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Methodenartikel

Die Implantation von Fibrin Gel auf Maus Lung Lung spezifischen Angiogenese Studieren

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DOI:

10.3791/52012

21. Dezember 2014

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Die Rekapitulation der organspezifischen Mikroumgebung, die die lokale Angiogenese stimuliert, ist für eine erfolgreiche Regeneration von geschädigtem Gewebe unerlässlich. Dieser Bericht demonstriert eine neuartige Methode zur Implantation von Fibringelen auf die Lungenoberfläche lebender Mäuse, um zu untersuchen, wie die lungenspezifische Mikroumgebung die Angiogenese und Alveolärregeneration bei erwachsenen Mäusen moduliert.

Zusammenfassung

Neue bedeutende Fortschritte in der Stammzellforschung und der Biotechnologie Techniken haben große Fortschritte bei der Nutzung von Biomaterialien zur Regeneration und Reparatur von Schäden in einfachen Gewebe in den orthopädischen und Zahn Feldern. Versuche, die Strukturen und Funktionen von komplexeren dreidimensionalen (3D) Organen wie Lunge regenerieren waren nicht sehr erfolgreich, da die biologischen Prozesse der Organregeneration wurden nicht gut erforscht. Es wird deutlich, dass die Angiogenese, die Bildung neuer Blutgefäße, spielt eine Schlüsselrolle bei Organregeneration. Die neu gebildeten Gefäßsystemen liefern nicht nur Sauerstoff, Nährstoffen und verschiedenen Zellbestandteile, die für die Organregeneration erforderlich sind, aber auch lehr Signale an die Regeneration von lokalen Geweben. Deshalb, um erfolgreich zu regenerieren Lungen bei einem Erwachsenen, ist es notwendig, die lungenspezifische Mikroumgebungen, bei denen Angiogenese Antriebe Regeneration lokalen Lungengewebe zu rekapitulieren. Obwohl Conventional in vivo Angiogenese-Assays, wie subkutane Implantation von extrazellulärer Matrix (ECM) -reiche Hydrogele (zB Fibrin oder Kollagengelen oder Matrigel - ECM Proteingemisch durch Engelbreth-Holm-Swarm-Maus-Sarkom-Zellen sezerniert), werden in großem Umfang genutzt, um das zu erforschen allgemeine Mechanismen der Angiogenese, lungenspezifischen Angiogenese ist nicht gut charakterisiert, weil Verfahren zur orthotope Implantation von Biomaterialien in der Lunge wurden nicht gut etabliert. Das Ziel des Protokolls ist es, eine einzigartige Methode einzuführen, um Fibrin-Gel auf der Lungenoberfläche von lebenden erwachsenen Maus implantiert werden, der eine erfolgreiche Wiederholung der Host Lunge abgeleitete Angiogenese innerhalb des Gels. Dieser Ansatz ermöglicht es Forschern, die Mechanismen, mit denen die lungenspezifischen Mikroumgebung steuert Angiogenese und alveoläre Regeneration in normalen und pathologischen Bedingungen zu erforschen. Seit implantierte Biomaterialien Release und liefern physikalischen und chemischen Signale zu benachbarten lung Gewebe kann Implantation dieser Biomaterialien auf kranken Lunge möglicherweise normalisieren die angrenzenden krankem Gewebe, so dass die Forscher neue Therapieansätze für verschiedene Arten von Lungenerkrankungen zu entwickeln.

Einleitung

Das übergeordnete Ziel dieses Protokolls ist es, ein Verfahren einzuführen, um Fibrin-Gel auf der Lungenoberfläche der erwachsenen Maus, die Forscher die molekularen Mechanismen der Lungenkreislauf und alveoläre Entwicklung charakterisieren können implantieren, und dieses Wissen, um biomimetische Materialien zu entwickeln in der Lage zu nutzen von rekapituliert physiologische Lungengefäß und alveoläre Bildung auf verschiedene Lungenkrankheiten zu behandeln.

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Protokoll

HINWEIS: Die in-vivo-Tierstudie wurde in strikter Übereinstimmung mit den Empfehlungen in der Bedienungsanleitung für die Pflege und Verwendung von Labortieren der National Institutes of Health durchgeführt. Das Protokoll wurde überprüft und von der Animal Care und Verwenden Committee von Boston Kinderkrankenhaus (Protokoll-Nummern: 13-10-2526R, 14-02-2568R) zugelassen. Alle Arzneistoffe in diesem Protokoll verwendet werden pharmazeutischer Qualität und diese Medikamente werden unter sterilen Bedingungen hergestellt.

1. Fibrin Gel Vorbereitung

  1. Bereiten Fibringel dass VEGF und bFGF enthält.
    1. Tau-Stammlösungen vo....

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Ergebnisse

Um zu untersuchen, ob Host Lungen abgeleiteten Gefäßbildung im Inneren der Biomaterialien auf die Lunge implantiert rekapituliert Fibringele mit großen angiogenetischen Faktoren VEGF und bFGF supplementiert (0, 10 und 100 ng / ml) wurden auf die Oberfläche von lebenden Maus-Lungen implantiert berichtet mit Matrigel 22. Fibringele 47, die diese angiogene Wachstumsfaktoren enthalten, wurden hergestellt, wie in 1a gezeigt. Nach Thorakotomie wurde ein kleiner Bereich der linken Lungeno.......

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Diskussion

Dieser Artikel stellt eine neue Methode zur Biomaterialien auf der Lungenoberfläche lebender erwachsener Mäuse zu implantieren. Mit diesem System wird die Host-Lungen-abgeleitete Angiogenese erfolgreich im Material rekapituliert. Dieses System ermöglicht es den Forschern, um Übersprechen zwischen den Endothelzellen zu erforschen, andere Zellen (beispielsweise Epithelzellen, mesenchymale Zellen, Immunzellen) und verschiedene ECM-Komponenten, die für die lokale Angiogenese 50-53 und alveolären Regenera.......

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Offenlegungen

Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden finanziellen Interessen haben.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde durch Mittel aus der American Heart Association (AM), US Department of Defense (BC074986) und Boston Kinderkrankenhaus Fakultät Career Development Fellowship (TM, PM) unterstützt. Die Autoren danken Amanda Jiang und Elisabeth Jiang für die technische Unterstützung.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Fibrinogen aus menschlicher PlazentaSigmaF4883Zur Herstellung von Fibringel
Thrombin aus RinderplasmaSigmaT9549Zur Herstellung von Fibringel
Rekombinante Maus VEGF 164R& D493-MVZur Ergänzung von Fibringel
Rekombinante Maus bFGFR& D3139-FBZur Ergänzung von Fibringergel Nagetier-Intubationsständer
Braintree Scientific INCRIS 100Zur Intubation
Faseroptische LichtquelleFisher Scientific12-565-35Zur Intubation
21 G Elastischer KatheterB.Braun4251652-02Zur Intubation
MiniVent VentilatorHarvard ApparatCGS-8009Für Beatmung
Stemi DV4 SteromikroskopFisher Scientific12-070-515Für chirurgische
Absobable NahtEthiconPDP304Chirurgisches Nahtmaterial
Antikörper gegen CD31BD Biosciences553370Immunhistochemie
Antikörper gegen AQP5AbcamAB78486Immunhistochemie
Antikörper gegen SP-BAbcamAB40876Immunhistochemie

Referenzen

  1. Donaldson, G. C., Seemungal, T. A., Bhowmik, A., Wedzicha, J. A. Relationship between exacerbation frequency and lung function decline in chronic obstructive pulmonary disease. Thorax. 57, 847-852 (2002).
  2. Lopez-Campos, J. L., Calero, C., Quintana-Gallego, E.

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Nachdrucke und Genehmigungen

Schlagwörter

Fibrin Gel ImplantationLungenangiogenese bei M usenvaskul re RegenerationAlveolarbildunghistologische Analyseimmunhistochemische Analysemechanische Beatmungendotracheale IntubationFibrinogen Thrombin Gelkonfokale Fluoreszenzbildgebung