Gründung einer orthotopen Tumormodell Blase zu Antitumor-Wirkung von intravesikal geliefert Sarna und Überwachung des Tumorwachstums durch Ultraschall und Biolumineszenz-Bildgebung zu beurteilen.
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Methodenartikel
Einem orthotopen Blasentumor Modell und der Auswertung der intravesikalen Behandlung SÄRNA
* These authors contributed equally
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Wir stellen eine neue Methode zur Behandlung von Blasenkrebs mit intravesikal geliefert kleine aktivierende RNA (SÄRNA) in einem orthotopen Xenograft Maus Blasentumor Modell. Das Maus-Modell wird durch Katheterisierung der Harnröhre unter inhalativen Vollnarkose eingerichtet. Verätzung wird dann auf der Blasenschleimhaut mit intravesikale Silbernitratlösung, um die Blase eingeführt Glycosaminoglycan Schicht zu stören und erlaubt den Zellen zu befestigen. Nach mehrmaligem Waschen mit sterilem Wasser, die menschliche Blasenkarzinom KU-7-luc2-GFP-Zellen durch den Katheter in die Blase instilliert für 2 Stunden zu verweilen. Anschließende Wachstum von Blasentumoren wird bestätigt und überwacht durch In-vivo-Blase Ultraschall und Biolumineszenz Bildgebung. Die Tumoren werden dann mit intravesikal SÄRNA in Lipid-Nanopartikel (LNPs) formuliert behandelt. Das Tumorwachstum wird mit Ultraschall und Biolumineszenz überwacht. Alle Schritte dieses Verfahrens sind in der beigefügten Video demonstriert.
Protokoll
Verfahren mit tierischen Probanden wurden von der Institutional Animal Care und Use Committee (IACUC) an der University of California, San Francisco genehmigt worden.
1. Zellpräparation
- Das menschliche Blasenkarzinom-Zelllinie KU-7-luc2-GFP (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA) in RPMI-1640-Medium mit 10% fötalem Rinderserum und 50 ug / ml Gentamicin ergänzt war.
- Die Kulturen werden bei 37 ° C, 5% CO 2 mit Medien wechselt alle zwei bis drei Tage.
- Die Zellen wurden durch Trypsin-Verdau geerntet und unter Verwendung eines Hämozytometers. Eine einzelne Zellsuspension von 2 × 10 6 Zellen i....
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Diskussion
Wir präsentieren ein Protokoll für die Errichtung eines Maus-Xenograft orthotopen Tumormodell Blase durch intravesikale Behandlung der Tumoren mit LNP SÄRNA formuliert, die den Promotor von p21 CIP1/WAF1 (p21) Zielen für die Aktivierung der Transkription gefolgt. 2, 3 Die entstehenden Tumoren können bestätigt und mit Biolumineszenz-Bildgebung und Blase Ultraschall überwacht. Orthotopische Modellen überlegen sein kann intraperitoneale, subkutane oder intravenöse Modellen durch ein Milieu von Urin un.......
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Offenlegungen
LCL ist ein benannter Erfinder auf anhängige Patentanmeldungen in Bezug auf SÄRNA, die von der University of California San Francisco eingereicht worden sind und in Lizenz an Alnylam Pharmaceuticals.
Danksagungen
Diese Forschung wird von der AACR Henry Shepard Blasenkrebs Research Grant (09-60-30-LI) gefördert.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Name des Reagenzes | Firma | Katalog-Nummer | Kommentare (optional) |
| KU-7-Luc-GFP-Zellen | Caliper | 128091 | |
| Thymus Nacktmäusen (nu / nu) | Simonsen Laboratories | 6-7 Wochen alt | Sim: (NCR) nu / nu fisol |
| Ultraschall-Gerät | VisualSonics | Vevo 770 | RMV-704-Sonde |
| Biolumineszenz-Einheit | Caliper | IVIS Spectrum | |
| Exel safelet Katheter | Fischer | 14-841-21 | 24G x ¾ " |
| Silbernitrat | Sigma | S8157 | |
| Hamilton-Spritze | Hamilton CoHat Ihr Unternehmen | 80301 | |
| LNP-SÄRNA | Alnylam Pharmaceuticals |
Tabelle 1. Spezifischen Reagenzien und Geräte.
Referenzen
- Semple, S. C. Rational design of cationic lipids for siRNA delivery. Nature. 28, 172-176 (2010).
- Li, L. C. Small dsRNAs induce transcriptional activation in human cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United St....
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Nachdrucke und Genehmigungen
