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Methodenartikel

Rapid-Scan-Elektronenspinresonanz eröffnet neue Wege für Imaging Physiologisch Wichtige Parameter

9K Aufrufe

DOI:

10.3791/54068

26. September 2016

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Eine neue Elektronenspinresonanz (EPR) Verfahren, schnelle Scan - EPR (RS-EPR) wird für 2D - spektrale räumliche Abbildung gezeigt , die auf die traditionelle kontinuierliche Welle (CW) Technik überlegen ist , und eröffnet neue Orte für in - vivo - Bildgebung. Die Ergebnisse werden bei 250 MHz gezeigt, aber die Technik ist bei jeder Frequenz anwendbar.

Zusammenfassung

Wir zeigen ein überlegenes Verfahren zur 2D - spektral-räumlichen Abbildung von stabilen Rest Reportermoleküle bei 250 MHz unter Verwendung von Rapid-Scan - Elektronen-paramagnetischen-Resonanz (RS-EPR), die quantitative Informationen unter in vivo - Bedingungen auf die Sauerstoffkonzentration liefern kann, pH, Redox Status und die Konzentration der signal~~POS=TRUNC (dh OH •, NO •). Die RS-EPR-Technik eine höhere Empfindlichkeit, eine verbesserte räumliche Auflösung (1 mm) und kürzere Erfassungszeit im Vergleich zu der Standard-Dauerstrich (CW) -Technik. Eine Vielzahl von Phantom Konfigurationen wurden mit räumlicher Auflösung getestet, die 1 bis 6 mm variiert, und die spektrale Breite der Reportermoleküle im Bereich von 16 uT (160 mG) bis 5 mT (50 G). Ein Quer Schleife bimodale Resonator abkoppelt Anregung und Detektion, das Rauschen zu reduzieren, während der schnelle Scan-Effekt mehr Leistung ermöglicht vor der Sättigung Eingabe in das Spin-System sein, das EPR-Signal zu erhöhen. Diesführt zu einer wesentlich Signal-zu-Rausch-Verhältnis höher ist als in herkömmlichen Versuchen CW EPR.

Einleitung

Im Vergleich zu anderen medizinischen Bildgebungsverfahren, Elektronenspintomographie (EPRI) ist einzigartig in der Lage , um quantitativ Bild physiologischen Eigenschaften , einschließlich pH 1-3, pO 2 4-7 Temperatur 8, Perfusion und Lebensfähigkeit von Gewebe 9, Mikroviskosität und einfache Verbreitung von kleine Moleküle 10 und oxidativen Stress 11. Die Einschätzung der Leichtigkeit der Disulfid - Spaltung durch Glutathion (GSH) in Gewebe und Zellen 12,13 auf Redox - Status melden. Für in - vivo - Bildgebung, EPR im Frequenzbereich zwischen 250 MHz und 1 GHz g....

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Protokoll

1. Aufbau des Rapid-Scan-Coil-Treiber bei 250 MHz

  1. Berechnung von Rapid Scan Experimentelle Bedingungen
    Hinweis: Der wichtigste Parameter in RS-EPR ist Abtastrate, α, die das Produkt der Scanfrequenz und Scanbreite (Gleichung 3). Für schmale Scanbreiten, schnellere Abtastraten verwendet werden, und für eine breitere Sweep Breiten, langsamer Abtastraten verwendet werden. Die folgenden Anweisungen Schritt für Schritt durch den letzteren Fall und zeigen, wie bei den experimentellen Spulentreiber Parameter von 7 mT Wobbelbreite und 6,8 ​​kHz Abtastfrequenz zu gelangen.
    1. Bestimmen Sie die Resonatorbandbreite (BW Res). <....

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Ergebnisse

Das Produkt des Experiments ist ein Satz von Projektionen, die in zweidimensionale rekonstruiert werden (eine Spektrallinie, eine räumliche) Bilder mit einer falschen Farbskala Signalamplitude zu repräsentieren. Deep blue bezeichnet Baseline, wo kein Signal vorhanden ist, grün ist geringer Amplitude und Rot ist am höchsten. Scheiben entlang der x-Achse (spektrale Dimension) zeigen das Signal EPR (EPR-Übergang) auf einer Magnetfeldachse. Entlang der y-Achse (räumliche Abmessung), die Tren.......

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Diskussion

Rapid-Scan-Signale haben eine höhere Frequenzkomponenten als CW, und erfordern eine größere Resonatorbandbreite auf Linienbreite abhängig, Ruhezeiten und die Geschwindigkeit der S-Scans. Die Bandbreite für ein bestimmtes Experiment erforderlich ist, basierend auf der Linienbreite und der Abtastgeschwindigkeit des Magnetfeldes (Gleichung 2). In Abhängigkeit von den Relaxationszeiten der Sonde untersucht (T 2 und T 2 *), und die Abtastgeschwindigkeit können Schwingungen an der Hinterkante des Signals.......

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Offenlegungen

Wir haben nichts offenzulegen.

Danksagungen

Teilweise Unterstützung dieser Arbeit durch die NIH gewährt NIBIB EB002807 und CA177744 (GRE und SSE) und P41 EB002034 zu GRE, Howard J. Halpern, PI, und von der University of Denver wird dankbar anerkannt. Mark Tseytlin wurde von NIH R21 EB022775, NIH K25 EB016040, NIH / NIGMS U54GM104942 unterstützt. Die Autoren sind dankbar Valery Khramtsov, jetzt an der Universität von West Virginia, und Illirian Dhimitruka an der Ohio State University für die Synthese der pH-empfindliche TAM Radikale und Gerald Rosen und Joseph Kao an der University of Maryland für die Synthese des mHCTPO , PROXYL, BMPO und Nitronyl Radikale.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
4-Oxo-2,2,6,6-tetra(2H3)methyl-1-(3,3,5,5-2H4,1-15N)piperdinyloxyl (15N-PDT)CDN-Isotope M-232798 % Atom 15N, 98 % Atom D, Quebec
Kanada 4-1H-3-carbamoyl-2,2,5,5-tetra(2H3)methyl-3-pyrrolinyloxyl (15N-mHCTPO)N/AN/Asynthetisiert in U. Maryland und beschrieben in Referenz 29
3-Carboxy-2,2,5,5-tetra(2H3)methyl-1-(3,4,4-2H3,1-15N)pyrrolidinyloxyl (15N-Proxyl)N/AN/ASynthetisiert in U. Maryland und beschrieben in Referenz 25
4 mm Quarz EPR RohreWilmad Glass707- SQ-100M
4-oxo-2,2,6,6-tetra(2H3)methyl-1-(3,3,5,5-2H4)Piperdinyloxyl (14N-PDT)CDN-IsotopeD-232898% Atom D, Quebec Kanada
pH-empfindliches Tritylradikal (aTAM4)Ohio State UniversityN/ASynthetisiert an der Ohio State University Universität und beschrieben in Referenz 26
Kaliumphosphat, monobasischJ.T. Baker Chemicals1-3246
6 mm Quarz EPR RohreWilmad GlasQ-5M-6M-0-250/RB
8 mm Quarz EPR RohreWilmad GlasQ-7M-8M-0-250/RB
5-tert-Butoxycarbonyl-5-methyl-1-pyrrolin-N-oxid (BMPO)N/AN/A N/ASynthetisiert in U. Maryland und beschrieben in Referenz 30
WasserstoffperoxidSigma AldrichH1009 SIGMA30%
16 mm Quarz EPR-RohrWilmad Glass16-7PP-11QTZ
Mitteldruck 450 W UV-LampeHanovia679-A36Fairfield, NJ
L-Glutathion, reduziertSigma AldrichG470-5
NitronylNAN/ASynthetisiert in U. Maryland und beschrieben in Referenz 31
Natriumhydroxid J.T. Baker Chemikalien1-3146

Referenzen

  1. Bobko, A. A., et al. In vivo monitoring of pH, redox status, and glutathione using L-band EPR for assessment of therapeutic effectiveness in solid tumors. Magn. Reson. Med. 67 (6), 1827-1836 (2012).
  2. Utsumi, H., et al.

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Nachdrucke und Genehmigungen

Tags

Rapid-Scan-EPRIn-vivo-BildgebungSauerstoffkonzentrationpH-MessungRedoxstatusSignalmolekülespektrale räumliche BildgebungCross-Loop-ResonatorLeistungssättigungskurve