Summary
Жировой производные стволовые клетки (ИСС) легко изолированы и заготавливаемым от жира нормальных крыс. ASC листы могут быть созданы с использованием клеток лист инженерии и может быть пересажены в Цукер Диабетическая жирных крыс, экспонируется полный толщина кожице с подвергаются кости и затем покрытые бислой искусственной кожи.
Abstract
Искусственной кожи добилась значительных терапевтических результатов в клинической практике. Однако искусственной кожи лечение ран у больных сахарным диабетом с затрудненного кровотока или большие раны может быть продлен. На основе клеток терапии появились как новый метод для лечения диабетической язвы, и инженерии клетки лист повысилась эффективность трансплантации клеток. Ряд докладов полагают, что жировая производные стволовых клеток (ИСС), тип мезенхимальных стромальных клеток (MSC), exhibit терапевтический потенциал благодаря их относительное изобилие в жировой ткани и их доступность для коллекции по сравнению с MSCs из других тканей. Таким образом ИСС, как представляется, быть хорошим источником стволовых клеток для терапевтического использования. В этом исследовании ASC листы из эпидидимальных жировой жира нормальной Льюис крыс были успешно созданы с помощью температуры отзывчивым культуры блюда и нормальной питательной среды, содержащих аскорбиновую кислоту. ASC листы были пересажены в Цукер Диабетическая жирные (ZDF) крысы, крысы модель типа 2 диабета и ожирения, которые демонстрируют снижение заживление ран. Рана была создана на поверхности задней черепной, ASC листы были пересажены в рану, и бислой искусственной кожи была использована для покрытия листов. ZDF крыс, которые получили ASC листы лучше ранозаживляющие чем ZDF крыс без пересадки ASC листов. Этот подход был ограничен, потому что ASC листы чувствительны к сухих условиях, требующих поддержания рану влажной обстановки. Таким образом искусственная кожа была использована для покрытия листа ASC для предотвращения высыхания. Аллогенной трансплантации ASC листов в сочетании с искусственной кожи также могут быть применимы к другим неразрешимыми язвы или ожоги, например теми, которые наблюдались с периферийные артериальные заболевания и заболевания коллагена и могут назначаться пациентам, которые страдают от недоедания или при использовании стероидов. Таким образом это лечение может быть первым шагом в направлении улучшения лечебные варианты для диабетической раны исцеления.
Introduction
Численность населения диабетических пациентов растет по всему миру и достиг 400 миллионов в 2015 году1; примерно 15-25% пациентов с диабетом подвержены прогрессирование диабетической язвы нижней конечности2. Диабетические язвы нижней конечности неразрешимыми и могут потребовать длительного терапевтического с реабилитации учебных после полного выздоровления. В течение длительной терапии часто приводит к значительным снижением качества жизни пациентов. Таким образом необходимо разработать новые методы лечения, которые уменьшить или предотвратить обострение для лечения диабетической раны. Для оценки Диабетическая заживление ран, мы оптимизировали Диабетическая язва-заживление модель крыс, которая имитирует практических клинических условиях, и оцениваются ли пересадка жировой производные стволовых клеток (ASC) листы, используя ячейку листа инженерных Ускоренное заживление ран.
Мезенхимальные стромальные клетки (Майкрософт) (MSCs) демонстрируют превосходный потенциал для ускорения заживления ран из-за их способности самообновления, их иммуномодулирующие эффекты и их способности дифференцироваться в различные ячейки линий3. ИСС типа КБМ, полученные из жировой ткани, и они обладают рядом преимуществ перед MSCs, полученных от других тканей, в том числе их ангиогенных потенциал и паракринными деятельности4,5. Жировая ткань относительно обильные в человеческом теле, и его доступность позволяет коллекции с использованием минимально инвазивных процедур. Таким образом ИСС были использованы экспериментально для заживления ран приложения6,7.
Предыдущие доклады показали, что прямого впрыска одноклеточных MSC суспензий в районах вокруг раны могут ускорить заживления ран8,9. Однако несмотря на сообщения о ускорение заживления ран в моделях диабетической язвы после инъекции одноклеточных суспензий, выживание время пересаженные клетки на месте раны не ясно.
В этом исследовании мы применили инженерных ячейки листа с помощью температуры отзывчивым культуры блюда. Эти блюда имеют ковалентно связанными на их поверхности10температура гибкой полимерной N- isopropylacrylamide. Привитые полимерный слой позволяет температуры клеточной адгезии к или отрыв от поверхности культуры блюдо. Поверхность блюдо становится гидрофобные при 37 ° C, позволяя клеток присоединиться и размножаться, тогда как клетки спонтанно отсоединить от поверхности, когда она становится гидрофильным при температурах ниже 32 ° C. Культивируемых клеток могут быть собраны как смежные ячейки листа с нетронутыми в ячейке развязок и внеклеточной матрицы (ECMs) просто путем снижения температуры; Таким образом Протеолитические ферменты, которые повреждают ECM, например трипсина, являются не требуется11. Таким образом клетки лист можно сохранять соединения к ячейке инженерно -повысить эффективность трансплантации клеток.
Кроме того трансплантации клеток лист увеличивает выживаемость клеток по сравнению с инъекции клеток12. В этом протоколе Цукер диабетической жирных крыс (ZDF) были отобраны как тип 2 диабет и ожирение модель с замедленного заживления ран. ZDF крысы спонтанно развиваться ожирения на около 4 недель. Они затем разработка диабета типа 2 с ожирением между 8 и 12 недель возраста, в какой момент они демонстрируют гипергликемии, связанные с инсулин сопротивление, дислипидемии и гипертриглицеридемия13. Замедленного заживления, снижением кровотока в периферических кровеносных сосудов и диабетической нефропатии наблюдаются14,,1516. Кроме того ZDF крысы может быть подходящей моделью для изучения исцеление неразрешимыми кожные язвы, таких как диабетические язвы.
Различия между людьми и грызунов в заживление механизмы, связанные с анатомические различия в коже. Заживления ран в нормальных крыс основана на рану сужением, тогда как заживление ран в организме человека основывается на образование грануляционной ткани и эпителизация. Как правило раны шинирование, используемые в моделях грызунов помогает свести к минимуму спад раневой и позволяет для постепенного формирования грануляционной ткани17, хотя ран в nondiabetic крысы почти полностью закрыт путем сжатия. Однако, диабетической раны сужением в ZDF крыс нарушается, и ранозаживляющее прежде всего происходит через эпителизация и образование грануляционной ткани; Таким образом этот процесс является больше похож на человека ранозаживляющее14.
Диабетической раны с подвергаются кости после того, как хирургическая часто встречаются клинически. Предыдущие исследования изучили диаметром 12-мм полная толщина кожи раны на спине Атинические мышей ню18,19 и диаметром 10-мм полная толщина кожи раны на спине обычных мышей20. Разработка клинических модели для тяжелых диабетической раны, большие дефекты полный толщина кожи (15 x 10 мм2) с подвергаются кости и без надкостницы были созданы, как описано выше21, крыс, ожирения и диабета типа 2.
Крыса ASC (РЦР) листы из ИСС нормальной Льюис крыс были созданы путем аллогенной трансплантации ASC листов. В клинической практике аутологичной трансплантации является невозможным, потому что диабетических пациентов с язвами часто exhibit тяжелых осложнений диабета, например неконтролируемым высоким глюкозы в крови и высокое тело массы индексов и эти осложнения причиной ранозаживляющим расстройств увеличивают сложность получения жировой ткани из этих пациентов. Кроме того ИСС от животных с диабетом экспонат изменены свойства и нарушениями функции22. Таким образом протокол, представленные здесь описывает аллогенной трансплантации РЦАУ листов от нормальных крыс и применение искусственной кожи для диабетической крысы.
Бислой искусственной кожи, используемые в настоящем Протоколе предотвращает спонтанное сужением РАН, способствует синтезу новой соединительной матрицы и напоминает истинный дермы23. В настоящем Протоколе искусственной кожи помещается на листе РЦУР и фиксированной с нитки капроновые предотвратить рану сжатие или расширение, вытекающие из кожи свободные крыса. Кроме того искусственной кожи обеспечивает трехмерную основу для листов ASC, поддерживает влажной среде для пересаженных ASC листов и раны и защищает раны от инфекции и внешних сил. Наконец не клей Туалетная помещается на рану, чтобы защитить его от внешнего воздействия, поддерживать рану влажной среде и поглощать экссудатом.
РЦУР листа тонкий, гибкий и деформируемых и может выполняться перемещение получателей сайтов, таких как биение сердца24. Инженерии клетки лист был использован для восстановления различных тканей и может создавать лечебные эффекты25,26. ASC листы, которые демонстрируют клинический терапевтический потенциал может ускорить заживление раны многих видов. Кроме того аллогенной трансплантации ASC листов, в сочетании с применением искусственной кожи, могут быть применимы для лечения сложных язвы или ожоги, например теми, которые наблюдались в периферийные артериальные заболевания или заболевания коллагена, или они могут назначаться пациентам, которые страдают от недоедания или при использовании стероидов. Такой подход увеличивает эффективность трансплантации ИСС. Заживление ран ZDF крысы модель производит тяжелые раны условие, что напоминает человека процесс заживления и имитирует клинических условий в малогабаритных экспериментальных животных.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Этот протокол, пытались установить новый терапия на основе ячеек для неразрешимыми диабетической раны. Кратко (как показано на рис. 1) аллогенной РЦАУ листы были созданы из нормальных крыс с помощью инженерных ячейки листа и затем были пересажены с помощью бислой искусственной кожи на полный толщина кожи дефекта на диабетической крысы. Световой микроскоп изображения хорошим примером РЦАУ листа (рисунок 2A) и плохой пример РЦАУ листа (рис. 2B) показано на рисунке 2. Когда ИСС покрытием на новой культуры блюдо, блюдо должно быть медленно качались взад и вперед и влево и вправо в инкубаторе для достижения единообразного РЦАУ посева и равномерно густой РЦАУ листа (рис. 2A). Если РЦАУ не может быть равномерно придает и культивировали на поверхности культуры блюдо, лист не могут быть собраны как непрерывный ASC листа (рис. 2B). На рисунке 3 показано Возрастание листы, которые собрали как смежные ячейки листа при комнатной температуре, потому что ИСС равномерно были прикреплены к поверхности блюдо. Обычно РЦАУ листы могут быть обработаны с парой щипцов. При необходимости, передачи мембраны может использоваться для передачи ячеек листа от культуры блюдо к месту раны, например, если ячейка листа хрупкой и неустойчивой.
На рисунке 4 изображена ZDF крыс, используется как модель диабетической ранозаживляющее и трансплантации аллогенных РЦАУ листов, в сочетании с искусственной кожи. РЦУР лист мягкий и гибкий, регулируемый размер и способный распространяется на каждом углу сайта раны с парой щипцов (Рис. 4A-F). РЦУР лист покрытый дефект был также покрыта искусственной кожи (15 x 10 мм2) и зашивается с примерно 10 стежков с помощью 5-0 нейлон накладывать шов (рис. 4 g). Защищать рану, была сохранена в рану влажной среде и экссудаты были поглощены, не клей Туалетная (20 x 15 мм2) был помещен над искусственной кожи и 5-0 нейлон швы были применены (Рисунок 4I). Non клей Туалетная часто удаляется ZDF крыс в течение нескольких дней применения. Таким образом должны контролироваться крыс после пересадки. Как правило не клей Туалетная заменяется каждые 2 дня под общим наркозом. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Макроскопические фотографии в Рисунок 5 являются представитель результаты трансплантации РЦАУ листа. В нашем предыдущем исследовании средняя раневой области в группе РЦАУ лист трансплантации (Рисунок 5B) был значительно меньше, чем в контрольной группе (Рисунок 5A). Для элементов управления только искусственной кожи была использована для покрытия рану, без пересадки РЦАУ листа. Эти изображения были взяты 14-е сутки после создания раны (n = 6 в каждой группе)31.
Рисунок 1: Схема процедуры экспериментальной трансплантации. Схема процедуры экспериментальной трансплантации выступал с аллогенной крыса жировой производные стволовых клеток (РЦР) лист и искусственной кожи в крыса-заживление модели типа 2 диабета и ожирения. (A) крыса, которую жировой ткани хирургически был вырезан из нормальных крыс Льюис. РЦАУ были изолированы и посеян на 60 см2 культуры блюдо и культивировали при 37 ° C в 5% CO2 инкубатора для 7-8 дней. (B) РЦАУ были subcultured каждые 2-3 дня, и проход 3 РЦАУ были посеяны на температуру отзывчивым культуры блюдо диаметром 35 мм. Клетки были культивировали в полной среде, содержащей 16.4 мкг/мл L-Аскорбиновая кислота фосфат магния соли n гидрат (AA) при 37 ° C в 5% CO2 инкубатора для 7-8 дней. РЦАУ были собраны как непрерывный РЦАУ лист путем снижения температуры до 20 ° C. (C) РЦАУ листы пересадили на 15 x 10 мм2 полный толщина кожи дефект с подвергаются кости на головы крысы, выставляют диабет и ожирение (Zucker Диабетическая жирные (ZDF) крыс) используется в качестве модели, ранозаживляющим. (D) РЦАУ лист был на черепе, помещенной непосредственно над дефекта и покрыты) с 15 x 10 мм2 листа бислой искусственной кожи, который зашивается в место с 10 нейлон (5-0) швы. Диабет 2015; 64: 2723-2734; с разрешения. Диабет (c) copyright (2015), Американской ассоциации диабета. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2: Свет изображения микроскопа ИСС. Изображения в световой микроскоп ASC распространения к краю культуры блюд, без пробелов между ИСС. (A) РЦАУ лист с равномерную толщину во всех направлениях через 7 дней после начала культивирования (A). (B) РЦАУ листа без единой посева. Смежных РЦАУ лист не могут быть получены на 7 день после начала культивирования (B). Масштаб баров = 100 µm. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3: Изображения time-lapse РЦАУ статуи листа при комнатной температуре. Промежуток времени изображения статуса РЦАУ листа при комнатной температуре. РЦАУ на температуру отзывчивым культуры блюдо диаметром 35 мм спонтанно и постепенно отсоединяется от блюдо поверхности при комнатной температуре (примерно 20 ° C) и были собраны как непрерывный лист. (A) около 5 мин после переезда температуры отзывчивым культуры блюдо до комнатной температуры. (B) примерно 10 мин после переезда температуры отзывчивым культуры блюдо диаметром 35 мм до комнатной температуры. (C) приблизительно 20-30 мин после переезда температуры отзывчивым культуры блюдо до комнатной температуры. Это лист РЦАУ хорошего качества (C). (D-E) РЦАУ лист статус примерно 20-30 мин после переезда температуры отзывчивым культуры блюдо до комнатной температуры. Этот лист РЦАУ имеет среднее качество (D). (F-G) РЦАУ листы обычно обрабатываются с парой щипцов. Если ячейки листа является хрупкой и неустойчивой, мембрана может использоваться как леска для передачи ячеек листа от культуры блюдо к месту раны. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 4: Время серии изображений раны создание и РЦАУ трансплантации лист с искусственной кожи и Non клей заправкой
Время серии изображений рану создание и РЦАУ трансплантации лист с искусственной кожи и не самоклеющиеся повязки. (A) главы ZDF крыс были бритые с электрической бритвой. После бритья волос на теле, галочки (15 x 10 мм2) были составлены с использованием жирной гидрофобные пера. (B) дефект полный толщина кожи (15 x 10 мм2) был создан на голову наркотизированных крыс ZDF путем удаления подкожной ткани из эпидермиса к надкостницы. Кожи и подкожной ткани были вырезан с помощью скальпеля и надкостницы был удален с периостальная raspatory. С помощью Марли, смоченной стерильного физиологического раствора, давление был применен для остановки кровотечения после иссечения. (C) РЦАУ лист трансплантации. РЦУР лист был помещен над дефект непосредственно над черепа крыса, используя пару щипцов. (D-G) Регулировочный РЦАУ лист расширение размеру рану. РЦУР лист является гибким, регулируемые и может быть распространено на каждом углу сайта рану, с помощью пары щипцов. Для более широкого раны два или три гибких РЦАУ листы могут быть сложены. (H) ушивание искусственной кожи, охватывающих РЦАУ листа. Дефекта и пересаженные РЦАУ листа были покрыты искусственной кожи (15 x 10 мм2), который был зашивается с 10 стежков, используя швы нейлона 5-0. (я) Suturing не клей отделочные (20 x 15 мм2) к месту раны покрыта искусственной кожи. Для защиты рану, не клей Туалетная (20 x 15 мм2) был помещен над искусственной кожи с нейлон швами 5-0. Диабет 2015; 64: 2723-2734; с разрешения. Диабет (c) copyright (2015), Американской ассоциации диабета. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 5: макроскопических изображения Full толщина кожице. Макроскопические фотографии полный толщина кожи дефектов без пересадки РЦАУ листа (A) и с трансплантацией РЦАУ листа (B) 14 дней после создания раны. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Наиболее важных шагов для успешного культивирования листа РЦАУ заключаются в следующем: 1) температура должна поддерживаться на приблизительно 37 ° C во время культивирования на блюда температуры отзывчивым культуры. В процессе создания листа РЦУР каждая процедура была выполнена на термо табличке, 37 ° C, и каждый реагент был разогрет до 37 ° C для предотвращения клетки от спонтанно отсоединение от блюдо31. 2) получателя ZDF крысы должны контролироваться для предотвращения удаления не клей соус, который имеет решающее значение для успешной трансплантации РЦАУ листов. Если удаляется повязки, новый соус не клей должен применяться для предотвращения пересаженных ASC листы от отсоединение от раны сайта.
С помощью этой процедуры, РЦАУ листы обычно были получены в течение 5-7 дней после посева проход 3 клетки на температуру отзывчивым культуры блюда. Культуры время, необходимое для создания РЦАУ лист можно отрегулировать согласно плотность первоначальных клеток и время, в которой применяется полный питательной среды, содержащие AA. Если лист РЦАУ отсоединяется от блюдо во время культивирования клеток, РЦАУ листа должна быть переделана и дополнительные блюда в случае мобильный отряд.
Ограничения этого протокола заключаются в следующем: 1) строгие температуры управления должны применяться для поддержания Ориентировочная температура 37 ° C в течение всего процесса при использовании температуры отзывчивым культуры блюда. 2) после получения листа РЦУР, Специальные медицинские устройства должны использоваться для сохранения влажных условий, потому что лист РЦАУ чувствителен к сухих условиях. 3) послеоперационное управление, включая ежедневные наблюдения состояния получателя крыса, не требуется.
Клинически часто наблюдаются большие раны с подвергаются кости. Например трафик аварии травмы, ожоги, инфицированные раны и поврежденных или некротические раны после хирургическая может перерасти в большие раны с подвергаются кости. Здесь клиническая модель тяжелых ран был разработан с использованием дефект большой, полный толщина кожи с подвергаются кости крыс с типом 2 диабета и ожирения. Эта модель имеет потенциал, чтобы использоваться в качестве стандартной модели для оценки заживления ран в диабетической крысы.
Искусственной кожи является коммерчески доступных медицинское устройство для дефектов полный толщина кожи после хирургическая, и рекомбинантного основные фибробластический фактор роста (bFGF) широко используется для заживления ран способствовать ангиогенезу и гранулирования. Эти две процедуры были использованы для достижения значительных терапевтических результатов, даже для хронических ран, таких как диабетическая раны. Сообщается, что ИСС выделяют angiogeneic факторы роста28, например, Сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), фактора роста гепатоцитов (HGF) и bFGF, которые могли бы способствовать неоваскуляризация29,30 и ускорить заживление. Наши предыдущие исследования подтвердили, что ИСС постоянно выделяют эти факторы роста31. Таким образом ASC листы, в сочетании с искусственной кожи, имеют потенциал, чтобы использоваться в качестве нового терапевтического вариант для ускорения васкуляризации и ранозаживляющее31, и эти листы могут применяться для лечения многих видов неразрешимыми язвы или ожогов в человеческих клинических условиях в будущем.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Следующие Авторы раскрывают финансовых отношений, имеющих отношение к этой публикации: Теруо Окано является основателем и директором Совета клеток семян Inc., которая лицензирует технологии и патентов от Токио женщины медуниверситета, и Окано Теруо и Масаюки Ямато заинтересованных в клетки семян Inc. Токио женщины медуниверситета получает средства исследования от клеток семян Inc. Другие авторы заявляют, что они не имеют финансовых отношений, имеющих отношение к этой публикации.
Acknowledgments
Авторы благодарят доктор Юкико Koga отделение пластической и реконструктивной хирургии, Juntendo школа медицины при университете, за предоставление практических рекомендаций. Мы также благодарим г-н Hidekazu Murata диабетический центр Токио женщин медицинской школы медицины университета за отличную техническую поддержку. Это исследование было поддержано создание инновационных центров для передовых междисциплинарных исследований области программы проекта для развивающихся инновационных систем «ячейки листа ткани инженерного центра (CSTEC)» от министерства образования, культуры, спорта, науки и техники (МПКСНТ) из Японии.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| α-MEM glutamax | Invitrogen | 32571-036 | Carlsbad, CA |
| Fetal bovine serum (FBS) | Japan Bioserum Co Ltd. | S1650-500 | |
| Penicillin/streptomycin | Life Technologies | 15140-122 | |
| Collagenase A | Roche Diagnostics | 10 103 578 001 | Mannheim, Germany |
| 60 cm2 Primaria tissue culture dish | BD Biosciences | 353803 | Franklin Lakes, NJ |
| Dulbecco's Phosphate Buffer Saline (PBS) | Life Technologies | 1490-144 | |
| 0.25% Trypsin-ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA) | Life Technologies | 25200-056 | |
| L-ascorbic acid phosphate magnesium salt n-hydrate | Wako | 013-19641 | |
| 35-mm temperature-responsive culture dish (UpcellTM) | CellSeed | NUNC-174904 | Tokyo, Japan |
| Microwarm plate (MP-1000) | Kitazato Science Co., Ltd. | 1111 | |
| Rodent mechanical ventilator | Stoelting | #50206 | Wood Dale, IL |
| 4% isoflurane | Pfizer Japan | 114-13340-3 | Tokyo, Japan |
| Artificial skin (Pelnac®) | Smith & Nephew | PN-R40060 | Tokyo, Japan |
| Non-adhesive dressing (Hydrosite plus®) | Smith & Nephew | 66800679 | Known as Allevyn non-adhessing® in the United State |
| 5-0 nylon suture | Alfresa | EP1105NB45-KF2 | |
| 20 CELLSTAR TUBES | greiner bio-one | 227 261 | |
| 15 mL Centrifuge Tube | Corning Incorporated | 430791 | |
| 14 GOLDMAN-FOX PERIOSTEAL | Hu-Friedy | P14 | Chicago, IL |
References
- International Diabetes Federation. IDF Diabetes Atlas, 7 ed.. , International Diabetes Federation. Brussels, Belgium. Available from: http://www.diabetesatlas.org/ (2015).
- Boulton, A. J., Vileikyte, L., Ragnarson-Tennvall, G., Apelqvist, J. The global burden of diabetic foot disease. Lancet. 366 (9498), 1719-1724 (2005).
- Zannettino, A. C., et al. Multipotential human adipose-derived stromal stem cells exhibit a perivascular phenotype in vitro and in vivo. J Cell Physiol. 214 (2), 413-421 (2008).
- Kern, S., Eichler, H., Stoeve, J., Kluter, H., Bieback, K. Comparative analysis of mesenchymal stem cells from bone marrow, umbilical cord blood, or adipose tissue. Stem Cells. 24 (5), 1294-1301 (2006).
- Casteilla, L., Planat-Benard, V., Laharrague, P., Cousin, B. Adipose-derived stromal cells: Their identity and uses in clinical trials, an update. World J Stem Cells. 3 (4), 25-33 (2011).
- Zuk, P. A., et al. Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies. Tissue Eng. 7 (2), 211-228 (2001).
- Zuk, P. The ASC: Critical Participants in Paracrine-Mediated Tissue Health and Function. , (2013).
- Nie, C., et al. Locally administered adipose-derived stem cells accelerate wound healing through differentiation and vasculogenesis. Cell Transplant. 20 (2), 205-216 (2011).
- Shin, L., Peterson, D. A. Human mesenchymal stem cell grafts enhance normal and impaired wound healing by recruiting existing endogenous tissue stem/progenitor cells. Stem Cells Transl Med. 2 (1), 33-42 (2013).
- Okano, T., Yamada, N., Sakai, H., Sakurai, Y. A novel recovery system for cultured cells using plasma-treated polystyrene dishes grafted with poly(N-isopropylacrylamide). J Biomed Mater Res. 27 (10), 1243-1251 (1993).
- Yamato, M., et al. Thermo-responsive culture dishes allow the intact harvest of multilayered keratinocyte sheets without dispase by reducing temperature. Tissue Eng. 7 (4), 473-480 (2001).
- Sekine, H., et al. Cardiac cell sheet transplantation improves damaged heart function via superior cell survival in comparison with dissociated cell injection. Tissue Engineering Part A. 17 (23-24), 2973-2980 (2011).
- Kuhlmann, J., et al. Intramyocellular lipid and insulin resistance: a longitudinal in vivo 1H-spectroscopic study in Zucker diabetic fatty rats. Diabetes. 52 (1), 138-144 (2003).
- Slavkovsky, R., et al. Zucker diabetic fatty rat: a new model of impaired cutaneous wound repair with type II diabetes mellitus and obesity. Wound Repair Regen. 19 (4), 515-525 (2011).
- Oltman, C. L., et al. Progression of vascular and neural dysfunction in sciatic nerves of Zucker diabetic fatty and Zucker rats. Am J Physiol Endocrinol Metab. 289 (1), E113-E122 (2005).
- Coppey, L. J., Gellett, J. S., Davidson, E. P., Dunlap, J. A., Yorek, M. A. Changes in endoneurial blood flow, motor nerve conduction velocity and vascular relaxation of epineurial arterioles of the sciatic nerve in ZDF-obese diabetic rats. Diabetes Metab Res Rev. 18 (1), 49-56 (2002).
- Galiano, R. D., Michaels, V., Dobryansky, M., Levine, J. P., Gurtner, G. C. Quantitative and reproducible murine model of excisional wound healing. Wound Repair Regen. 12 (4), 485-492 (2004).
- Lin, Y. C., et al. Evaluation of a multi-layer adipose-derived stem cell sheet in a full-thickness wound healing model. Acta Biomater. 9 (2), 5243-5250 (2013).
- McLaughlin, M. M., Marra, K. G. The use of adipose-derived stem cells as sheets for wound healing. Organogenesis. 9 (2), 79-81 (2013).
- Cerqueira, M. T., et al. Human adipose stem cells cell sheet constructs impact epidermal morphogenesis in full-thickness excisional wounds. Biomacromolecules. 14 (11), 3997-4008 (2013).
- Koga, Y., et al. Recovery course of full-thickness skin defects with exposed bone: an evaluation by a quantitative examination of new blood vessels. J Surg Res. 137 (1), 30-37 (2007).
- Cianfarani, F., et al. Diabetes impairs adipose tissue-derived stem cell function and efficiency in promoting wound healing. Wound Repair Regen. 21 (4), 545-553 (2013).
- Matsuda, K., Suzuki, S., Isshiki, N., Ikada, Y. Re-freeze dried bilayer artificial skin. Biomaterials. 14 (13), 1030-1035 (1993).
- Miyahara, Y., et al. Monolayered mesenchymal stem cells repair scarred myocardium after myocardial infarction. Nat Med. 12 (4), 459-465 (2006).
- Iwata, T., et al. Cell sheet engineering and its application for periodontal regeneration. J Tissue Eng Regen Med. , (2013).
- Elloumi-Hannachi, I., Yamato, M., Okano, T. Cell sheet engineering: a unique nanotechnology for scaffold-free tissue reconstruction with clinical applications in regenerative medicine. J Intern Med. 267 (1), 54-70 (2010).
- Watanabe, N., et al. Genetically modified adipose tissue-derived stem/stromal cells, using simian immunodeficiency virus-based lentiviral vectors, in the treatment of hemophilia. B. Hum Gene Ther. 24 (3), 283-294 (2013).
- Kim, W. S., et al. Wound healing effect of adipose-derived stem cells: a critical role of secretory factors on human dermal fibroblasts. J Dermatol Sci. 48 (1), 15-24 (2007).
- Nakagami, H., et al. Novel autologous cell therapy in ischemic limb disease through growth factor secretion by cultured adipose tissue-derived stromal cells. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 25 (12), 2542-2547 (2005).
- Asahara, T., et al. VEGF contributes to postnatal neovascularization by mobilizing bone marrow-derived endothelial progenitor cells. EMBO J. 18 (14), 3964-3972 (1999).
- Kato, Y., et al. Allogeneic transplantation of an adipose-derived stem cell (ASC) sheet combined with artificial skin accelerates wound healing in a rat wound model of type 2 diabetes and obesity. Diabetes. , db141133 (2015).
