Ein orthotopen Blasenkrebs-Modell für Gene Delivery Studies

Zusammenfassung

Implantation von Krebszellen in das Ursprungsorgan als nützliches präklinischen Modell, um neue Therapien zu evaluieren zu dienen. MB49-Blasenkarzinomzellen in der Blase nach intravesikale Instillation gezüchtet werden. Dieses Protokoll zeigt, Katheterisierung der Blase der Maus für die Zwecke der Tumorimplantation und adenoviraler Lieferung.

Zusammenfassung

Blasenkrebs ist die zweithäufigste Krebserkrankung des Urogenitaltraktes und neue therapeutische Ansätze, die eine Wiederkehr zu reduzieren und das Fortschreiten benötigt werden. Der Tumor-Mikroumgebung wesentlich beeinflussen können Tumorentstehung Antwort. Es ist daher oft wünschenswert, um Tumorzellen in das Organ, von dem sie stammen, zu wachsen. Dieses Protokoll beschreibt eine orthotope Modell von Blasenkrebs, in der MB49 murinen Blasenkarzinom-Zellen werden über Katheter in die Blase instilliert. Erfolgreiche Implantation der Tumorzellen in diesem Modell erfordert Unterbrechung des Schutz Glycosaminoglycan Schicht, die durch physikalische oder chemische Mittel erreicht werden können. In unserem Protokoll die Blase mit Trypsin vor der Zell Instillation behandelt. Katheterisierung der Harnblase kann auch zur Therapie liefern, sobald die Tumoren etabliert werden wird. Dieses Protokoll beschreibt die Bereitstellung eines adenoviralen Konstrukts, das ein Luciferase-Reporter-Gen exprimiert. Während our-Protokoll wurde für den Kurzzeitstudien optimiert und konzentriert sich auf die Gen-Lieferung, die Methodik der Maus Blasenkatheter hat breite Anwendungen.

Einleitung

Blasenkrebs ist die zweithäufigste Krebserkrankung des Urogenitaltraktes mit fast 75.000 Neuerkrankungen und 15.000 Todesfällen im Jahr 2012 ¹ erwartet. Hohe Rezidivraten erfordern lebenslanges Follow-up, die Blasenkrebs eines der teuersten Krebsarten behandelbar machen. Blasenkrebs, die die Muskelschicht eingedrungen hat, kann zu Leber-, Lungen-oder Knochen über das Lymphsystem metastasieren. Multimodale Therapie von fortgeschrittenen Tumoren führt nur zu 20-40% Überlebensrate nach 5 Jahren. Daher sind effektive Behandlungsstrategien zur Verringerung des Wiederauftretens und Progression der oberflächlichen Blasenkrebs sowie die Verbesserung der Therapieer....

Protokoll

Alle Verfahren, die Tiere sind überprüft worden und wurden von der Institutional Animal Care und Verwenden Ausschuss an der Medizinischen Universität von South Carolina genehmigt. Das Protokoll wurde unter USDA Kategorie D für Schmerzen zugelassen.

1. Zellimplantation

1. Zwei Tage vor der Durchführung des Verfahrens, Platte 1 x 10 ⁶ Zellen in MB49-T-25-Kolben. Verwenden DMEM high glucose, ergänzt mit 10% FBS (und Antibiotika, falls gewünscht). Ein Kolben ist ausreichend für jede Gruppe von bis zu fünf Mäusen, die betäubt und parallel implantiert wird.
2. Am Tag des Verfahrens, bereiten Trypsin zur Instillation du....

Ergebnisse

Hämaturie ist in fast alle Mäuse innerhalb von 8 Tagen nach der Implantation von 200.000 MB49-Zellen beobachtet. Wie in Abbildung 1 gezeigt, Blasengewicht mehr als verdoppelt von 34,7 ± 3,3 mg (Bereich 31 bis 37 mg, n = 4) in nontumor tragenden Mäusen auf 87,5 ± 19,2 mg (Bereich von 77 bis 120 mg, n = 10) bei Mäusen, die wurden mit MB49-Zellen implantiert. In Bezug auf die Gen-Lieferung, fanden wir, dass die Abbildung Mäuse 24 Stunden nach der Virus Einträufeln ergibt ein stärkeres Signal als nach 48 h .......

Diskussion

Die in diesem Protokoll beschriebenen primären Methodik ist Katheterisierung der Maus Blasen, die breite Anwendungen zur Instillation von Zellen oder der Agenten, für die lokale Zustellung in die Blase Epithel bestimmt hat. Die spezifische Protokoll oben skizzierten für Kurzzeitstudien (~ 10 Tage) optimiert. Implantieren der genauen Anzahl der Zellen ist kritisch, da eine höhere Anzahl von Zellen in schneller Tumorwachstum und möglicherweise Verlust von Tieren durch große Tumorbelastung führen. Mit 200.000 MB49-Zellen z.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Name des Reagenzes	Firma	Katalognummer	Kommentare
6-8 Wochen alte weibliche Mäuse	Jackson Laboratories	Stammname: C57BL/6J Lagernummer: 000664
Trypsin*	MediaTech	MT25-053-CI	Bezogen durch Fisher
DMEM*	MediaTech	MT10-017-CV	Gewonnen durch Fisher
> FBS	Hyclone	SH30071.03	Hitzeinaktiviert
T25-Kolben*	Corning Costar	Corning Nr.:3056 Fisher: 07-200-63	Gewonnen durch Fisher
MB49 Zellen	N/A	N/A	Von Dr. Boehle (siehe Referenz11)
Puralube Vet Salbe*	Pharmaderm	Henry Schein Company Nr.: 036090-6050059 Fisher: NC9676869	Bezogen durch Fisher
Enthaarungscreme: Veet	örtliche Apotheke
Gleitmittel: K-Y Jelly	lokale Apotheke
Katheter*	Exel International	Exel International Nr.:26751; Fisher: 14-841-21	Bezogen durch Fisher
Isofluran	Terrell	NDC 66794-011-25	Bezogen über die Krankenhausapotheke
1 ml TB-Spritzen mit Aufsteckspitze	Becton Dickinson	BD309659 Fisher:14-823-434
D-Luciferin	Gold Biotechnologies	L-123-1
Ad-CMV-Luc	VectorBiolabs	1000; Fordern Sie eine großtechnische Amplifikation und CsCl-Aufreinigung für die Verwendung in in vivo an	Infektionserreger, der eine BSL2-Eindämmung erfordert
> Steady-Glo  Luciferase Assay System	Promega	E2510 (10 ml), E2520 (100 ml) oder E2550 (10 x 100 ml)
*über mehrere Anbieter erhältlich
EQUIPMENT
Anästhesiesystem	E-Z Systeme, Euthanex Corporation	Anästhesiesystem: EZ7000 5-Port-Maus-Rückatmungsgerät: EZ109	Bezogen durch Fisher
> Xenogen IVIS 200	Caliper Life Sciences	http://www.caliperls.com/products/preclinical-imaging/ivis-imaging-system-200-series.htm
FLUOstar Optima	BMG Labtech	http://www.bmglabtech.com/products/microplate-reader/instruments.cfm?product_id=2