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Wir haben 3D-Kokultur-Modelle entwickelt, die wir als MAME (m ammary ein rchitecture und m icroenvironment ngineering e), und ihnen werden für Live-Cell-Imaging in Echtzeit von Zell: Zell-Interaktionen. Unser oberstes Ziel war es, Modelle, die die Architektur des präinvasive Brustläsionen ihre Progression zu einem invasiven Phänotyp zu studieren rekapitulieren zu entwickeln. Insbesondere haben wir Modelle der Interaktion zwischen den prä-maligne Zellen Brustepithelzellen Varianten und anderen Zelltypen der Tumor-Mikroumgebung, die in verstärkt oder verringert wird das Fortschreiten der präinvasive Brustepithelzellen invasive duktale Karzinome verwickelt sind zu analysieren. Andere Zelltypen, die bisher untersucht sind Myoepithelzellen, Fibroblasten, Makrophagen und Blut und Lymphe mikrovaskuläre Endothelzellen. Zusätzlich zu den MAME Modelle, die zur zellulären Wechselwirkungen innerhalb der Brust während rekapitulieren werdenTumorprogression, haben wir vergleichbare Modelle für die Progression von Prostatakrebs entwickelt.
Hier veranschaulichen wir die Verfahren für die Festlegung der 3D-Kokulturen zusammen mit der Verwendung von lebenden Zellen und einem funktionellen Proteolyse-Assay, um den Übergang von Co-Kulturen von Brust-duktales Carcinoma in situ (DCIS) und Fibroblasten zu einer invasiven Phänotyp im Laufe der Zeit folgen, in in diesem Fall mehr als 23 Tage in Kultur. Die Co-Kulturen MAME bestehen aus mehreren Schichten. Fibroblasten sind in der unteren Schicht von Kollagen Typ I eingebettet. Auf daß eine Schicht aus rekonstituierte Basalmembran (rBM), auf dem DCIS Zellen geimpft worden. Eine abschließende Deckschicht aus 2% rBM enthalten ist und aufgefüllt mit jedem Wechsel der Medien. Um das Bild Proteolyse mit dem Fortschreiten zu einem invasiven Phänotyp assoziiert, verwenden wir Farbstoff-abgeschreckten (DQ) fluoreszierenden Matrix Proteine (DQ-Kollagen I mit der Schicht aus Kollagen I und Kollagen IV-DQ mit der mittleren Schicht der rB vermischteM) und beobachten lebende Kulturen mit Hilfe der konfokalen Mikroskopie. Optische Schnitte werden erfasst, verarbeitet und rekonstruiert in 3D mit Endgeschwindigkeit, Visualisierungs-Software. Im Laufe der 23 Tage in MAME Kokulturen, vermehren sich die Zellen DCIS und verbinden sich zu großen invasive Strukturen. Fibroblasten wandern und in diese Strukturen eingebunden invasive geworden. Fluoreszierende proteolytische Fragmente der Kollagene in Verbindung mit der Oberfläche des DCIS Strukturen gefunden, intrazellulär, und auch in der umgebenden Matrix dispergiert. Wirkstoffe, die proteolytische, Chemokin / Cytokin und Kinasen oder Veränderungen in der zellulären Zusammensetzung des Co-Kulturen der Invasivität reduzieren kann, was darauf hindeutet, dass MAME Modelle vorklinischen Screens für neue therapeutische Ansätze können verwendet werden.