Wir beschreiben eine allgemeine Protokoll für die in-vivo-Zellortung mittels MRT in einem Mausmodell mit Ex-vivo-markierten Zellen. Ein typisches Protokoll für die Zellmarkierung, Bildaufnahme und Verarbeitung Quantifizierung ist inbegriffen.
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Methodenartikel
In-vivo-19 F-MRT für die Zellverfolgung
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
In-vivo-19 F-MRT ermöglicht quantitative Zell Tracking ohne Verwendung ionisierender Strahlung. Es ist eine nicht-invasive Technik, die auf den Menschen angewendet werden können. Hier beschreiben wir ein allgemeines Protokoll zur Zellmarkierung, Imaging und Bildbearbeitung. Die Technik ist anwendbar auf verschiedene Zelltypen und Tiermodellen, obwohl hier konzentrieren wir uns auf eine typische Mausmodell für die Verfolgung murine Immunzellen. Die wichtigsten Themen für die Markierung von Zellen beschrieben werden, da diese die für alle Modelle. Ähnlich sind Schlüsselabbildungsparameter aufgeführt, obwohl die Details werden in Abhängigkeit von dem MRI-System und den einzelnen Setup variieren. Schließlich sind wir ein Bildverarbeitungsprotokoll für die Quantifizierung. Variationen für diese und andere Teile des Protokolls sind in der Diskussion Abschnitt bewertet. Bezogen auf die hier beschriebenen Einzelheiten des Verfahrens, muss der Benutzer das Protokoll für jeden spezifischen Zelltyp, Zell Etikett Tiermodell und Bilddarstellungsaufbau anpassen. Beachten Sie, dass die protocol können auch für den menschlichen Gebrauch geeignet sein, solange die klinische Beschränkungen erfüllt sind.
Einleitung
In-vivo-Zellverfolgung ist wesentlich für die Optimierung und Überwachung von Zelltherapeutika 1. Aufgrund der nicht-invasiven Natur, bietet hervorragende Möglichkeiten, um Bild Zellen in vivo zu überwachen. Magnetic Resonance Imaging (MRI) ist unabhängig von ionisierender Strahlung und ermöglicht eine überlegene Bildauflösung und der intrinsischen Weichteilkontrast. MRT-basierte Tracking-Zelle bereits klinisch verwendet worden, um dendritischen Zellen bei Melanompatienten 2 folgen. Herkömmlichen klinischen MRI auf dem 1 H-Kern, in der Mobil Wasser, die in Geweben durchgeführt. Es ist auch möglich, auf andere aktive ....
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Protokoll
Hinweis: Alle Experimente und Verfahren, die Tiere müssen in Übereinstimmung mit relevanten ethischen Richtlinien durchgeführt werden und mit den üblichen Tierpflege und humanen Anforderungen entsprechen.
1. Zellmarkierung (Standard-Protokoll mit Coinkubation)
- In 19 F-Label 8 bis unreifen DCs in einer Konzentration von 4 mg/10 6 Zellen (in 2 ml Medium). Vorsichtig schwenken zu mischen.
- Inkubieren Sie die Zellen mit dem Label für 3 Tage vor Reifung und Ernte der DCs.
- Sammeln Sie die DCs und entfernen Sie überschüssiges Etikett durch Waschen bei mindestens 3x in PBS. Zählen Sie....
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Ergebnisse
Hier zeigen wir die Ergebnisse für ein typisches Protokoll die die Übertragung des 19 F-markierten Zellen zu einer Homing-Lymphknoten. Fig. 2 zeigt ein 19 F-NMR-Spektrum von 10 6 Zellen markiert mit einem TFA Referenz. Der Bilddarstellungsaufbau wurde wie in dem Protokoll (Fig. 3) beschrieben durchgeführt. Für die in vivo-Bildgebung verwendeten wir einen Referenz bestehend aus einem abgedichteten Zylinder des gleichen Etiketts für die Zellen zwi.......
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Diskussion
Die hier vorgestellte Protokoll beschreibt die allgemeine Vorgehensweise für die in-vivo-19 F-MRT Zellverfolgung. Trotz der beschriebenen Co-Inkubation Verfahren gibt es mehrere verschiedene Protokolle für die Markierung von Zellen mit einem 19 F enthält. Jedoch ist die Co-Inkubation häufig verwendet und kann durch Zugabe von Transfektionsmittel 6 optimiert werden zB. Die tatsächliche Zellmarkierungsprotokoll wird vom Zelltyp abhängig. Nur Tastenbeschriftung Schritte we.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben keine Interessenkonflikte offen zu legen.
Danksagungen
Wir möchten Nadine Henn und Arend Heerschap für ihre wertvolle Unterstützung bestätigen. Diese Arbeit wurde von der niederländischen Institut für Regenerative Medizin (NIRM, FES0908), der EU-FP7-Programm ENCITE (HEALTH-F5-2008-201842) und TargetBraIn (HEALTH-F2-2012 bis 279017), einen Zuschuss von der Volkswagen-Stiftung (unterstützt I/83 443), der niederländischen Organisation für wissenschaftliche Forschung (VENI 700.10.409 und 917.76.363 Vidi), ERC (Advanced Grant 269019) und der Radboud Universität Nijmegen Medical Centre (AGIKO 2008-2-4).
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| REAGENTS | |||
| PBS | Sigma-Aldrich | MFCD00131855 | |
| TFA | Sigma-Aldrich | 76-05-1 | |
| Ketamin (Ketavet) | Pfizer | 778-551 | |
| Xylazin (Rompun) | Bayer | QN05 cm92 | |
| Ophtosan | Produlab Pharma | 2702 | Augensalbe |
| Materialname | |||
| MRT-Scanner | Bruker Biospec | ||
| NMR-Spektrometer | Bruker Biospec |
Referenzen
- Srinivas, M., et al. Imaging of cellular therapies. Adv. Drug Deliv. Rev. 62, 1080-1093 (2010).
- de Vries, I. J., et al. Magnetic resonance tracking of dendritic cells in melanoma patients for monitoring of cellular therapy. Nat. Biotechnol.
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Nachdrucke und Genehmigungen
