Knochen konditioniertem Medium: Vorbereitung und Bioassay

Summary

Wir beschreiben hier, wie man Knochen-konditionierten Medium (BCM) vorbereiten und testen ihre Aktivität in vitro.

Abstract

Autologe Knochentransplantate sind weit verbreitet in der MKG-Chirurgie, Orthopädie, Traumatologie und verwendet. Autologe Knochentransplantate nicht nur fehlenden Knochen zu ersetzen, sie unterstützen auch den komplexen Prozess der Knochenregeneration. Dieses günstige Verhalten des Autografts ist mit den drei Eigenschaften zugeschrieben: Osteokonduktivität, osteogenicity und Osteoinduktivität. Es besteht jedoch ein weiterer Aspekt: ​​Knochentransplantate setzen eine Vielzahl von Molekülen, einschließlich Wachstumsfaktoren, die mesenchymalen Zellen in der Knochenregeneration beteiligten Ziel kann. Die parakrine Eigenschaften von Knochentransplantaten in vitro durch die Verwendung von Knochen-konditionierten Mediums (BCM) untersucht werden. Hier präsentieren wir ein Protokoll, wie man Knochen-konditioniertes Medium von einheimischen Schweine kortikalen Knochen vorzubereiten und Knochen, die thermische Verarbeitung oder Entsalzung unterzogen. Zellen können direkt an BCM ausgesetzt oder auf Biomaterialien, wie Kollagen Membranen, die zuvor mit BCM getränkt ausgesät werden. Wir geben Beispiele für die in vitro bioassays mit mesenchymalen Zellen auf die Expression von TGF-β reguliert Gene. Die vorgestellten Protokolle sollten ermutigen, die parakrine Wirkung von Knochentransplantaten weiter enthüllen während die Knochenregeneration und öffnen Sie einen Pfad für die translationale Forschung auf dem weiten Feld der rekonstruktiven Chirurgie.

Introduction

Autologem Knochen wird häufig eingesetzt, um Mängel, die als Folge der Fehlbildung, resektive Chirurgie, Rekonstruktive Unfallchirurgie, und vor der Implantation ^1,2 aufgetreten brücken. Das Verständnis der biologischen Grundlagen, wie Knochentransplantate unterstützen den Prozess der Konsolidierung Transplantat ist nicht nur Schlüssel, um zu verstehen, warum Autotransplantate gelten als der Goldstandard in der rekonstruktiven Chirurgie, ist es auch bionic der verbesserten Gestaltung von Knochenersatz ^3. Dennoch ist Transplantat Konsolidierung schneller mit autologem Knochen im Vergleich zu Knochenersatz ^4,5. Daher ist es zwingend not....

Protocol

1. BCM Vorbereitung

1. Erhalten Schweinekiefer aus dem lokalen Metzger so frisch wie möglich. Legen Sie die Mandibeln auf eine feste Oberfläche und lassen eine vollständige Dicke Klappe besondere Aufmerksamkeit, keine Weichteile lassen oder Periost bis auf die Knochen befestigt. Arbeiten Sie in einer sauberen Umgebung ohne die Notwendigkeit, im Rahmen des Flow-Haube arbeiten.
2. Sobald eine volle Dicke Klappe freigegeben wird, verwenden Sie einen Knochenschaber, um die Knochenspäne aus der bukkalen Seite zu ernten. Bitte beachten Sie, dass die Knochenschaber hat scharf sein. Griff fest das Knochenschaber und mit langen Bewegungen sammeln die Knochen. E....

Results

Knochen konditionierte Medium wird aus frischen Schweineknochenspänen hergestellt. Allgemeine Übersicht über den Prozess zu BCM vorzubereiten und Biomaterialien in Verbindung mit BCM Verwendung wird in Abbildung 1 und 2 dargestellt. Während des BCM Vorbereitung, ist es wichtig, große Knochenchips mit langen Bewegungen so kurz Bewegungen oder sehr kleine Knochensplitter zu erhalten können die Qualität des endgültigen BCM beeinflussen. ADM, PTX3, IL11, IL33, NOX4 und PRG4 (Abbildu.......

Discussion

Knochen-konditionierten Medium reflektiert die Freigabe Aktivität von Knochentransplantaten in den frühen Phasen der Knochenregeneration. Das hier beschriebene Protokoll angepasst ist, die Reaktion der verschiedenen Arten von Zellen in der Knochenregeneration zu studieren. Darüber hinaus kann das Protokoll, mit dem konditionierten Medium von verarbeiteten Knochen oder Knochen Füllstoffe verwendet werden. Die Methoden sind einfach durchzuführen und sich auf ein einfaches Konzept: der Faktoren aus verschiedenen einheimisc.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Schweine Mandibeln Local	bucher
Knochenschaber	Hu-Friedy	PPBUSE2/36
Antibiotika & Antimikotika	All life Technologies	15240-062
Kollagenmembranen (Bio-Gide)	Geistlich
Fetal Calf Serum	Invitrogen Corporation	16030074
DMEM	Invitrogen Corporation	21885-025
High Pure RNA Isolation Kit	Roche	11828665001
Transcriptor First Strang-cDNA-Synthesekit	Roche	4379012001
Primer	Microsynth
SYBR Grün (für Q-RT-PCR)Roche		4673484001
PBS	Roche	11666789001