Rinder Schwanz ist von einem örtlichen Schlachthof erhalten, wenn möglich, ohne Haut, da die Anwesenheit der Haut erhöht sich die Wahrscheinlichkeit einer Kontamination (Abb. 2).
- Bereiten Sie große Schneidebrett und bereiten sterile Arbeitsplatz und Instrumente auf einem Schneidebrett (Abb. 2).
- Bereiten Sie unter der sterilen Laminarströmungshaube steriler Gaze angefeuchtet mit 0,9% Natriumchlorid enthalten, 55mm Natriumcitrat und in jedes Well der 6-Well-Platte.
- Bereiten Sie eine Schüssel und verdünnt 1:100 Betadine Lösung mit Leitungswasser.
- Tauchen Sie den gesamten Rinder-tai....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Diskussion
Der erste Schritt für eine erfolgreiche Orgelkultur ist, um sicherzustellen, dass die Explantation sollte nicht kontaminiert werden. Die Rute sollte gehäutet, bevor Sie mit dem Verfahren beginnen. Jedes Tier Haare in ein steriles Labor gebracht werden konnte in Bezug auf die Kontamination problematisch. Die Rinder Schwanz sollte idealerweise so frisch wie möglich (dies betrifft zunächst die Lebensfähigkeit der Zellen). Darüber hinaus ist die betadine Waschschritt empfohlen, das Risiko einer Kontamination weiter zu verri.......
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Offenlegungen
Wir haben nichts zu offenbaren.
Danksagungen
Dieses Projekt wurde vom Schweizerischen Nationalfonds (SNF # 310030-127586/1) unterstützt.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Name des Reagenzes | Firma | Katalog-Nummer | Kommentare (optional) |
| Frischem Rind Bandscheibengewebe aus Rinder-Tails aus den örtlichen Schlachthof (im Idealfall innerhalb weniger Stunden post mortem und ohne Haut). | |||
| Pulsavac Plus AC-System | Zimmer inkl.., Schweiz | 00-5150-486-01 | Beste Leistung mit dem Hip-Sprühkopf und mit AC-Netzteil (das mit der 8 AA Akkus hat auch, ist aber weniger komfortabel) |
| High Capacity Fan Spray w / Splash Shield, 12,7 cm Länge | Zimmer inkl.., Schweiz | 00-5150-175-00 | Es gibt mehrere Sprühköpfe zur Verfügung, testeten wir diese erfolgreich |
| Skalpellklingen Nr. 22 und Nr. 10 | Swann-Mortauf, England | Nr. 10: 0201 Nr. 22: 0208 | |
| Scalpel Messerhalter # 3 und # 4 | Hausmann, Deutschland | # 3: 06.103.00 # 4: 06.104.00 | |
| Lutz industriellen Klinge | Lutz, Deutschland | 1022.0884 | |
| Phosphat-gepufferte Saline (PBS) | Invitrogen, Schweiz | 10010-023 | |
| Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) | Gibco, Schweiz | 11960-044 | |
| Ringer-Laktat-Lösung (ohne Glukose) | Bichsel, Schweiz | 133 0002 | |
| 6-well Multi-Well-Platte | TPP, Schweiz | 92006 | |
| Betadine Lösung | Mundipharma, Schweiz | 10055025 | |
| Chirurgische Hautmarker | Porex Surgical, Schweiz | 9560 | |
| Große Schneidebrett | Jede Marke ist möglich |
Referenzen
- Lee, C. R., Iatridis, J. C., Poveda, L., Alini, M. In vitro organ culture of the bovine intervertebral disc: effects of vertebral endplate and potential for mechanobiology studies. Spine (Phila Pa 1976). 31, 515-522 (1976).
- Chan, S. C. W., Gantenbein-Ritter, B., Leung, V. Y., Chan, D.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Nachdrucke und Genehmigungen
