Tissue Engineering umfasst oft in vitro-Expansion um Autotransplantate für die Geweberegeneration zu erstellen. In dieser Studie wurde ein Verfahren zur Gewebeexpansion, Regeneration, Rekonstruktion und in vivo wurde entwickelt, um die Verarbeitung von Zellen und biologischen Materialien außerhalb des Körpers zu minimieren.
Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.
Methodenartikel
Zerkleinerte Gewebe in komprimierter Collagen: Ein zellhaltigen Biotransplant für einstufige rekonstruktive Reparatur
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Konventionelle Techniken zur Zellexpansion und Transplantation von autologen Zellen für Tissue Engineering-Zwecke können in speziell ausgestatteten menschlichen Zellkultureinrichtungen durchgeführt werden. Zu diesen Methoden gehören die Isolierung von Zellen in Einzelzellsuspension und mehrere mühsame und zeitaufwändige Ereignisse vor der Transplantation zurück an den Patienten. Frühere Studien deuten darauf hin, dass der Körper selbst als Bioreaktor für die Zellexpansion und Regeneration von Gewebe verwendet werden könnte, um Ex-vivo-Manipulationen von Geweben und Zellen vor der Transplantation an den Patienten zu minimieren. Das Ziel dieser Studie war es, eine Methode zur Gewebeentnahme, Isolierung von kontinuierlichem Epithel, Zerkleinerung des Epithels in kleine Stücke und deren Einbau in ein dreischichtiges Biomaterial zu demonstrieren. Das dreischichtige Biomaterial diente dann als Transportvehikel, um die chirurgische Handhabung, den Austausch von Nahrung über das Transplantat und einen kontrollierten Abbau zu ermöglichen. Das Biomaterial bestand aus zwei äußeren Schichten aus Kollagen und einem Kern aus einem mechanisch stabilen und langsam abbaubaren Polymer. Das zerkleinerte Epithel wurde vor der Transplantation in eine der Kollagenschichten eingebaut. Durch das Zerkleinern des Epithelgewebes in kleine Stücke konnten die Stücke verteilt und dadurch die Vermehrung der Zellen angeregt werden. Nach der ersten Entnahme der Transplantate findet eine Zellexpansion und -reorganisation statt und die extrazelluläre Matrix reift, um das Einwachsen von Kapillaren und Nerven und die weitere Reifung der extrazellulären Matrix zu ermöglichen. Die Technik minimiert Ex-vivo-Manipulationen und ermöglicht die Zellentnahme, die Vorbereitung des Autotransplantats und die Transplantation an den Patienten als einfacher einstufiger Eingriff. In Zukunft könnte die Gewebeexpansion um eine 3D-Form im Körper selbst herum initiiert werden, je nach den spezifischen Bedürfnissen des Patienten. Darüber hinaus könnte die Technik in einer gewöhnlichen chirurgischen Umgebung durchgeführt werden, ohne dass hochentwickelte Zellkultivierungseinrichtungen erforderlich sind.
Einleitung
Die meisten Tissue Engineering Studien über Transplantation auf die Haut und Urogenitaltrakt umfassen autologe Zell Ernten von gesundem Gewebe und Zellexpansion in speziell ausgestatteten Zellkultivieranlagen 1,2.
Nach Zellexpansion werden die Zellen in der Regel für die spätere Verwendung gespeichert, wenn der Patient wird nach dem Autotransplantat zu erhalten. Stickstoffgefriergeräte erlauben die langfristige Lagerung bei niedrigen Temperaturen von -150 ° C oder niedriger. Der Prozess des Einfrierens muss, um vorsichtig und kontrolliert werden die Zellen nicht zu verlieren. Ein Risiko von Zelltod ist die Kristallisation des i....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Protokoll
Alle Tierprotokolle wurden von der Stockholm Ausschusses für Tiere im Voraus genehmigt und alle Verfahren entsprach den Vorschriften für Tiernutzung, sowie die einschlägigen Bundesgesetzen.
1. Tierversuchen
- Vorbereitung der Tiere für Chirurgie
- Bereiten Sie den OP-Tisch mit allen Materialien und Instrumente für den Betrieb erforderlich unter sterilen Bedingungen. Führen Sie die Operation ausschließlich unter sterilen Bedingungen das Risiko einer Infektion zu reduzieren und die Bedingungen der Überlebensrate der Operation zu optimieren.
- Schnell das Tier für 12 Stunden vor der Operation und messen ihr Gewicht. V....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Ergebnisse
Diese Studie stellt eine Methode, die zeigt, wie ein Biomaterial für die Transplantation mit Kunststoff-Kompression von Kollagen und zerkleinerte Gewebe zu erzeugen.
Blasenschleimhaut und die Haut und dann mechanisch zerhackt in kleine Partikel (Abbildung 3) geerntet werden. Durch plastische Kompression werden die gehackten Teilchen innerhalb des Verbundgerüst eines zentral angeordneten biologisch abbaubare Polymer eingearbeitet, die innerhalb der äußeren Schichten aus einem.......
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Diskussion
Diese Studie stellt eine einfach zu bedienende Ansatz zur Blasenwand Patches mit Eigengewebe für die Transplantation am OP-Tisch erzeugen. Die Flecken werden durch die Kombination eines biologisch abbaubaren Polymers Stricken in der Mitte und Kollagen mit und ohne zerkleinerte Gewebe in den Außenflächen in Kombination mit Kunststoff Kompression gebildet. Kunststoff-Komprimierung ist ein Verfahren bereits von anderen Autoren beschrieben und kann als eine schnelle Rückführung von Flüssigkeit aus Kollagengelen 12,13
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Offenlegungen
Die Autoren haben nichts offenzulegen.
Danksagungen
Die Autoren danken der Schwedischen Gesellschaft für Medizinische Forschung, der Promobilia Stiftung, der Kronprinzessin Lovisa Stiftung, der Freimaurerstiftung für Kinderwohlfahrt, der Schwedischen Gesellschaft für Medizin, der Solstickan Stiftung, dem Karolinska Institutet und dem Stockholmer Stadtrat für die finanzielle Unterstützung.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Silikonkatheter 10-Französisch | Vorbereitung des Tieres auf die Operation, Sektion 1 | ||
| DMEM 10x | Gibco | 31885-023 | Plastische Kompressionssektion 4 |
| 24-Well-Platten | Falcon | 08-772-1 | Plastische Kompressionssektion 4 |
| 3',3',5-Trijodthyronin | Sigma-Aldrich | IRMM469 | In vitroKultur; Abschnitt 5 |
| 4% PFA | Labmed Solutions | 200-001-8 | Immunzytochemie; Abschnitt 6 |
| 70% Ethanol | Histolab | Immunzytochemie; Abschnitt 6 | |
| ABC Elite-Kit: Biotin-Streptavidin-Nachweiskit | Vektor | PK6102 | Immunzytochemie; Sektion 6 |
| Absolutes Ethanol | Histolab | 1399.01 | Immunzytochemie; Abschnitt 6 |
| Adenin-Sigma-Aldrich | A8626 | In-vitroKultur; Abschnitt 5 | |
| Atropin 25 μ g/kg | Temgesic, RB Pharmaceuticals, Großbritannien | Vorbereitung des Tieres für die Operation, Sektion 1 | |
| Azaperon 2 mg/kg | Stresnil, Janssen-Cilag, Pharma, Österreich | Vorbereitung des Tieres auf die Operation, Sektion 1 | |
| Biosicherheitsstufe 2 Haube | Plastische Kompression; Abschnitt 4 | ||
| Blockierende Lösung: Normales Serum von derselben Spezies, in der der sekundäre Sekundärantikörper erzeugt wurde. | Vektor | Die Blockierungslösung hängt von der Herkunft des ersten Antikörpers ab. | Immunzytochemie; Abschnitt 6 |
| Buprenorphin 45 μ g/kg | Atropin, Mylan Inc, Canonsburg, PA | Vorbereitung des Tieres auf die Operation, Abschnitt 1 | |
| Carprofen 3 mg/kg | Rimadyl, Orion Pharma, Schweden | Vorbereitung des Tieres auf die Operation, Sektion 1 | |
| Chlorhexidingluconat | Hibiscrub 40 mg/ml, Regent Medical, England | Vorbereitung des Tieres für die Operation, Abschnitt 1 | |
| Choleratoxin | Sigma-Aldrich | C8052 | In vitroKultur; Sektion 5 |
| Coplin-Gefäß: Färbegefäß zum Kochen | Histolab | 6150 | Immunzytochemie; Abschnitt 6 |
| Rostfreie Form (33 mm x 22 mm x 10 mm), maßgeschneiderte | Kunststoffkompression; Sektion 4 | ||
| DMEM | Gibco | 3188-5023 | Kompression aus Kunststoff Sektion 4. Bleiben Sie auf Eis bei Verwendung in der plastischen Kompression |
| Epidermaler Wachstumsfaktor | Sigma-Aldrich | E9644< | em>In vitroKultur; Sektion 5 |
| Ethilon (nicht resorbierbares Monofilament für Hautnähte) | Ethicon | Chirurgie, Sektion 1 | |
| Fetales Rinderserum (FBS) | Gibco | 10437-036 | Plastische Kompression Sektion 4 |
| Pinzette (Adison mit Zahn) | Vorbereitung des Tieres auf die Operation, | ||
| Gaze (Gazin Müllkompresse) | Vorbereitung des Tieres auf die Operation, Abschnitt 1 | ||
| Ham's F12 | Gibco | 31765-027 | Plastische Kompression Abschnitt 4 |
| Hämatoxylin | Histolab | 1820 | Immunzytochemie; Sektion 6 |
| Feuchtekammer | DALAB | Immunzytochemie; Abschnitt 6 | |
| Hydrocortison | Sigma-Aldrich | H0888< | em>In vitroKultur; Abschnitt 5 |
| Wasserstoffperoxid-Lösung 30% | Sigma-Aldrich | H1009 | Immunzytochemie; Sektion 6 |
| Insulin | Sigma-Aldrich | I3536 | In vitroKultur; Abschnitt 5 |
| Isofluran | Isofluran, Baxter, Deerfield, IL | Vorbereitung des Tieres auf die Operation, Abschnitt 1 | |
| Lidocain 5 mg/ml | Xylocain, AstraZeneca, Schweden | Vorbereitung des Tieres auf die Operation, Abschnitt 1 | |
| Lucose 25 mg/ml | Baxter, Deerfield, IL | Vorbereitung des Tieres auf die Operation, Sektion 1 | |
| Markierungsstift | Pap-Stift Sigma-Aldrich | Z377821-1EA | Immunzytochemie; Abschnitt 6 |
| Medetomidin 25 μ g/kg | Domitor, Orion Pharma, Schweden | Vorbereitung des Tieres für die Operation, Sektion 1 | |
| Zerkleinerungsvorrichtung | Applied Tissue Technologies LLC | Aufbereitung von zerkleinertem Gewebe, Sektion 2 | |
| Monocryl (resorbierbares Monofilament) | Ethicon | Chirurgie, Sektion 1 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | S7653 | Immunzytochemie; § 6 |
| NaOH 1 N | Merck Millipore | 106462 | Plastische Kompressionssektion 4 und Zellkultur |
| Nylonnetz, 110 μ M Dicke Porengröße 0,04 sqmm | Plastische Kompression; Sektion 4 | ||
| Oculentum simplex APL: Salbe zum Augenschutz | APL | Vnr 336164 | Chirurgie, Sektion 1 |
| PBS | Gibco | 14190-094 | Plastische Kompression Sektion 4 |
| Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140-122 | Plastische Kompression Sektion 4 |
| Phenobarbiturat 15 mg/kg | Pentobarbital, APL, Schweden | Vorbereitung des Tieres auf die Operation, Abschnitt 1 | |
| PCL Gewirke | Plastische Kompression; Abschnitt 4 | ||
| Rattenschwanzkollagen | First LINK, Ltd, UK | 60-30-810 | Plastische Kompression Abschnitt 4, auf Eis halten |
| Skalpellklinge - 15 | Vorbereitung des Tieres auf die Operation, Abschnitt 1 | ||
| Rasierschere | Vorbereitung des Tieres auf die Operation, Abschnitt 1 | ||
| Edelstahlnetz, 400 μ M dicke Porengröße | Plastische Kompression; Sektion 4 | ||
| Sterile Handschuhe | Vorbereitung des Tieres auf die Operation, Sektion 1 | ||
| Sterile Kittel | Vorbereitung des Tieres auf die Operation, Sektion 1 | ||
| Sterile Abdeckungen | |||
| Sterilium | Bode Chemie HAMBURG | Vorbereitung des Tieres auf die Operation, Sektion 1 | |
| Nahtfaden Ethilon | Vorbereitung des Tieres auf die Operation Chirurgie, Abschnitt 1 | ||
| TE-Lösung (Antigen-Demaskierungslösung) besteht aus 10 mM Tris und 1 mM EDTA, pH 9,0 | 10 mM Tris/1 mM EDTA, pH-Wert einstellen auf 9,0 | ||
| Tiletamine Hypochlorid 2,5 mg/kg | Vorbereitung des Tieres für die Operation, Abschnitt 1 | ||
| Transferrin | Sigma-Aldrich | T8158 | In vitroKultur; Sektion 5 |
| Trizma Base, H2NC | Sigma-Aldrich | T6066 | Immunzytochemie; Abschnitt 6 |
| Vector VIP Kit: Enzym Peroxidase Substrat Kit | Vector | SK4600 | Immunzytochemie; Sektion 6 |
| Vicryl (resorbierbares Braded) | Ethicon | Surgery, Sektion 1 | |
| Tris-Puffer pH 7,6 (Waschpuffer) | TE-Lösung: 10x (0,5 M Tris, 1,5 M NaCl) herstellen durch Mischen: 60,6 g Tris (Trizma Base, H2NC(CH2OH)3, M=121,14 g/mol), 800 ml destilliertes Wasser hinzufügen, den pH-Wert auf 7,6 einstellen, 87,7 g NaCl zugeben und auf 1.000 ml mit destilliertem Wasser auffüllen. 1x mit destilliertem Wasser verdünnen. | ||
| X-tra solv (Lösungsmittel) | DALAB | 41-5213-810 | Immunzytochemie; Abschnitt 6. Verwendung unter dem Abzug |
| Zolazepam Hypochlorid | Zoletil, Virbac, Frankreich | Vorbereitung des Tieres auf die Operation, Abschnitt 1 | |
| Enthaarungswachsstreifen | Veet | Vorbereitung des Tieres auf die Operation, Abschnitt 1 | |
| Pentobarbital-Natrium | Lundbeck-Beendigung | , Abschnitt 3 |
Referenzen
- Rheinwald, J. G., Green, H. Serial cultivation of strains of human epidermal keratinocytes: the formation of keratinizing colonies from single cells. Cell. 6, 331-343 (1975).
- Fossum, M., Nordenskjold, A., Kratz, G. Engineering of multilayered uri....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Nachdrucke und Genehmigungen
