Hier zeigen wir unser Protokoll zur Isolierung von basalen und submuköse Drüsen Gangzellen von Maus Luftröhre. Darüber hinaus zeigt das Verfahren zum Einspritzen von Stammzellen in die dorsale Maus Fettkörper ein erstellen In vivo Modell der submukösen Drüsen Regeneration.
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Methodenartikel
Isolierung von Basalzellen und Submuköse Gland Duct Zellen aus Maus Trachea
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die große Atemwege sind in direktem Kontakt mit der Umwelt und daher anfälliger für Verletzungen von Toxinen und Krankheitserregern, dass wir den Atem in 1. Die großen Atemwege erfordern daher eine effiziente Reparatur-Mechanismus, um unseren Körper zu schützen. Diese Reparatur-Prozess tritt aus Stammzellen in den Atemwegen und Isolierung dieser Stammzellen aus den Atemwegen ist wichtig für das Verständnis der Mechanismen der Reparatur und Regeneration. Es ist auch für das Verständnis abnorme Reparatur, die Atemwegserkrankungen 2 führen kann wichtig. Das Ziel dieses Verfahrens ist es, ein neues Stammzellpopulation von den Maus trachealen submucosalem Drüsenkanäle isolieren und diese Zellen in vitro und in vivo Modellsystem zu platzieren, um die Mechanismen der Reparatur und Regeneration der submucosalen Drüsen 3 zu identifizieren. Diese Produktion zeigt Methoden, die zur Isolierung und Test der Kanal-und basalen Stammzellen aus dem großen Atemwege 3 werden kann. Dies wird uns erlaubenzu Erkrankungen der Atemwege, wie zystischer Fibrose, Asthma und chronisch obstruktiver Lungenerkrankung studieren. Derzeit gibt es keine Verfahren zur Isolierung von submucosalem Drüse Gangzellen und keine in vivo-Modellen, um die Regeneration des submucosalen Drüsen studieren.
Protokoll
Outline of Steps
Ein. Dissection der Luftröhre
2. Reinigung Luftröhre und Schneiden
3. Enzymverdau und Verarbeitung zu Einzelzellsuspension
4. Färbung für FACS und Sortierung
5. Verarbeitung sortierten Zellen in vivo und in vitro-Modelle
Ein. Dissektion der Trachea
- Euthanize die Maus mit einer intraperitonealen Injektion von 0,1 cc von Pentobarbital mg/0.2.
- Schneiden Sie die Bauchdecke, und bewegen Sie den Darm zur Seite, um die Bauchaorta aussetzen und dann se....
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Diskussion
Diese Technik zum Kanal und basalen Zellen aus den Atemwegen zu isolieren, ist für ein besseres Verständnis der Atemwege Reparatur und Regeneration und Atemwegserkrankungen wichtig. Die hier beschriebenen Techniken sind ein paar wichtige Schritte. Die erste ist die optimierte enzymatische Verdauung Zeitraum. Die zweite ist die Schaffung eines einheitlichen Zellsuspension durch serielle Passage mit progressiv höhere Gage Nadeln Zelle Scherung zu verhindern, sondern brechen Zellklumpen. Die dritte ist die FACS-Analyse, un.......
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Offenlegungen
Keine Interessenskonflikte erklärt.
Danksagungen
Wir möchten die Grundzüge der Stem Cell Research Center FACS anerkennen und vor allem danke Jessica Scholes und Felicia Codrea für ihre Hilfe bei der Zellsortierung. Die Arbeit wurde durch CIRM RN2-00904-1, K08 HL074229, American Thoracic Society / COPD Foundation ATS-06-065, Das Concern Foundation, The UCLA Jonsson Comprehensive Cancer Center Thoracic Oncology Program / Lung Cancer SPORE, der University of California Cancer finanziert Forschung Coordinating Committee und das Gwynne Hazen Kirsche Memorial Laboratories (BG).
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Name des Reagenzes | Firma | Katalognummer | |
| Vollmedium 10: DMEM-F-12, 50/50, 1X) | Mediatech | 15-090-CV | |
| Hepes (15 mM) | Invitrogen | 15630 | |
| Natriumbicarbonat (3,6 mm oder 0,03%) | Invitrogen | 25080 | |
| L-Glutamin (4 mM) | Mediatech | 25-005-Cl | |
| Penicillin (100 E / ml) | Mediatech | 30-001-CI | |
| Streptomycin (100 ug / m) | Mediatech | 30-001-CI | |
| Amphotericin B (0,25 g / ml) | Lonza | 17-836R | |
| InSulin (10 ug / ml) | Sigma | I6634 | |
| Transferrin (5 ug / ml) | Sigma | T1147 | |
| Cholera-Toxin (0,1 ug / ml) | Sigma | C8052 | |
| Epidermal Growth Factor (25 ng / ml) | BD | 354001 | |
| Rinderhypophysenextrakt (30 ug / ml) | Invitrogen | 13028-014 | |
| Fötalem Rinderserum (5%) | Fischer | SH3008803HI | |
| Retinsäure (0,05 pM) | Sigma | R2625 | |
| Growth Factor Reduced Matrigel | BD | 354230 |
Tabelle 1. Füllen Media-Komponenten.
| Name des Reagenzes | Firma | Katalog-Nummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Pronase | Roche | 10165921001 | Gebrauchte bei 0,15%: -O / n bei 4 ° C Verdauung insgesamt trachealen Zellen (ALI Kultur) zu isolieren -4 Hr Verdauung 4 ° C bis zu isolieren SMG |
| Dispase | BD Biosciences | 354235 | Gebrauchte bei 16 Einheiten: 30 min bei RT |
| DNase I | Sigma | DN25 | Verwendet bei 0,5 mg / ml: 20-30 min bei RT |
Tabelle 2. Enzyme für die enzymatische Verdauung der Luftröhre eingesetzt.
Referenzen
- Bartlett, J. A., Fischer, A. J., McCray, P. B. Innate immune functions of the airway epithelium. Contrib. Microbiol. 15, 147-163 (2008).
- Finkbeiner, W. E. Physiology and pathology of tracheobronchial glands. Respir. Physiol. 118, 77-83 (1999).
- Hegab, A. E.
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Nachdrucke und Genehmigungen
