Die Durchführung von Virustests in einem BSL-4-Labor ist im Vergleich zur Arbeit in einem BSL-2-Labor aufgrund erforderlicher zusätzlicher Sicherheitsvorkehrungen aufwändiger. Hier präsentieren wir einen Überblick über Praktiken und Verfahren, die in einem BSL-4-Labor verwendet werden, um die ordnungsgemäße Verwendung der Biosicherheitswerkbank der Klasse II, die Abfallwirtschaft/-entsorgung und die Probenentnahme zu veranschaulichen.
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Methodenartikel
Sicherheitsvorkehrungen und Betriebsverfahren in einem (A) BSL-4-Labor: 2. Allgemeine Practices
In diesem Artikel
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Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die Arbeit in einem Biosicherheitsstufe 4 (BSL-4) Eindämmung Labor erfordert Zeit und viel Liebe zum Detail. Die gleiche Arbeit, die in einem BSL-2 Labor mit Nicht-Hoch Folge Krankheitserreger wird erheblich länger dauern in einem BSL-4-Einstellung erfolgt. Diese erhöhte Zeitbedarf ist aufgrund einer Vielzahl von Faktoren, die auf den Schutz der Forscher vom Labor erworbenen Infektionen, die Arbeitsumgebung vor möglichen Kontamination und der lokalen Gemeinschaft von möglichen Freisetzung von hoch Folge Krankheitserreger gerichtet sind. Innerhalb Labor wird die Bewegung durch Luftschläuche an die vorgeschriebene Sicherheitsanzüge Ganzkörper befestigt beschränkt. Zusätzlich Desinfektion von jedem Element, das von der Klasse II Biosicherheit Schränke (BSCs) entfernt wird, ist nicht erforderlich. Labor Spezialisten müssen in der Praxis der BSL-4 Labor geschult werden und eine hohe Kompetenz in den Fähigkeiten zeigen, müssen sie durchführen, sind. Der Schwerpunkt dieses Artikels ist die richtige Verfahren und Techniken zu umreißen Labor b, um sicherzustellen,iosafety und experimentelle Genauigkeit eines Standard viralen Plaque-Test als Beispiel Verfahren. Insbesondere arbeiten die richtigen Techniken sicher in einem BSL-4-Umgebung bei der Durchführung eines Experiments wird visuell hervorgehoben werden. Diese Techniken umfassen: die Einrichtung einer Klasse-II-BSC für Experimente, die richtige Reinigung der Klasse II BSC wenn Sie fertig sind Arbeiten, Abfallwirtschaft und sicheren Entsorgung von Abfällen in einem BSL-4 Labor erzeugt, und die Entfernung von inaktivierten Proben aus dem Inneren eines BSL- 4 Labor auf den BSL-2 Labor.
Einleitung
Als Sicherheit von Hoch Folge Erregern Laborpersonal Handhabung (keine Infektion Prophylaxe noch existieren Behandlungsmöglichkeiten) an erster Stelle steht, hat das US Department of Health and Human Services Richtlinien festgelegt für Anlagenbau und Best Practices für die sichere Durchführung von Arbeiten mit Krankheitserregern in der biomedizinischen und klinische Laboratorien aus einer Biosicherheit Perspektive 1. Durch Gesetze und Vorschriften, haben viele der Praktiken und Verfahren verbindlichen Anforderungen werden, die für die Arbeit mit diesen Erregern befolgt werden müssen. In den USA, Krankheitserreger, die sich leicht von Mensch zu Mensch übert....
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Protokoll
1. Labor Eintrag
- Sammeln Sie alle Lieferungen von einem BSL-2 Labor für das Experiment (zB Zellen, Medien und Verbrauchsmaterialien) vor dem Eintritt in das BSL-4 - Labor.
- Füllen Sie das BSL-4 Eingabeprozedur (skizziert im Detail in Bezug auf 7).
2. Herstellung einer Klasse II Biosicherheitswerkbank in der BSL-4-Labor
- Einmal in der BSL-4 Labor, sorgen für die tägliche interne Checkliste (Abbildung 1) abgeschlossen ist. Füllen Sie die Checkliste, wenn die Checkliste wurde bisher nicht gefüllt worden und zeigen an, welche Viren verwendet werden. Hat der Prüfliste ber....
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Ergebnisse
Nach korrekter Verfahren innerhalb der BSL-4 Labor sind von entscheidender Bedeutung für die sichere und effiziente Durchführung von Tests zu gewährleisten. Unter Bezugnahme auf die abgeschlossene tägliche interne Checkliste (Abbildung 1), sicherzustellen , Laborpersonal , dass das Gerät voll funktionsfähig ist. Die richtige Körperhaltung in der Mitte der BSC stellt sicher , dass das Experiment unter optimalen Luftströmungsbedingungen (Figur 2) durchgefü.......
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Diskussion
Die Arbeit in einem BSL-4 Labor erfordert viel Zeit und zusätzliche Aufmerksamkeit zum Detail. Jede Art von Arbeit in diesem Umfeld erfordert gut ausgebildete, gründlich und gewissenhaft Einzelpersonen. Die Standard-Virus-Plaque-Test liefert ein genaues Modell eines gemeinsamen Verfahrens für die mit hoher Folge Krankheitserregern in der BSL-4 Labor, wie der Test mehrere wichtige Konzepte beinhaltet, in dem Laborpersonal geschult werden müssen.
Die erste große Konzept ist die richtige Verwen.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts offenzulegen.
Danksagungen
Der Inhalt dieser Veröffentlichung spiegelt nicht unbedingt die Ansichten oder Richtlinien des US-Gesundheitsministeriums (DHHS) oder der Institutionen und Unternehmen wider, die mit den Autoren verbunden sind. Diese Arbeit wurde zum Teil durch den Hauptvertrag des Battelle Memorial Institute mit dem US-amerikanischen National Institute of Allergy and Infectious Diseases (NIAID) unter der Vertragsnummer finanziert. HHSN272200700016I. M.R.H., D.P., L.B., K.J. und J.W. führten diese Arbeit als Mitarbeiter des Battelle Memorial Institute aus. Subunternehmer des Battelle Memorial Institute, die diese Arbeit ausgeführt haben, sind: S.M. als Angestellter von MRI Global; M.G....
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Micro-Chem Plus | National Chemical Laboratories | 255 | |
| Ethanol | Fisher | BP2818500 | |
| 2 ml 96-Deep-Well-Platten | Fisher | 278743 | |
| 10 ml Serologische Pipette | Fisher | 13-678-11E | |
| 25 ml Serologische Pipette | Fisher | 13-678-11 | |
| 6-Well-Platten | Fisher | ||
| Crystal Violet | Sigma HT90132-1L | ||
| 10% neutral gepuffertes Formalin | Fisher | 22-050-105 | |
| Traganth | Fisher | 50-702-2000 | |
| 20 μ l Pipettenspitzen | Fisher | 21-402-550 | |
| 200 μ l Pipettenspitzen | Fisher | 21-402-561 | |
| 1.000 μmu; l Pipettenspitzen | Fisher | 21-402-581 | |
| DMEM | Lonza | 12-604Q | |
| FBS | Sigma | F2442-500mL | |
| Penicillin/Streptomycin | Lonza | 17-602E | |
| 2x EMEM | Quality Biological | 115-073-101 | |
| Pipettierer | Drummond | 4-000-101 | |
| 1.000 μ l Pipette | Rainin | L-1000XLS+ | |
| 200 μ l Pipette | Rainin | L-200XLS+ | |
| 12-Well, Mehrkanal 200 μ l Pipettierer | Rainin | L12-200XLS+ | |
| 8-Well, Mehrkanal 1.000 μm; l Pipettierer | Rainin | LA8-1200XLS | |
| Attest | Express Medical Supplies | ||
| Autoklav | Getinge | GEB 2404 AMB-2 | |
| Autoklaventasche | Fisher | 01-828E | |
| 2.000 ml Becher | Fisher | 02-591-10H | |
| Autoklavenablage | Fisher | 13-359-20B | |
| Pipettenablage | Fisher | 13-361-5 | |
| 37 ° C Inkubator | Fisher | WU-39321-00 | |
| Biohazard Dose | Rubbermaid Commercial | FG614500 RED | |
| Autoklavenband | Fisher | 15-903 | |
| Autoklavenstange | Made by IRF | Facility N/A | |
| Light Box | Fisher | S11552 | |
| Heißsiegelgerät | Fisher | NC9793612 | |
| Heißsiegelbeutel | Fisher | 01-812-25H | |
| Biohazard Beutel | Fisher | 01-828E |
Referenzen
- Biosafety in microbiological and biomedical laboratories. 5th edn. Chosewood, L. C., Wilson, D. E. , , U.S. Dept. of Health and Human Services. Washington, D.C. Available from: http://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/ (2009).
- Bioterrorism agents/diseases by category. , Centers for Disease Control and Prevention. Atlanta, GA, USA. Available from: http://emergency.cdc.gov/agent/agentlist-category.asp (2014).
- Executive order 13546 -- Optimizing the security of Biologi....
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Nachdrucke und Genehmigungen
Erratum
Formal Correction: Erratum: Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL-4 Laboratory: 2. General Practices
Posted by JoVE Editors on 12/05/2016. Citeable Link.
A correction was made to the authors section in: Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL-4 Laboratory: 2. General Practices
One of the authors names was corrected from:
Nicole Joselyn
to:
Nicole Josleyn
