Projektierung eines zweischichtigen Hydrogel ASC Differenzierungskontrolle

Zusammenfassung

Dieses Protokoll konzentriert sich auf die Nutzung der inhärenten Fähigkeit von Stammzellen zu Stichwort von der sie umgebenden extrazellulären Matrix induziert nehmen und in mehrere Phänotypen zu unterscheiden. Dieses Verfahren erweitert unser Manuskript Beschreibung und Charakterisierung eines Modells unter Verwendung einer zweischichtigen Hydrogel, von PEG-Fibrin und Kollagen zusammen, um gleichzeitig Co-differenzieren Fettgewebe gewonnene Stammzellen ¹.

Zusammenfassung

Natürliche Polymere im Laufe der Jahre haben mehr Bedeutung wegen ihrer Biokompatibilität und Host-Fähigkeit, mit Zellen in vitro und in vivo interagieren gewonnen. Ein Forschungsgebiet, das Versprechen hält in der regenerativen Medizin ist die kombinatorische Verwendung von neuartigen Biomaterialien und Stammzellen. Eine grundlegende Strategie im Bereich des Tissue Engineering ist die Verwendung von dreidimensionalen Gerüst (zB dezellularisiert extrazellulären Matrix, Hydrogele, Mikro / Nanopartikel) zum Richten Zellfunktion. Diese Technologie wurde von der Entdeckung, dass die Zellen entwickelt ein Substrat, auf dem sie anhaften können müssen, proliferieren und drücken ihre differenzierten zelluläre Phänotyp und Funktion ^2-3. In jüngerer Zeit wurde auch festgestellt, dass Zellen nicht nur diese Substrate für die Einhaltung, sondern auch interagieren und unter dem Einfluss dieser Matrixsubstrat (zB extrazelluläre Matrix, ECM) ^4. Daher müssen die Zellen und Gerüsten eine gegenseitige Verbindung,dient dazu, Gewebe-Entwicklung, Organisation und ultimative Funktion zu kontrollieren. Fettgewebe gewonnene Stammzellen (ASC) sind mesenchymale, präsentieren nicht-hämatopoetischen Stammzellen im Fettgewebe, die Multi-Linie Differenzierung aufweisen können und dienen als leicht verfügbare Quelle von Zellen (dh vor der vaskulären Endothelzellen und Perizyten). Unsere Hypothese ist, dass aus Fettgewebe gewonnenen Stammzellen zu unterschiedlichen Phänotypen gleichzeitig einfach durch Co-Kultivierung ihnen in zweischichtigen Matrices ¹ gerichtet werden kann. Unser Labor ist auf die dermale Wundheilung konzentriert. Zu diesem Zweck haben wir einen einzigen zusammengesetzten Matrix aus den natürlichen Biomaterialien, Fibrin, Kollagen und Chitosan, die die Eigenschaften und Funktionen eines dermo-spezifischen Wundheilung ECM-Umgebung nachahmen kann.

Protokoll

1. Isolieren von aus Fettgewebe gewonnenen Stammzellen (ASC) ^{1, 5}

Hinweis: Alle Verfahren wurden bei Raumtemperatur durchgeführt, wenn nichts anderes angegeben ist.

1. Isolieren Ratte perirenalen und Nebenhoden Fettgewebe und wäscht mit sterilen gepufferten Salzlösung Hanks-Lösung (HBSS) mit 1% fötalem Rinderserum (FBS), wie zuvor beschrieben ^5. Diese Studie wurde in Übereinstimmung mit dem Tierschutzgesetz, die Umsetzung Tierschutzvorschriften und in Übereinstimmung mit den Grundsätzen des Leitfadens für die Pflege und Verwendung von Labortieren durchgeführt.
2. Hackfleisch und das Ge....

Diskussion

ASC werden aufgrund ihrer einfachen der Isolierung und die Fähigkeit, gegenüber verschiedenen Zelltypen differenzieren bekannt. Mit den Techniken, die in diesem Manuskript beschrieben, sind wir in der Lage, die Plastizität der ASC, indem diese Zellen auf mehrere Biomatrices gleichzeitig zu nutzen. Wie Zellen wandern weg von ihren CSM Basis und geben sie umgebenden extrazellulären Umgebung, nehmen die Zellen Cue vom Gerüst und kann entweder zu halten "Stammzell-Seins" (Kollagen) oder induziert in Richtung Kreis.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Name des Reagenz / Ausrüstung	Firma	Katalog-Nummer	Kommentare
Hanks Balanced Salt Solution (HBSS)	Gibco	14175	Verbrauchsmaterial
Fötalem Rinderserum	Hyclone	SH30071.03	Verbrauchsmaterial
Kollagenase vom Typ II	Sigma-Aldrich	C6685	Verbrauchsmaterial
70-um Nylonmaschenfilter	BD Biosciences	352350	Verbrauchsmaterial
100-um Nylon-Mesh-Filter	BD Biosciences	352360	Verbrauchsmaterial
MesenPRO Growth Medium-System	Invitrogen	12746-012	Verbrauchsmaterial
L-Glutamin	Gibco	25030	Verbrauchsmaterial
CaCl 2 · 2H 2 O	Sigma	C8106	Verbrauchsmaterial
T75 Zellkulturflasche	BD Biosciences	137787	Verbrauchsmaterial
Chitosan	Sigma-Aldrich	448869	Verbrauchsmaterial
Essigsäure	Sigma-Aldrich	320099	Verbrauchsmaterial
N-Octanol	Acros Organics	150630025	Verbrauchsmaterial
Sorbitan-Mono-Oleat	Sigma-Aldrich	S6760	Verbrauchsmaterial
Kaliumhydroxid	Sigma-Aldrich	P1767	Verbrauchsmaterial
Aceton	Fisher Scientific	L-4859	Verbrauchsmaterial
Ethanol	Sigma-Aldrich	270741	Verbrauchsmaterial
Trinitro Benzolsulfonsäure	Sigma-Aldrich	P2297	Verbrauchsmaterial
Salzsäure	Sigma-Aldrich	320331	Verbrauchsmaterial
Ethyl Ether	Sigma-Aldrich	472-484	Verbrauchsmaterial
8-um Gewebekulturplatte Einsätze	BD Biosciences	353097	Verbrauchsmaterial
1,5-ml Reaktionsgefäße	Fischer	05-408-129	Verbrauchsmaterial
MTT-Reagenz	Invitrogen	M6494	Verbrauchsmaterial
Dimethylsulfoxid	Sigma-Aldrich	D8779	Verbrauchsmaterial
Qtracker Zelle Labeling Kit (QTracker 655)	Molecular Probes	Q2502PMP	Verbrauchsmaterial
Typ 1-Kollagen	Travigen	3447-020-01	Verbrauchsmaterial
Natriumhydroxid	Sigma-Aldrich	S8045	Verbrauchsmaterial
12-well-Zellkulturplatten	BD Biosciences	353043	Verbrauchsmaterial
Fibrinogen	Sigma	F3879	Verbrauchsmaterial
Thrombin	Sigma	T6884	Verbrauchsmaterial
Benztriazol Derivative von Polyethylen	Sunbio	DE-034GS	Verbrauchsmaterial
Tris-Puffer Tablet (pH 7,6)	Sigma	T5030	Verbrauchsmaterial
Zentrifugieren	Eppendorf	5417R	Equiicklung
Orbitalschüttler	New Brunswick einem wissenschaftlichen	C24	Ausrüstung
Befeuchteten Inkubator mit Air-5% CO 2	Thermo Scientific	Modell 370	Ausrüstung
Kopfrührer	IKA	Visc6000	Ausrüstung
Magnetrührer	Corning	PC-210	Ausrüstung
Vakuumexsikkator	-	-	Ausrüstung
Particle Size Analyzer	Malvern	STP2000 Spraytec	Ausrüstung
Wasserbad	Fisher Scientific	Isotemp210	Ausrüstung
Spektrophotometer	Beckman	Beckman Coulter DU 800UV/Visible Spektralphotometer	Ausrüstung
Wirbel	Diagger	3030A	Ausrüstung
Mikroplatten-Reader	Molecular Devices	SpectraMax M2	Ausrüstung
Licht / Fluoreszenz-Mikroskop	Olymp	IX71	Ausrüstung
Konfokalmikroskop	Olymp	FV-500 Laser-konfokalen	Ausrüstung
Rasterelektronenmikroskop	Carl Zeiss MicroImaging	Leo 435 VP	Ausrüstung
Transmissions-Elektronenmikroskop	JEOL	JEOL 1230	Ausrüstung