Die chorioallantoische Membran (CAM) des Kükens ist immundefizient und stark vaskularisiert, was sie zu einem natürlichen in vivo Modell des Tumorwachstums und der Angiogenese macht. In diesem Protokoll beschreiben wir eine zuverlässige Methode zur Züchtung dreidimensionaler, vaskularisierter hepatozellulärer Karzinome (HCC) mit Hilfe des CAM-Assays.
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In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die Hühner-Chorioallantoismembran (CAM) beginnt am Tag 7 nach der Befruchtung zu entwickeln und reift bis zum Tag 12. Die CAM ist natürlich immungeschwächten und gefäßreiche, so dass es ein ideales System für die Tumorimplantation. Weiterhin enthält der CAM extrazelluläre Matrixproteine wie Fibronektin, Laminin, Kollagen, Integrin alpha (v) beta3 und MMP-2, so dass es ein attraktives Modell zur Tumorinvasion und Metastasenbildung zu untersuchen. Wissenschaftler haben lange Vorteil der Physiologie des CAM durch Verwendung als ein Modell der Angiogenese gemacht. Vor kurzem hat der CAM-Assay wurde geändert, um als ein in vivo-Xenotransplantat-Modellsystem für verschiedene Krebsarten, die die Lücke zwischen Grundlagenarbeit in vitro und komplexere Tierkrebsmodellen überbrückt zu arbeiten. Der CAM-Test ermöglicht die Untersuchung von Tumorwachstum, Anti-Tumor-Therapien und pro-Tumor molekularen Wege in einem biologisch relevanten System, das sowohl kosten- und zeiteffektiv ist. Hier die Entwicklung von CAM xen beschreiben wirograft Modell des hepatozellulären Karzinoms (HCC) mit embryonalen Lebensraten von bis zu 93% und zuverlässigen Tumor nehmen, um das Wachstum von dreidimensionalen, vaskularisierten Tumoren führt.
Einleitung
Das Leberzellkarzinom (HCC) ist die 3. häufigste Ursache der Krebssterblichkeit in der Welt 1. Derzeit werden nur 30% der HCC-Patienten sind für potenziell kurative chirurgische Behandlungen 2 und systemische Chemotherapie nicht wirksam ist 3. Daher besteht ein dringender ungedeckten klinischen Bedarf nach neuen HCC-Therapien, und die Entwicklung von Modellsystemen für eine effiziente Prüfung von neuen Wirkstoffen. Hühnchen-Chorioallantois-Membran (CAM) Assay liefert eine reproduzierbare und kosteneffiziente und schnelle mittleren Durchsatz Verfahren zum Testen potentiellen Antitumormedikamenten in vivo.
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Protokoll
1. Egg Incubation
- Erhalten Sie 8 Tage alt spezifischen pathogenfreien befruchteten Eiern.
- Zeigen Eier in rotierenden Eierablage, gestempelt Enden nach oben zeigen, und setzen Sie den Drehkorb in einem Ei-Inkubator. Eier Inkubieren für 48 Stunden bei 36 ° C und 50% Luftfeuchtigkeit.
2. Löschen Sie die CAM und Öffnen der Eier
- Sammeln Eier aus Inkubator. Platz Eier im Eierregal, gestempelt Seite nach oben und bringen Sie zu Sterilbank.
- Schalten Sie die Zimmer und Kapuze Lichter.
- Halten Sie die gestempelt Ende Ei leicht, um das Ei Candler, um die Gefäßsystem des CAM sowie die Luftsack ....
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Ergebnisse
Repräsentative Abbildungen der wichtigsten Schritte in dem Protokoll werden hier gezeigt. 1A zeigt die Verwendung des candler um den sich entwickelnden Embryo, den Luftsack und das Gefäßsystem des CAM zu visualisieren. 1B-1C zeigen den Vorgang des Fallenlassens der CAM indem die beiden Löcher und dann Anlegen eines Unterdrucks unter Verwendung der Sicherheitskugel und 1D zeigt eine erfolgreich fiel CAM mit einer großen Luftblase unter dem Bleistift markierte Loch.
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Diskussion
Mehrere wichtige Schritte in diesem Protokoll wahrscheinlichste Konto für die verbesserte Lebensrate der Embryonen sowie erhöhte Zuverlässigkeit des Tumorwachstums. Fallenlassen der CAM weg von der Schale durch eine Saugwirkung auf den Luftsack ist weniger invasiv als andere bestehende Methoden (mit einer Nadel an Albumin aus dem Ei, stumpf, usw. zu entfernen). Mit einem sterilen Push-Pin, um die beiden kleinen Löcher für dieses Verfahren erforderlich zu schaffen, ist der schwierigste Teil des Protokolls. Mit zu viel Kr.......
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Offenlegungen
A.S. erhält eine Finanzierung von der Firma Advaxis Pharmaceutical zur Unterstützung einer von Prüfärzten initiierten klinischen Studie.
Danksagungen
A.S. wurde teilweise durch Zuschüsse der National Institutes of Health (NIH), des National Institute of Dental and Craniofacial Research (5R03DE021741-02) und des National Cancer Institute (1K08CA154963-01A1) unterstützt.
Das Howard Hughes Medical Institute hat M.L. über das HHMI Medical Research Fellows Program finanziert.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Premium Bruteier | Charles River | N/A | http://www.criver.com/files/pdfs/avian/av_c_spf_egg_price_list.aspx |
| Brutschränke | GQF | Hova-Bator 2362N | |
| Drehbare Eierschalen | GQF | 1611 Automatischer Eierwender | |
| Eierkerzen | Lyon | Hi-Power 950-070 | |
| Dremel 100 Rotationswerkzeug mit 15/16 Trennscheibe | Dremel | 100-N/7 | |
| Sterile Pinzette, Stecknadel, Sezierschere, Tesaband | |||
| Matrigel | BD Biosciences | 356234 | |
| Kryofläschchen, Außengewinde mit Silikonscheibe | Corning | 430659 | |
| Kollagenase aus Clostridium histolyticum | Sigma | C9891 |
Referenzen
- Sangiovanni, A., et al. Increased survival of cirrhotic patients with a hepatocellular carcinoma detected during surveillance. Gastroenterology. 126 (4), 1005-1014 (2004).
- Lopez, P. M., Villanueva, A., Llovet, J. M.
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Nachdrucke und Genehmigungen
